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    HPLC法測定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)

    2017-03-19 09:29王金柱徐瑩瑩
    科學(xué)與財富 2017年6期

    王金柱+徐瑩瑩

    摘 要:目的:采用高效液相色譜法(HPLC法)測定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)含量。方法:應(yīng)用C18色譜柱,流動相選磷酸二氫鉀-乙腈(PH調(diào)節(jié)采用磷酸,并將PH控制在3.2),最佳流速為1.0mL·min-1,柱溫控制在30攝氏度左右;檢測波長260nm,進樣量10μL;以此測定注射用腺苷鈷胺中有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果:實驗中精密度及準(zhǔn)確度等全部符合樣品分析的要求。其中,腺苷鈷胺、氰鈷胺與相鄰峰的分離度佳,其線性范圍分別是100~0.2μg·mL-1(R=0.9999)、10~0.1μg·mL-1(R=10000)。結(jié)論:HPLC法操作過程簡單、快速,精密度及準(zhǔn)確率高,專屬性強,能夠良好的測定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)含量,值得推廣。

    關(guān)鍵詞:注射用腺苷鈷胺;HPLC法;有關(guān)物質(zhì);氰鈷胺

    注射用腺苷鈷胺為抗貧血藥,可用于貧血(巨幼紅細(xì)胞性、營養(yǎng)不良性、妊娠期)、神經(jīng)根炎、三叉神經(jīng)炎、坐骨神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹、多發(fā)性神經(jīng)炎等疾病的輔助治療,也可以用于營養(yǎng)性神經(jīng)疾患及由于放射線或藥物所引起的白細(xì)胞減少癥等[1]。腺苷鈷胺是維生素B12在人體內(nèi)的活性輔酶之一,是細(xì)胞生長及繁殖、維持神經(jīng)髓鞘完整性的必需物質(zhì)之一[2]。然而,腺苷鈷胺缺點在于對酸、堿、光的不穩(wěn)定性,且在制備過程中多產(chǎn)生雜質(zhì)氰化鈷胺[3]。氰化鈷胺在結(jié)構(gòu)上含有氰根這種劇毒性結(jié)構(gòu),其不能作為注射藥物。注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)的測定利用吸光度法對藥品中氰化鈷胺一類已知雜質(zhì)加以控制,因此, 運用恰當(dāng)?shù)姆椒y定注射用腺苷鈷胺內(nèi)有關(guān)物質(zhì)含量,來更加嚴(yán)格的控制藥品質(zhì)量,保證藥品安全是十分重要的。

    1 儀器與試劑、藥品

    1.1儀器

    電子天平,高效液相色譜儀。

    1.2 試劑與藥品

    腺甘鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品;氰鈷胺對照品;注射用腺甘鈷胺樣品;色譜純:乙腈;分析純:磷酸二氫鉀、磷酸。

    2方法

    2.1.溶液的制備[4]

    取腺甘鈷胺加水分別稀釋成含腺甘鈷胺1.0mg/mL和25μg/mL對照溶液,取氰鈷胺藥品,加水制備成含氰鈷胺2μg/mL的溶液作對照品溶液。

    2.2色譜條件[5]

    色譜柱為C18色譜柱;檢測波長260nm;柱溫大概控制在30攝氏度左右;流動相選磷酸二氫鉀-乙腈,選用磷酸來調(diào)節(jié)PH值,并將PH值大約控制在3.2。最佳流速設(shè)置為1.0mL·min-1;每次注入藥量為10μL。

    2.3方法

    取用10μL對照溶液注入高效液相色譜儀中,并調(diào)節(jié)好靈敏度,令主成份的峰高可以達(dá)到總量程的20%-25%之間。精密測量并取用供試品溶液,對照用溶液及氰化鈷胺對照品溶液,每種各為10μL,且將其分別注進高效液相色譜儀中,觀察并記錄色譜圖,并記下色譜圖達(dá)到主成分峰的保留時間的2.5倍。如果供試品溶液色譜中出現(xiàn)了與氰鈷胺相對應(yīng)的峰,則要求含量小于1.0%,而供試品溶液中各種雜質(zhì)的峰的面積的和必須小于等于主峰面積的兩倍。

    2.4最低檢測限與定量限試驗

    2.4.1腺苷鈷胺的檢測限及定量限

    利用電子天平精確稱取腺苷鈷胺對照品,并對其加水進行稀釋,在已選定好的色譜條件下進行檢測。當(dāng)腺苷鈷胺的信噪比達(dá)到10:1時,可計算出腺苷鈷胺的定量限約為0.915ng,而在信噪比為3:1的時候,計算出的腺苷鈷胺的定量限大概是0.57。

    2.4.2氰鈷胺的檢測限和定量限

    利用電子天平精確稱取氰鈷胺對照品,并對其加水進行稀釋,在已選定好的色譜條件下進行檢測。當(dāng)氰鈷胺的信噪比達(dá)到10:1時,可計算出腺苷鈷胺的定量限約為0.915ng,而在信噪比為3:1的時候,計算出的氰鈷胺的定量限大概是0.57。

    3 結(jié)果

    實驗中精密度及準(zhǔn)確度等全部符合樣品分析的要求。其中,腺苷鈷胺、氰鈷胺與相鄰峰的分離度佳,其線性范圍分別是100~0.2μg·mL-1(R=0.9999)、10~0.1μg·mL-1(R=10000)。

    4 討論

    腺苷鈷胺是維生素B12在人體內(nèi)的活性輔酶之一,是細(xì)胞生長及繁殖、維持神經(jīng)髓鞘完整性的必需物質(zhì)之一,腺甘鈷胺常被用來治療巨幼細(xì)胞性貧血、妊娠期貧血等,還被用來輔助治療各類神經(jīng)炎等神經(jīng)性疾病[6-9]。但是,其成分內(nèi)的有關(guān)物質(zhì)的相關(guān)研究文獻(xiàn)較少。而其中,氰鈷胺及羥鈷胺是現(xiàn)階段已知的注射用腺甘鈷胺成分中的雜質(zhì)[10-12]。由于藥物的生產(chǎn)工藝的改變,其中的雜質(zhì)物質(zhì)不能夠有效的分離出去[13]。因此,為達(dá)到提高腺甘鈷胺主成分峰與雜質(zhì)峰的分離度的目的,本文設(shè)計的實驗則是選用適合于HPLC法條件的樣品,改善有關(guān)物質(zhì)和待測成分的分離的效果,并控制總的雜質(zhì)與氰鈷胺。

    HPLC法方法簡單,操作便利、快捷,且具有很高的靈敏度,準(zhǔn)確度、檢測限與定量限全部附合相關(guān)要求,適合用于控制注射用腺甘鈷胺有關(guān)物質(zhì),值得推廣[14-15]。

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    作者簡介:王金柱,哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司,工程師,150025,本科,1989年03月03日,藥品質(zhì)量方向。

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