綠蘿快繁體系的建立

趙紅巖

【摘要】本實(shí)驗(yàn)分別以綠蘿的莖、腋芽為外植體在含有不同激素種類及濃度的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織的形成，并誘導(dǎo)不定芽的分化，建立綠蘿的快繁體系。結(jié)果顯示：（1）以莖段為外植體，在培養(yǎng)基MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.4mg/L+2，4-D 1.0mg/L上愈傷誘導(dǎo)率最高;（2）以腋芽（帶節(jié)的莖段）為外植體，在兩種培養(yǎng)基MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L和MS+6-BA 5.0mg/L+NAA 0.2mg/L上初代培養(yǎng)即可誘導(dǎo)不定芽長(zhǎng)分化。上述誘導(dǎo)獲得的愈傷組織和不定芽進(jìn)一步繼代培養(yǎng)，分別采用黑暗和光照處理，發(fā)現(xiàn)光照可以顯著促進(jìn)愈傷組織和不定芽的轉(zhuǎn)綠、增殖和分化。

【關(guān)鍵詞】組織培養(yǎng);快速繁殖體系;外植體;綠蘿

1 前言

綠蘿（Scindapsus aureus）為多年生常綠蔓性草本植物，單葉互生，葉廣橢圓形，蠟質(zhì)，暗綠色有光澤，有的鑲可附著它物向上攀援，莖節(jié)間有溝槽，莖枝萌發(fā)力強(qiáng)。枝條懸掛下垂，常用作柱式嵌著金黃色不規(guī)則斑點(diǎn)或條紋[1]，全緣，心形，秀雅壯觀。隨生長(zhǎng)年齡的增加，莖增粗，葉片亦越來(lái)越大。蔓長(zhǎng)數(shù)米，上有氣生根，或掛壁式栽培。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)使用的綠蘿（Scindapsusaureus）組培材料是在生長(zhǎng)旺盛的盆栽植株上切取的。取綠蘿的莖段、腋芽為外植體，進(jìn)行綠蘿的組織培養(yǎng)。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)

將剪取的新鮮的綠蘿材料用流水沖洗1h，再用0.1%升汞消毒10min。最后用無(wú)菌水沖洗5次，每次5min。

將消毒處理過的綠蘿莖段切成0.5cm小段接種于表1[2]所列配方的培養(yǎng)基中，;腋芽（帶節(jié)的莖段）的形態(tài)學(xué)上端朝上插于培養(yǎng)基中，不要插得太深，只要能立住不倒即可[3]。

以上接種好的外植體于25℃條件下暗培養(yǎng)，45d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織（不定芽）的誘導(dǎo)率，比較不同外植體愈傷組織（不定芽）的誘導(dǎo)狀況，以及相同外植體在不同PGR配比的培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)狀況。如表1所示。

2.2.2 繼代培養(yǎng)基的選擇及條件優(yōu)化

經(jīng)過45d的暗培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)基中愈傷組織（不定芽）的誘導(dǎo)情況，選出用于繼代培養(yǎng)的兩種配方的培養(yǎng)基為：1.MS+6-BA（3.0mg/L）+NAA（0.2mg/L）;2.MS+TDZ（0.2mg/L）。將長(zhǎng)出愈傷組織（不定芽）的外植體轉(zhuǎn)接到這兩種培養(yǎng)基中。接種好的愈傷組織（不定芽）置于暗處培養(yǎng)1周，之后分別采用黑暗和光照處理，25d后觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，比較經(jīng)黑暗處理和光照處理的愈傷組織（不定芽）的生長(zhǎng)情況有何異同。

3 結(jié)果分析

3.1 不同外植體愈傷組織的誘導(dǎo)狀況

將消毒處理過的莖段和腋芽分別接種到含不同激素配比的MS培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)45d后，各種類型的外植體都部分長(zhǎng)出愈傷組織，只是出愈（不定芽）率不同，外植體長(zhǎng)出愈傷組織（不定芽）的部位也不相同。莖段在與培養(yǎng)基接觸的切割面的邊緣長(zhǎng)愈傷，并且有膨大現(xiàn)象，有的也在上切割面的邊緣長(zhǎng)出愈傷;腋芽（帶節(jié)的莖段）從節(jié)處長(zhǎng)出不定芽，由莖段包裹著。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，腋芽作為外植體長(zhǎng)出不定芽率最高，可以達(dá)到100%，同時(shí)褐化率最低為零。莖段作為外植體出愈率也較高，所以用莖段作外植體效果也較好。

3.2 外植體的繼代培養(yǎng)結(jié)果觀察

經(jīng)過25d的培養(yǎng)，愈傷組織（不定芽）在暗處和光照下表現(xiàn)出了不同的變化。莖段在兩種培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)，相比之下還是在光照下增殖、分化較為顯著。同時(shí)在光照下長(zhǎng)出的芽點(diǎn)為綠色的，而在暗處雖然也有芽點(diǎn)長(zhǎng)出，但為白色。不定芽在這兩種培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，但在光照下可以轉(zhuǎn)綠，而且長(zhǎng)勢(shì)很好，在暗處培養(yǎng)不定芽則仍為白色。

4 討論

4.1 不同PGR配比對(duì)外植體誘導(dǎo)率的影響

在實(shí)驗(yàn)過程中，相同的外植體分別接種在了不同配方的培養(yǎng)基中，其激素種類和含量不同，結(jié)果表明：相同的外植體在不同的培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率不同。莖段作為外植體，兩種配方的培養(yǎng)基中外植體的誘導(dǎo)率都不低，其中，第一種配方的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)率較高。因此，6-BA和NAA在以莖段作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，對(duì)于誘導(dǎo)出愈傷組織具有重要作用。最后，腋芽（帶節(jié)的莖段）作為外植體，兩種配方的培養(yǎng)基中都有愈傷形成，即都長(zhǎng)出了芽，由此可見，腋芽是較為理想的外植體。

另外，實(shí)驗(yàn)時(shí)相同的外植體材料在設(shè)計(jì)的幾個(gè)配方的培養(yǎng)基中要盡量分配均勻、平行，即一段莖段或一節(jié)腋芽要盡量接種到設(shè)計(jì)的相應(yīng)的幾個(gè)配方的培養(yǎng)基中，這樣才好說(shuō)明問題，也就是說(shuō)，45d后如果這幾個(gè)配方的培養(yǎng)基中外植體的變化有什么差異，只能是培養(yǎng)基中激素的種類和含量不同引起的，排除了材料因素的可能。

4.2 組織培養(yǎng)中的揭化現(xiàn)象及其與外植體選擇的關(guān)系

褐化是指外植體在培養(yǎng)過程中，自身組織從表面培養(yǎng)基釋放褐色物質(zhì)，以致培養(yǎng)基逐漸變成褐色，外植體也隨之進(jìn)一步變褐而死亡的現(xiàn)象。目前認(rèn)為植物組織培養(yǎng)中的褐化主要是由酶促褐化引起的[4]。外植體的部位及生理狀態(tài)不同其褐化程度不同，不同時(shí)期和不同年齡的外植體在培養(yǎng)中褐化的程度也不同。所以，在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w。本實(shí)驗(yàn)表明，莖段和腋芽均容易誘導(dǎo)出愈傷組織，而且褐化程度較低。

通過對(duì)較易褐化的外植體材料的預(yù)處理能減輕醌類物質(zhì)的毒害作用。處理方法如下[5]：外植體經(jīng)流水沖洗后，在2-5℃的低溫下處理12-24h，再用升汞或70%酒精消毒，然后接種于只含有蔗糖的瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-7d，使組織中的酚類物質(zhì)部分滲入培養(yǎng)基中。取出外植體用0.1漂白粉溶液浸泡10min，再接種到合適的培養(yǎng)基中，這樣可使外植體褐化減輕或完全被抑制。

5 結(jié)論

在對(duì)綠蘿進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，植株的莖段、腋芽都可以作為外植體，通過實(shí)驗(yàn)我們可以得出這樣的結(jié)論：莖段和腋芽在合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)誘導(dǎo)率都很高，而且褐化率相對(duì)較低;所以，我們?cè)谶M(jìn)行綠蘿的組織培養(yǎng)時(shí)，選擇莖段和腋芽作為外植體比較好。

由相同外植體在不同PGR配比的培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)狀況我們可以得出這樣的結(jié)論：以莖段作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，最合適的培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA（3.0mg/L）+NAA（0.4mg/L）+2，4-D（1.0mg/L）;以腋芽作為外植體的兩種配方的培養(yǎng)基中，都有愈傷組織形成，即都有芽長(zhǎng)出來(lái)，說(shuō)明兩種配方的培養(yǎng)基都適合于腋芽誘導(dǎo)愈傷形成。同時(shí)，光照可以顯著促進(jìn)愈傷組織和不定芽的轉(zhuǎn)綠、增殖和分化。

參考文獻(xiàn)

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[2]王梓清，劉愛萍，胡曉媛，王家福.荔枝胚性愈傷組織誘導(dǎo)和離體保存條件的篩選.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2009，18（01）：80-86.

[3]Le Van T H，Takamura T，TanakaM.Callus formation and plantregeneration from callus throughsomatic embryo structuresin cymbidium orchid.PlantScience，2004，166：1443-1449.

[4]肖關(guān)麗，楊清輝，李富生等.甘蔗愈傷組織分化綠苗內(nèi)源激素變化規(guī)律研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，24（04）：337-338.

[5]高山林.草毒分生組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)及應(yīng)用[J].山西果樹，2000（03）：6-7.