建立HPLC法測定側(cè)柏葉中楊梅苷的含量

[摘 要]目的：建立測定側(cè)柏葉中楊梅苷含量的HPLC方法。方法：采用Inertsil-ODS-3（4.6mm*250mm，5m）色譜柱，流動相為：甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（37：63：1.5），流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：254nm。結(jié)果：楊梅苷的線性范圍為0.023 mg/mL-0.414 mg/mL，線性良好，r=0.9999（n=5）。結(jié)論：該方法簡便快捷、精密度高、結(jié)果準確。

[關鍵詞]HPLC法；楊梅苷；含量測定。

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2018）01-0115-01

側(cè)柏葉為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Franco的干燥枝梢及葉，性味苦澀、性寒，具有涼血止血的功效，臨床上常用于各種內(nèi)臟出血癥。側(cè)柏葉含有鞣質(zhì)、黃酮及揮發(fā)油等化學成分。其中黃酮化合物為其主要成分，在質(zhì)量標準研究中常以槲皮素和槲皮苷作為品質(zhì)評價指標成分。我們在對側(cè)柏化學成分研究中首次從側(cè)柏中鑒定出楊梅苷成分，且含量較高。有關側(cè)柏中楊梅苷成分的含量測定尚未見報道，為此我們首次建立了側(cè)柏中楊梅苷成分的HPLC含量測定方法，為豐富和完善側(cè)柏藥材質(zhì)量標準提供科學依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下：

1 儀器、試劑、供試品和對照品

儀器：Agilent1260型HPLC儀（G1314F型紫外檢測器，Agilent ChemStation工作站），安捷倫科技有限公司；Agilent1260型HPLC儀（G1365D型紫外檢測器，Agilent ChemStation 工作站），安捷倫科技有限公司；AG285型電子天平，梅特勒公司；超振蕩清洗儀（浙江昆山）。

試劑：甲醇為色譜純（美國天地）；冰醋酸、磷酸二氫鉀（國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水。

對照品：楊梅苷購于上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號：090106供含量測定用。

供試品：分別采于陜西省咸陽市、新疆新疆大學校園、浙江省蘭溪市、遼寧省沈陽市、重慶市，去凈泥沙，塵土和枝條，50℃烘干備用。以上樣品經(jīng)北大醫(yī)學部王弘副教授鑒定為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Franco的干燥枝梢及葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil-ODS-3（4.6mm*250 mm，5 m）色譜柱，流動相為：甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（37：63：1.5），流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：254 nm。在上述條件下：楊梅苷色譜峰與相鄰色譜峰分離良好，理論塔板數(shù)大于4500，峰形對稱，滿足含量測定的要求。

2.2 供試品溶液制備方法

取側(cè)柏葉粉末（過二號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）40min，放冷后稱定重量，加50%乙醇補足減失的重量。濾過，經(jīng)0.45μm濾膜濾過，即得。

2.3 對照品溶液制備方法

精密稱取楊梅苷0.3mg置10mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，經(jīng)0.45μ m濾膜濾過，備用。

2.4 標準曲線制備和線性范圍考察

對照品溶液制備：精密稱取0.3mg楊梅苷對照品，以70%乙醇定容于10mL容量瓶中，得對照品溶液。取照品溶液1μl、2μl，6μl，10μl，14μl，18μl注入液相色譜儀中，按規(guī)定色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品進樣量（Y，mg）為縱坐標，峰面積X為橫坐標，進行線性回歸，得楊梅苷的線性方程：r=0.9999（n=5），線性范圍為0.023mg/mL-0.414mg/mL。

2.5 精密度和穩(wěn)定性試驗

精密吸取標準品溶液10μl，注人液相色譜儀中，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，計算RSD值，結(jié)果表明，楊梅苷RSD值為0.91%。說明儀器精密度良好。

精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8小時注入液相色譜儀中，記錄峰面積，計算RSD值，結(jié)果表明，楊梅苷RSD值為0.17%，說明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一樣品共6份，按照供試品溶液制備方法制得供試品溶液，精密吸取

供試品溶液10μl，注入液相色譜儀中，每份樣品測定1次，記錄峰面積，計算RSD值，考察樣品重復性。

結(jié)果表明：6份樣品重復性試驗中楊梅苷RSD值為0.83%，說明該方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的側(cè)柏葉樣品粉末5份，分別精密加一定量的楊梅苷對照品，按照供試品溶液制備方法進行處理，并按上述色譜條件進行測定，計算楊梅苷加樣回收率。結(jié)果，楊梅苷的平均回收率為98.53% （n=5），結(jié)果見表1。

以上HPLC含量測定的方法學考察證明：本研究建立的HPLC含量測定方法準確、可行，適用于側(cè)柏中楊梅苷的含量測定。

2.8 樣品測定

按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液按色譜條件進行測定，以

外標法計算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 側(cè)柏葉中楊梅苷成分具有收縮血管、降血糖、抗氧化、保肝、利膽、抗炎、抗突變、抗腫瘤和鎮(zhèn)痛作用，是側(cè)柏中有效成分之一，有關側(cè)柏葉中楊梅苷的含量測定未見報道，本文首次對楊梅苷進行了含量測定，實驗結(jié)果表明該方法，重復性好，精高，簡便快速，本研究為完善和豐富側(cè)柏藥材質(zhì)量標準提供了科學依據(jù)。

3.2 本實驗分別考察了甲醇-0.3%甲酸，甲醇-0.5%磷酸，與甲醇0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸，三種流動相系統(tǒng)，結(jié)果表明在甲醇-磷酸溶液-冰醋酸系統(tǒng)中拖尾因子最小，峰形最好。

3.3 由樣品測定結(jié)果可見不同產(chǎn)地側(cè)柏葉中楊梅苷含量差異較大，其中陜西省咸陽市樣品與重慶市樣品含量相差近3倍，其含量變化可能與氣候、地理位置以及采集時間等因素有關，有待進一步研究。

作者簡介

高莉（1992年），女（漢族），本科學歷。endprint