復方莪術油脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價

陳積 趙小倩 胡姍姍 馬彥巧 劉燕 譚丹楓 陳澤慧 田應彪

中圖分類號 R283 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）05-0615-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.05.10

摘 要 目的：制備復方莪術油脂質(zhì)體（ZTOC-LPS）并對其質(zhì)量進行評價。方法：以復方莪術油中莪術油（以吉馬酮表征）和維A酸的包封率及載藥量等為考察指標，篩選ZTOC-LPS的制備方法及處方中大豆卵磷脂（SPC）的加入量、脂質(zhì)中SPC-膽固醇（CH）質(zhì)量比、莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比、維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比、水浴溫度；并對最優(yōu)處方制備工藝所制脂質(zhì)體進行質(zhì)量評價和初步穩(wěn)定性考察。結(jié)果：優(yōu)選的制備方法為乙醇注入法；最優(yōu)處方制備工藝為每1 mL脂質(zhì)體中SPC 4 mg、SPC-CH質(zhì)量比3 ∶ 1、莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比1 ∶ 9、維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比1 ∶ 70、水浴溫度55 ℃。所制3批脂質(zhì)體中莪術油和維A酸的平均包封率分別為（64.63±1.00）%和（90.33±0.72）%，載藥量分別為（9.09±0.14）%和（1.43±0.02）%，粒徑為（257.41±7.58） nm，Zeta電位為（-38.77±0.81） mV，多分散系數(shù)為 0.10±0.04；離心加速試驗結(jié)果顯示脂質(zhì)體具有良好的物理穩(wěn)定性；脂質(zhì)體樣品在（4±2） ℃條件下放置 1 個月時各項考察指標均未發(fā)生明顯變化。結(jié)論：建立的制備方法簡單可行，所制脂質(zhì)體質(zhì)量符合要求，可為后續(xù)復方莪術油新劑型的研究提供參考。

關鍵詞 莪術油；維A酸；脂質(zhì)體；包封率；載藥量；制備工藝；質(zhì)量評價

ABSTRACT OBJECTIVE： To prepare zedoary turmeric oil compound liposomes （ZTOC-LPS） and evaluate its quality. METHODS： The preparation method of liposome， the addition amount of soybean phosphatidylcholine （SPC）， ratio of SPC to cholesterol （CH） in lipid， drug-lipid ratio of zedoary turmeric oil （ZTO）， drug-lipid ratio of tretinoin in formulation， and water bath temperature were screened using encapsulation efficiency and drug-loading amount of ZTO （represented by germacrone） and tretinoin as investigation indexes. Quality evaluation and primary stability investigation were conducted for liposomes prepared by optimal preparation technology. RESULTS： The optimal preparation method was ethanol injection method； The optimal preparation technology were SPC 4 mg in 1 mL lipid， the mass ratio of SPC to CH 3 ∶ 1， the ratio of ZTO to lipid 1 ∶ 9 ， the ratio of tretinoin to lipid 1 ∶ 70， water bath temperature of 55 ℃. Encapsulation efficiencies of ZTO and tretinoin were （64.63±1.00）% and （90.33±0.72）% in 3 batches of ZTOC-LPS， respectively. Drug-loading amount of ZTO and tretinoin were （9.09±0.14）% and （1.43±0.02）%， respectively. Particle size was （257.41±7.58） nm， Zeta potential was （-38.77±0.81） mV， PDI was 0.10±0.04； the results of centrifugal acceleration test showed that the liposomes had good physical stability. No obvious change was found in each investigation index of ZTOC-LPS that stored at （4±2） ℃ for 1 month. CONCLUSIONS： Established preparation technology is simple and feasible， the quality of the prepared ZTOC-LPS conforms to the requirements， and it can provide reference for the following research of ZTOC-LPS.

KEYWORDS Zedoary turmeric oil； Tretinoin； Liposomes； Encapsulation efficiency； Drug-loading amount； Preparation technology； Quality evaluation

銀屑病是一種常見的慢性炎癥皮膚疾病，已經(jīng)影響了全球2%～3%的人口[1-2]，外用藥物治療是其主要的治療方法之一。銀屑病的傳統(tǒng)治療主要有免疫抑制劑、類固醇激素、物理療法等方法，有如毒副作用及不良反應較多等缺點，故不易被患者接受。中醫(yī)藥治療銀屑病具有療效較好、副作用較少、復發(fā)率低等特點，在治療上具有一定的優(yōu)勢[3]。莪術油為中藥莪術經(jīng)水蒸氣蒸餾所得揮發(fā)油，有文獻[4]報道其可外用治療銀屑病，作用機制可能為抑制角質(zhì)形成細胞增殖、促進角質(zhì)形成細胞正常分化。維A酸可以調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細胞的終末分化，從而抑制其增殖[5]，為銀屑病的輔助治療藥物[6]。本課題組前期研究表明，兩藥合用治療銀屑病具有協(xié)同作用[7]。但兩者均具有水溶性差、穩(wěn)定性差的缺點，使其應用受到限制[8-9]。

脂質(zhì)體能較好地模擬生物膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，并具有生物膜的流動性和生物相容性，已較廣泛地用于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中[10-11]。以脂質(zhì)體作為藥物的載體，可增強藥物的水溶性、穩(wěn)定性及延長藥物在皮膚的局部滯留量和滯留時間，提高生物利用度，并可延長藥物作用時間，發(fā)揮長效緩釋作用[12-13]。因此，為了改善莪術油和維A酸的穩(wěn)定性、溶解性等，本研究嘗試將兩者共同包載在脂質(zhì)體中，制備成復方莪術油脂質(zhì)體（ZTOC-LPS），為后續(xù)制劑的研發(fā)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent-1260-DAD-ELSD 高效液相色譜（HPLC）儀（美國安捷倫科技公司）；85-2恒溫磁力攪拌器（金壇市城東新瑞儀器廠）；KQ-300VDE雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JEM-2100高分辨率透射電子顯微鏡（日本電子株式會社）；FiveEasy PlusTm FE28 pH計[瑞士梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；TG16W高速離心機、TD5M低速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）；超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；90 Plus PALS Zeta電位粒度分析儀（美國布魯克海文儀器公司）。

1.2 藥品與試劑

膽固醇（CH，批號：S0727A，純度：≥95%）、維A酸原料藥（批號：A0330A，純度>98.5%）、維A酸對照品（批號：M0512AS，純度：>98%）均來源于大連美侖生物技術有限公司；莪術油[江西雪松天然藥用油有限公司，批號：20160313，含吉馬酮8.1%（>7.5%），符合2015年版《中國藥典》規(guī)定]；吉馬酮對照品（成都普菲德生物科技有限公司，批號：160222，純度：≥98%）；大豆卵磷脂（SPC，上海太偉藥業(yè)有限公司，批號：20140703，純度：>95%）；甲醇、乙腈均為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吉馬酮含量測定方法的建立

以莪術油中吉馬酮為考察指標[14]，采用HPLC法測定ZTOC-LPS中吉馬酮的含量。

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（65 ∶ 35）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；紫外檢測波長：220 nm；進樣量：20 μL。

2.1.2 對照品貯備液的制備 精密稱取吉馬酮對照品適量，用甲醇溶解制成20 μg/mL的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 ZTOC-LPS破乳溶液：精密吸取“2.4.2”項下ZTOC-LPS混懸液1 mL，加入1 mL甲醇破乳，超聲（頻率：45 kHz，功率：150 W）10 min，搖勻、離心，即得。同法制備不含主藥的空白脂質(zhì)體破乳溶液。

2.1.4 方法專屬性考察 分別取空白脂質(zhì)體破乳溶液、吉馬酮對照品溶液、ZTOC-LPS破乳溶液20 μL進樣分析，考察方法的專屬性。結(jié)果吉馬酮峰形良好，其余物質(zhì)未見干擾。色譜詳見圖1。

2.1.5 標準曲線的制備 精密吸取吉馬酮對照品貯備液，加入甲醇制備成吉馬酮終質(zhì)量濃度分別為0.19、0.38、0.76、1.14、1.52、1.90、2.26 μg/mL的系列溶液，進樣分析，以峰面積（y）對吉馬酮的質(zhì)量濃度（x）進行線性回歸，得回歸方程為y=52.762x-0.744 5（r=0.999 8），結(jié)果表明，吉馬酮檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.19～2.26 μg/mL。

2.1.6 精密度、穩(wěn)定性、重復性和準確度試驗 按相關方法進行考察。在精密度試驗中，吉馬酮含量的RSD為1.04%（n=6）；在穩(wěn)定性試驗中，12 h內(nèi)吉馬酮含量的RSD為1.24%（n=6）；在重復性試驗中，吉馬酮含量的RSD為1.11%（n=6）；在準確度試驗中，吉馬酮平均加樣回收率為106.05%（RSD為1.68%，n=6）。

2.2 維A酸含量測定方法的建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-2%冰醋酸溶液（85 ∶ 15）[15]；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長：346 nm；柱溫：45 ℃；進樣量：20 μL。

2.2.2 對照品貯備液的制備 精密稱取維A酸對照品適量，用甲醇溶解制成100 μg/mL的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 同“2.1.3”項下方法。

2.2.4 方法專屬性考察 分別取空白脂質(zhì)體破乳溶液、維A酸對照品溶液、ZTOC-LPS破乳溶液 20 μL進樣分析，考察方法的專屬性。結(jié)果，維A酸峰形良好，其余物質(zhì)對其未見干擾。色譜詳見圖2。

2.2.5 標準曲線的制備 精密量取維A酸對照品貯備液，加入甲醇，制備成維A酸終質(zhì)量濃度分別為7.65、15.30、30.60、45.90、61.20、71.50、91.80 μg/mL的溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，以峰面積（y）對維A酸的質(zhì)量濃度（x）進行線性回歸，得到方程為y=146.07x-12.567（r=0.999 9），結(jié)果表明，維A酸檢測質(zhì)量濃度線性范圍為7.65～91.80 μg/mL。

2.2.6 精密度、穩(wěn)定性、重復性和準確度試驗 按相關方法進行考察。在精密度試驗中，維A酸含量的RSD為0.34%（n=6）；在穩(wěn)定性試驗中，12 h內(nèi)維A酸含量的RSD為0.49%（n=6）；在重復性試驗中，維A酸含量的RSD為0.11%（n=6）；在準確度試驗中，維A酸的平均加樣回收率為100.53%（RSD為0.80%，n=6）。

2.3 ZTOC-LPS包封率及載藥量的測定

2.3.1 游離吉馬酮和維A酸的回收率測定 取9支2 mL離心管，分成 3 組，各加入空白脂質(zhì)體 0.2 mL，再分別精密加入吉馬酮對照品貯備液 0.2、0.6、1.0 mL（或維A酸對照品貯備液 0.2、0.6、1.0 mL），用甲醇稀釋至刻度，15 000 r/min 離心（離心半徑為 6.2 cm，下同）30 min后，精密量取上清液 1 mL，用甲醇制備成質(zhì)量濃度為 0.40、1.20、2.00 μg/mL的吉馬酮溶液或10.00、15.00、25.00 μg/mL的維A酸溶液，進樣測定。結(jié)果，吉馬酮的平均回收率分別為100.20%、100.92%、99.99%（RSD分別為0.60%、0.15%、0.09%，n=3），維A酸的平均回收率分別為100.67%、100.24%、100.03%（RSD分別為0.44%、0.68%、0.12%，n=3）?？芍?，采用超速離心法分離脂質(zhì)體與游離藥物可行。

2.3.2 包封率和載藥量測定 選擇超速離心法來分離以測定藥物的包封率和載藥量[16]。精密吸取“2.4.2”項下ZTOC-LPS混懸液 1 mL，15 000 r/min離心 30 min，棄去上清液，取下層沉淀，加 1 mL甲醇溶解，HPLC法測定脂質(zhì)體包封吉馬酮的質(zhì)量濃度（c1）和維A酸的質(zhì)量濃度（c2）；另取ZTOC-LPS混懸液 1 mL用甲醇定容破乳，水浴超聲（頻率：45 kHz，功率：150 W）10 min，15 000 r/min離心10 min，HPLC法測定脂質(zhì)體混懸液中吉馬酮總質(zhì)量濃度c1總、維A酸的總質(zhì)量濃度c2總。計算2種主藥的包封率和載藥量。其中，莪術油包封率=c1/c1總×100%，維A酸包封率=c2/c2總×100%，莪術油載藥量=[脂質(zhì)體中吉馬酮藥物量/（脂質(zhì)體中藥物量+載體質(zhì)量）] ×100%，維A酸載藥量=[脂質(zhì)體中維A酸藥物量/（脂質(zhì)體中藥物量+載體質(zhì)量）]×100%。

2.4 ZTOC-LPS制備方法的篩選

2.4.1 薄膜分散法 按文獻[17]的條件及方法稱取適當比例的SPC、CH、莪術油和維A酸，以5 mL氯仿溶解，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上在35 ℃減壓除掉有機溶劑（轉(zhuǎn)速為60 r/min），形成均勻透明的薄膜，室溫真空干燥過夜除去殘余溶劑，然后加10 mL磷酸鹽緩沖溶液（PBS，pH=6.5），于 40 ℃恒溫水浴水化2 h，探頭超聲（頻率：20 kHz，功率：300 W）4 min，即得ZTOC-LPS混懸液，測定ZTOC- LPS包封率和載藥量，平行試驗3次。

2.4.2 乙醇注入法 按文獻[18]的條件及方法稱取適當比例的SPC、CH、莪術油和維A酸，溶于5 mL無水乙醇中，再取適量PBS置于磁力攪拌器上攪拌（恒溫水?。? mL將其緩慢勻速注入到50 ℃ PBS（pH=6.5）中。注入完畢后，繼續(xù)恒溫攪拌1 h，使乙醇完全揮發(fā)即得ZTOC-LPS混懸液，測定ZTOC-LPS包封率和載藥量，平行試驗3 次。同上稱取相同比例的SPC和CH，在相同條件下制備空白脂質(zhì)體混懸液。

2.4.3 逆相蒸發(fā)法 按文獻[19]的條件及方法稱取適當比例的SPC、CH、莪術油和維A酸，置于圓底燒瓶中，加入5 mL氯仿溶解，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度35 ℃，轉(zhuǎn)速為60 r/min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄膜。加入5 mL氯仿，溶解脂質(zhì)膜后，加入10 mL PBS（pH=6.5），水浴超聲30 min，即得到乳黃色均勻混懸液，將混懸液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸發(fā)，除去氯仿，即得ZTOC-LPS混懸液，測定ZTOC-LPS包封率和載藥量，平行試驗3次。

2.4.4 制備方法篩選結(jié)果 以包封率和載藥量為評價指標評價制備方法。結(jié)果，薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法所制脂質(zhì)體中2種藥物的包封率和載藥量均較低，乙醇注入法所制脂質(zhì)體包封率和載藥量相對較高，故以下選擇簡單易行的乙醇注入法制備ZTOC-LPS。篩選結(jié)果見表1。

2.5 單因素試驗篩選ZTOC-LPS制備處方及工藝

2.5.1 SPC加入量 固定莪術油-維A酸質(zhì)量比為 10 ∶ 1，脂質(zhì)中SPC-CH 質(zhì)量比為 3 ∶ 1，水浴溫度為50 ℃，其他因素不變，只改變SPC的投料量，使每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量分別為4、5、6、7、8 mg，考察SPC加入量對ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響。結(jié)果，莪術油包封率分別為39.67%、74.58%、55.21%、42.98%、29.21%；莪術油載藥量分別為6.17%、9.60%、6.07%、4.12%、2.48%；維A酸包封率分別為54.21%、87.69%、63.36%、47.84%、32.92%；維A酸載藥量分別為0.84%、1.13%、0.70%、0.46%、0.28%。表明SPC加入量對包封率和載藥量均有影響，當SPC加入量為 5 mg時2種主藥的包封率和載藥量最高。

2.5.2 脂質(zhì)中SPC-CH質(zhì)量比 固定莪術油-維A酸質(zhì)量比為10 ∶ 1，水浴溫度為50 ℃，SPC加入量為每1 mL脂質(zhì)體中5 mg，其他因素不變，只改變SPC-CH質(zhì)量比，使其分別為3 ∶ 1、4 ∶ 1、5 ∶ 1、6 ∶ 1、7 ∶ 1，考察SPC-CH質(zhì)量比對ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響。結(jié)果，莪術油包封率分別為50.66%、36.18%、28.03%、22.75%、16.18%，載藥量分別為5.57%、4.21%、3.38%、2.81%、2.03%；維A酸包封率分別為53.66%、39.38%、31.99%、25.61%、23.38%，載藥量分別為0.59%、0.46%、0.39%、0.32%、0.29%。表明當SPC-CH質(zhì)量比為3 ∶ 1時，2種主藥的包封率和載藥量均較高，所以下一步試驗中均固定SPC- CH質(zhì)量比為3 ∶ 1。

2.5.3 莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比 固定每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量為5 mg，脂質(zhì)中SPC-CH質(zhì)量比為3 ∶ 1，其他因素不變，只改變莪術油-脂質(zhì)（膜材，SPC+CH）的質(zhì)量比，使其分別為1 ∶ 7、1 ∶ 8、1 ∶ 9、1 ∶ 10、1 ∶ 11，考察莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比對ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響。結(jié)果，莪術油包封率分別為54.58%、58.73%、38.10%、32.74%、33.16%，載藥量分別為6.75%、6.45%、3.77%、2.94%、2.73%；維A酸包封率分別為52.18%、55.74%、43.13%、31.59%、38.36%，載藥量分別為0.56%、0.61%、0.48%、0.35%、0.43%。表明莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比對包封率和載藥量均有影響，當其為1 ∶ 8時2種主藥的包封率和載藥量均較高。

2.5.4 維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比 固定每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量為5 mg，脂質(zhì)中SPC-CH質(zhì)量比為3 ∶ 1，莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比為1 ∶ 8，其余因素不變，只改變維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比，使其分別為1 ∶ 50、1 ∶ 60、1 ∶ 70、1 ∶ 80、1 ∶ 90，考察維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比對ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響。結(jié)果，莪術油包封率分別為24.49%、41.56%、31.16%、29.09%、30.46%，載藥量分別為2.67%、4.55%、3.42%、3.20%、3.35%；維A酸包封率分別為26.36%、47.38%、35.59%、27.23%、25.98%，載藥量分別為0.46%、0.69%、0.45%、0.30%、0.25%。表明維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比對包封率和載藥量均有影響，當其為1 ∶ 60時2種主藥的包封率和載藥量均較高。

2.5.5 水浴溫度 固定每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量為5 mg，脂質(zhì)中SPC-CH質(zhì)量比為3 ∶ 1，莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比為1 ∶ 8，維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比為1 ∶ 60，其余因素不變，只改變水浴溫度，使其分別為40、45、50、55、60 ℃，考察水浴溫度對ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響。結(jié)果，莪術油包封率分別為35.32%、37.25%、30.91%、54.92%、31.24%，載藥量分別為3.88%、4.09%、3.40%、6.03%、3.43%；維A酸包封率分別為37.38%、41.99%、37.26%、80.99%、33.53%，載藥量分別為0.41%、0.46%、0.41%、0.89%、0.37%。表明水浴溫度對包封率有影響，當其為55 ℃時2種主藥的包封率和載藥量均較高。

2.6 處方設計與優(yōu)化選擇

2.6.1 正交試驗 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，篩選出 4 個主要考察因素，包括每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量（A）、莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比（B）、維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比（C）、水浴溫度（D），每個因素選取 3 個不同水平，以包封率和載藥量之和（S）為評價指標，設計L9（34）正交試驗法優(yōu)化ZTOC-LPS的制備工藝。因素與水平見表2，正交試驗設計與結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

2.6.2 結(jié)果分析 由表3和表4結(jié)果可知，以S莪術油為評價指標，各因素對包封率和載藥量的影響效果依次為 C>B>D>A，因素B、C對包封率和載藥量有顯著影響，最優(yōu)處方制備工藝為 A1B3C3D3。以S維A酸為評價指標，各因素對包封率和載藥量的影響效果依次為 D>C>B>A，其中因素B、C、D對包封率和載藥量有顯著影響，最優(yōu)處方制備工藝為 A1B3C3D3。以2種藥物的包封率和載藥量為指標篩選出的處方制備工藝均為A1B3C3D3，故選此為最優(yōu)制備工藝，即每1 mL脂質(zhì)體中SPC加入量為 4 mg，SPC-CH質(zhì)量比為3 ∶ 1，莪術油-脂質(zhì)質(zhì)量比為1 ∶ 9，維A酸-脂質(zhì)質(zhì)量比為1 ∶ 70，水浴溫度為55 ℃。

2.6.3 驗證試驗 以乙醇注入法按最優(yōu)處方及制備工藝制備 3 批處方量為10 mL的ZTOC-LPS，即精密量取SPC 40.00 mg、CH 13.33 mg、莪術油 5.93 mg、維A酸0.76 mg，其余操作同“2.4.2”項下方法（水浴溫度為55 ℃）；采用超速離心法分離脂質(zhì)體及游離藥物，測定其包封率和載藥量。結(jié)果，莪術油包封率和載藥量分別為（64.63±1.00）%、（9.09±0.14）%（n=3），維A酸包封率和載藥量分別為（90.33±0.72）%、（1.43±0.02）%（n=3）。表明所得最優(yōu)處方及制備工藝制備的ZTOC-LPS的工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

2.7 ZTOC-LPS的質(zhì)量評價

2.7.1 形態(tài) 用滴管吸取ZTOC-LPS 1滴置于碳銅網(wǎng)上，靜置 1 min 后用濾紙片吸干，再滴加 1%磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負染 1 min，自然揮干，透射電鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)并拍攝照片。結(jié)果，ZTOC-LPS粒徑外觀呈球狀或類球狀，結(jié)構(gòu)完整，為單室脂質(zhì)體。透射電鏡圖詳見圖3。

2.7.2 pH值 用pH計平行測定 3 批ZTOC-LPS混懸液的pH值，每批測定 3 次。結(jié)果，3批樣品的pH平均值分別為6.71、6.65、6.62，pH值均接近于6.5，而磷脂在pH為6.5時最穩(wěn)定[20]，故所制ZTOC-LPS較為穩(wěn)定。

2.7.3 粒徑與Zeta電位 取3批ZTOC-LPS混懸液適量，用電位粒度分析儀測定其粒徑和Zeta電位。結(jié)果，平均粒徑為（257.41±7.58） nm（n=3），多分散系數(shù)（PDI）為0.10±0.04（n=3），Zeta電位為（-38.77±0.81） mV（n=3）。表明ZTOC-LPS粒徑分布均勻，穩(wěn)定性較好。

2.7.4 脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性 采用離心加速試驗進行考察。取 2 mL ZTOC-LPS混懸液置于 10 mL離心管中，3 000 r/min（離心半徑為16 cm，下同）離心 15 min后，棄上層液體 1.4 mL，將剩余液體搖勻，用微量取樣器取 0.4 mL置于10 mL量瓶中，用蒸餾水定容，在 450 nm波長下測定濁度A。另精密量取未離心的脂質(zhì)體樣品 0.4 mL，同上操作，測定濁度A0。離心穩(wěn)定常數(shù)（KE）=│A-A0│/A0×100%。結(jié)果，3批樣品的KE分別為7.7、8.5、9.1，表明體系的物理穩(wěn)定性較好[21]，提示所制備的ZTOC-LPS的具有良好的物理穩(wěn)定性。

2.7.5 脂質(zhì)體留樣穩(wěn)定性 將2批ZTOC-LPS分別于（25±2） ℃和（4±2） ℃條件下放置，再分別于放置0、15、30 d取樣，觀察其外觀性狀，測定粒徑及包封率等穩(wěn)定性參數(shù)。結(jié)果，ZTOC-LPS在（25±2） ℃下放置30 d后包封率下降較快，粒徑及Zeta電位變化也較大，PDI上升也較快，且通過觀察發(fā)現(xiàn)有少量微粒沉降聚集。而放置于（4±2） ℃下的樣品的包封率、粒徑、Zeta電位及PDI結(jié)果均較優(yōu)，通過觀察未發(fā)現(xiàn)微粒有沉降聚集等現(xiàn)象，結(jié)果見表5。

3 討論

前期研究表明，莪術油與維A酸可通過局部起效而協(xié)同治療銀屑病，對于局部應用藥物，脂質(zhì)體不僅對其有良好的促滲透作用，而且還可以降低藥物的全身吸收，使藥物集中于病灶部位而對病變細胞發(fā)揮治療作用，從而提高其生物利用度，降低毒副作用[22]。因此，本試驗嘗試將莪術油與維A酸兩藥共同包封于脂質(zhì)體內(nèi)制成ZTOC-LPS。

在建立ZTOC-LPS中藥物含量測定方法時，筆者選擇吉馬酮（牻牛兒酮）為莪術油的含量測定指標，這是因為吉馬酮是2015年版《中國藥典》（一部）中莪術油及莪術藥材項下的主要質(zhì)量控制指標成分。包封率是評價脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的最重要指標，也是其能否發(fā)揮較普通制劑高效、低毒特點的關鍵[23]。由于超速離心法簡單、快速、易行，因此本試驗選擇超速離心法來分離脂質(zhì)體和游離藥物，再通過 HPLC法測定包封率，所得試驗結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

脂質(zhì)體的制備方法很多，如薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、乙醇注入法等，本試驗選用了 3 種傳統(tǒng)的制備方法分別制備ZTOC-LPS，以包封率和載藥量為評價指標進行評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)用乙醇注入法制備的脂質(zhì)體的包封率和載藥量較高，且該法條件溫和，操作簡單方便，廉價，不易使敏感藥物成分發(fā)生變性，可以避免使用有毒的有機溶劑。通過單因素試驗發(fā)現(xiàn)，影響ZTOC-LPS包封率和載藥量的影響因素有SPC的加入量、脂質(zhì)中SPC-CH質(zhì)量比、莪術油及維A酸與脂質(zhì)質(zhì)量比、水浴溫度。在此基礎上采用了正交試驗法對ZTOC-LPS的處方制備工藝進行優(yōu)化，主要考察了4個因素不同水平對藥物包封率和載藥量的影響，最終篩選出了最優(yōu)處方及制備工藝，再通過驗證試驗證明了篩選出的處方與制備工藝條件的穩(wěn)定性和可重現(xiàn)性。

粒徑大小是脂質(zhì)體質(zhì)量控制的關鍵之一，Zeta 電位是衡量荷電量的重要指標，是衡量脂質(zhì)體穩(wěn)定性的重要指標之一，PDI是脂質(zhì)體粒子分布均勻性的直觀呈現(xiàn)。所以本試驗對所制脂質(zhì)體的粒徑、Zeta電位和PDI進行了測定。結(jié)果表明，粒徑大小均勻，呈正態(tài)分布；表面荷負電，電位較高，表明脂質(zhì)在貯存時穩(wěn)定性更好，不易發(fā)生聚沉。以離心加速試驗評價了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，結(jié)果表明其具有良好的物理穩(wěn)定性。再考察了脂質(zhì)體的留樣穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)將所制樣品在（4±2） ℃條件下放置 1 個月，各項考察指標均未發(fā)生明顯變化，提示其放置于 4 ℃條件下穩(wěn)定性好。

本試驗成功地將莪術油與維A酸同時包封于脂質(zhì)體中制備成了復方脂質(zhì)體，所采用的處方與制備工藝簡單可行、重現(xiàn)性好、包封率和載藥量較高、穩(wěn)定性較好，可為后續(xù)復方莪術油新劑型的研究提供參考。

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（收稿日期：2017-06-12 修回日期：2017-09-04）

（編輯：劉 萍）