普羅布考對(duì)2型糖尿病大鼠糖尿病腎病的影響研究

成麗嵐+黃金華+馬愛江

[摘要] 目的 探討普羅布考對(duì)2型糖尿病大鼠糖尿病腎病的影響。 方法 16只糖尿病大鼠分為模型組（DM組）和普羅布考組（PB組），每組8只。另取9只正常大鼠作為正常對(duì)照組（NC組）。選擇尿微量白蛋白（UMA）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、腎臟肥大指數(shù)、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）和病理組織學(xué)為檢測(cè)指標(biāo)，全面評(píng)價(jià)普羅布考對(duì)2型糖尿病大鼠糖尿病腎病的作用。 結(jié)果 DM組BUN、UMA、腎臟肥大指數(shù)、HOMA-IR、Scr、TG、TC、LDL-C、MDA均明顯高于NC組，SOD、GSH-PX明顯低于NC組（P < 0.05或P < 0.01）。PB組BUN、Scr、UMA、TC、LDL-C、MDA均明顯低于DM組，SOD、GSH-PX明顯高于DM組（P < 0.05或P < 0.01）。DM組較PB組腎臟病理結(jié)構(gòu)病變更為嚴(yán)重。 結(jié)論 普羅布考對(duì)糖尿病腎病具有明顯治療作用。

[關(guān)鍵詞] 糖尿病腎??；大鼠；普羅布考

[中圖分類號(hào)] R587.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）01（a）-0018-04

[Abstract] Objective To explore the effect of Probucol on diabetic nephropathy in type 2 diabetic rats. Methods Sixteen diabetic rats were divided into DM group and PB group， 8 rats in each group. 9 normal rats were chosen as normal control group （NC group）. The UMA， BUN， Scr， HOMA-IR， renal hypertrophy index， TG， TC， LDL-C， SOD， GSH-PX， MDA and Pathologic histology were selected as detected indicators. The effect of Probucol on diabetic nephropathy in type 2 diabetic rats were evaluated. Results In DM group， BUN， UMA， renal hypertrophy index， HOMA-IR， Scr， TG， TC， LDL-C， MDA were significantly higher than those of the NC group， SOD and GSH-PX were significantly lower than those of the NC group （P < 0.05 or P < 0.01）. In PB group， BUN， Scr， UMA， TC， LDL-C， MDA were significantly lower than DM group， SOD and GSH-PX were significantly higher than DM group （P < 0.05or P < 0.01）. The changes of renal pathological structure in PB group was significantly severer than DM group. Conclusion Probucol may play a role in diabetic nephropathy.

[Key words] Diabetic nephropathy； Rat； Probucol

糖尿病腎病是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，發(fā)病率是慢性終末期腎病的主要原因[1-2]。高血脂、糖基化終末產(chǎn)物及氧化應(yīng)激等參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，氧化應(yīng)激作為發(fā)病機(jī)制的中心環(huán)節(jié)。本研究通過觀察普羅布考對(duì)糖尿病大鼠血脂、抗氧化能力及腎功能、腎臟病理結(jié)構(gòu)的改變，為糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制及治療方案的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 購(gòu)于北大醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[許可證編號(hào)：SCXK（京）2007-0001]36只雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，重190～250 g，平均重量220 g。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鏈脲佐菌素（STZ，美國(guó)Sigma公司）、普羅布考（齊魯制藥，國(guó)藥準(zhǔn)字H10980050）、生化指標(biāo)試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）、糖化血紅蛋白（HbA1c）測(cè)定試劑盒及氧化指標(biāo)測(cè)定試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）。

1.2 動(dòng)物模型的建立

36只動(dòng)物經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后（飼養(yǎng)室溫度20～25℃，相對(duì)濕度為50%～65%，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為：正常對(duì)照組（NC組，10只，普通飼料喂養(yǎng)）以及高糖高脂組（26只，高糖高脂飼料喂養(yǎng)）。分別喂養(yǎng)8周后，高糖高脂組以小劑量STZ（15 mg/kg）腹腔注射誘導(dǎo)2型糖尿病模型（血糖測(cè)定結(jié)果≥16.7 mmol/L，提示2型糖尿病造模成功），23只大鼠糖尿病模型制備成功。模型制備成功后，根據(jù)治療方法分為：DM組12只；PB組（普羅布考500 mg/kg/d治療）11只。NC組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)，DM、PB組大鼠繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。從造模成功到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，各組大鼠存活情況：NC組9只，DM組和PB組各8只。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.3.1 腎功能相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)?zāi)?，收集大鼠尿液。半自?dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)尿微量白蛋白（UMA）定量。處死動(dòng)物前一天，股動(dòng)脈采血3 mL（結(jié)束后棉球按壓穿刺部位3～5 min止血；小圓針細(xì)線連續(xù)縫合，酒精消毒），半自動(dòng)生化檢測(cè)儀測(cè)定血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）水平，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）[3]，HOMA-IR=空腹血糖水平（FPG，mmol/L）×空腹胰島素水平（FINS，mU/L）/22.5。處死動(dòng)物當(dāng)天，取雙腎，稱重，并計(jì)算腎臟肥大指數(shù)[4]，腎臟肥大指數(shù)=（腎臟質(zhì)量/體質(zhì)量）×100%。endprint

1.3.2 血脂及氧化還原指標(biāo)檢測(cè) 處死動(dòng)物前一天，股動(dòng)脈采血，半自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)股動(dòng)脈血中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）水平。

1.3.3 腎臟病理學(xué)觀察 取小于2.0 cm×2.0 cm×0.4 cm腎組織放入10%甲醛固定液中，HE染色后光鏡下觀察各組腎臟病理結(jié)構(gòu)改變。電鏡下觀察腎小球足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 普羅布考對(duì)大鼠腎功能的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，DM組BUN、24 h UMA定量、腎臟肥大指數(shù)、HOMA-IR、Scr均明顯高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。PB組BUN、Scr、24 h UMA定量均明顯低于DM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 普羅布考對(duì)大鼠血脂及氧化還原指標(biāo)的影響

DM組TG、TC、LDL-C、MDA明顯高于NC組，SOD、GSH-PX明顯低于NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。PB組TC、LDL-C、MDA明顯低于DM組，SOD、GSH-PX明顯高于DM組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表2。

2.3 普羅布考對(duì)模型大鼠腎臟組織病理學(xué)的影響

2.3.1 HE染色結(jié)果 DM組可見腎小球明顯增大、基底膜增厚不均勻、系膜基質(zhì)增生嚴(yán)重、腎小管擴(kuò)張、遠(yuǎn)曲小管空泡樣變性明顯、近曲小管上皮細(xì)胞增大明顯；PB組腎小球大小介于NC組和DM組之間，系膜細(xì)胞增生程度較DM組輕，腎小管變性程度較DM組緩解。見圖1。

2.3.2 腎小球足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變 電鏡下可見，NC組足細(xì)胞從胞體上伸出分布均勻、排列整齊的突起，無融合樣改變，基底膜厚度均勻。DM組足細(xì)胞的足突部分融合，足細(xì)胞突起排列紊亂敷貼于基底膜上，基底膜增厚嚴(yán)重，部分呈纖維撕裂狀。PB組足突仍有融合，基底膜厚度不均，但較DM組大鼠的病變較輕。見圖2。

3 討論

2型糖尿病為臨床常見疾病，發(fā)病率逐年增加，為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，主要發(fā)病機(jī)制涉及胰島素抵抗、胰島素分泌缺陷[5]。參考邵俊偉等[6]研究中的方法，本研究制作2型糖尿病大鼠模型成功率較高。研究證實(shí)[7-9]，機(jī)體脂代謝紊亂能夠?qū)е麦w內(nèi)脂質(zhì)過氧化物堆積，促進(jìn)糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，DM組大鼠TC、TG、LDL-C、24h UMA水平明顯高于NC組；普羅布考則可以明顯改善這種現(xiàn)象。有研究發(fā)現(xiàn)[10-11]，在臨床糖尿病腎病的治療中，普羅布考聯(lián)合常規(guī)基礎(chǔ)治療可有效減少糖尿病患者UMA的排泄量。陶文玉等[12]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖尿病組大鼠尿蛋白排泄率、腎臟肥大指數(shù)及基底膜的厚度均高于非糖尿病組。糖尿病腎病隨著病程的進(jìn)展，常出現(xiàn)大量蛋白尿，隨著蛋白尿的增加，基底膜的厚度也隨之增加，病理改變也更嚴(yán)重[13-14]。本研究對(duì)腎臟組織HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠腎小球明顯增大，基底膜增生增厚明顯，腎小管可見擴(kuò)張、空泡樣變性、上皮細(xì)胞明顯增大等病理學(xué)改變。經(jīng)普羅布考干預(yù)的大鼠，腎小球及腎小管的病理學(xué)改變程度較輕。

氧化應(yīng)激是目前臨床研究熱點(diǎn)，可引起器官、組織的損傷[15-16]。研究證實(shí)，通過阻斷機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)可減緩糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，腎組織中沉積的ROS 是腎臟病變的重要介質(zhì)[17]。因此，當(dāng)機(jī)體腎臟抗氧化防御機(jī)制減弱時(shí)，能夠明顯影響糖尿病腎病的發(fā)生。研究證實(shí)，給予糖尿病大鼠抗氧化藥物后，能夠明顯減輕大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，并降低血中炎癥細(xì)胞因子水平，改善腎臟功能，起到延緩糖尿病腎病進(jìn)展的作用[18]。Xu等[19]通過研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠抗氧化能力減弱，普羅布考可以降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用而保護(hù)腎臟作用[20]。糖尿病高血糖狀態(tài)可誘導(dǎo)腎損傷大鼠模型中存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的激活，通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以發(fā)揮保護(hù)腎臟作用[21]。

本研究中，與正常大鼠比較，糖尿病大鼠血中GSH-PX、SOD水平均明顯低于NC組，MDA水平明顯高于NC組，可見糖尿病大鼠機(jī)體氧化應(yīng)激水平較高。經(jīng)普羅布考干預(yù)的PB組大鼠，血中GSH-PX、SOD水平明顯高于DM組，MDA水平明顯低于NC組。說明糖尿病大鼠經(jīng)過普羅布考干預(yù)后，抗氧化能力明顯改善。本研究發(fā)現(xiàn)DM組電鏡結(jié)果顯示足細(xì)胞的足突消失、融合，排列雜亂敷貼于基底膜上，經(jīng)過普羅布考干預(yù)后，足突仍有融合，基底膜厚度不均，但較DM組大鼠的病變較輕。此結(jié)果支持了糖尿病狀態(tài)下可以通過氧化應(yīng)激的機(jī)制引起腎臟的損傷以及腎臟超微結(jié)構(gòu)的改變。綜上所述，普羅布考可能通過降低血脂，減少蛋白尿，改善腎臟結(jié)構(gòu)，對(duì)延緩糖尿病腎病有一定的作用。

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（收稿日期：2017-09-16 本文編輯：王 瓊）endprint