腫瘤壞死因子超家族成員15與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性的研究

郭桂元　黃子成　葉源春　陳小令

[摘要] 目的 研究腫瘤壞死因子超家族成員15與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性。方法 方便選取2013年1月—2015年12月福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州市第一醫(yī)院收治的103例UC患者作為病例組，抽取同期103名健康體檢者做為對(duì)照組。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)兩組基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，分析兩組間SNPs基因型頻率與等位基因頻率的差異，并檢驗(yàn)?zāi)[瘤壞死因子超家族成員15（TNFSF15）基因單核苷酸多態(tài)性與UC臨床特征的相關(guān)性。 結(jié)果 TNFSF15基因中rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647和rs7869487等5個(gè)SNPs基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P>0.05）；兩組5個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（基因型頻率比較，P=0.685，0.903，0.750，0.808，0.988；等位基因頻率比較，P=0.612，0.764，0.620，0.622， 1.000）。結(jié)論 TNFSF15基因與中國漢族人群UC的遺傳易感性無明顯相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 潰瘍性結(jié)腸炎（UC）；遺傳易感性；TNFSF15基因；單核苷酸多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2016）11（c）-0021-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the Tumor necrosis factor superfamily member 15 and UC.Methods Convenient selection 103 cases of Han Chinese patients with UC in the One Hospital of Qian Zhou of FuJian Medical University from January 2013 to December 2015 were selected as the case group，during the same time 103 case of healthy check-ups were selected as the control group. χ2 tests or Fisher exact test were used to test whether the genotype frequencies of the two groups conform the in Hardy-Weinberg law of genetic equilibrium. the difference of SNPs genotypes and allele frequencies in two groups were analyzed ，the relevance of Tumor necrosis factor superfamily member 15 （TNFSF15） gene single nucleotide polymorphism and clinical features of UC were test. Results In TNFSF15，rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647 and rs7869487 SNPs genotype frequencies conform Hardy-Weinberg equilibrium（P>0.05）.5 SNPs genotypes and allele frequencies in two groups has no significant difference the difference.（P>0.05）（P=0.685， 0.903，0.750，0.808，0.988 in genotype frequencies；P=0.612，0.764，0.620，0.622，1.000 in allele frequencies）. Conclusion The SNPs of TNFSF15 about Chinese Han people has no significant relations to UC genetic susceptibility.

[Key words] Ulcerative colitis； Predisposition ；TNFSF15；Single nucleotide polymorphisms；Genetic

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis UC）是一種慢性非特異性炎癥性疾病，主要累及直腸和結(jié)腸，其與克羅恩（CD）統(tǒng)稱為炎癥性腸?。↖BD）。至今為止，關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎的病因尚無明確結(jié)論，研究認(rèn)為，UC是遺傳、感染、環(huán)境和免疫等多因素共同作用的結(jié)果，其發(fā)病機(jī)制可以概括為：遺傳易感者在環(huán)境因素的作用下及腸道茵群的參與下，啟動(dòng)了腸道免疫機(jī)制及非免疫機(jī)制，從而導(dǎo)致腸道發(fā)生反應(yīng)。近年來，關(guān)于UC的發(fā)病與遺傳因素的相關(guān)性的研究成為臨床熱點(diǎn)。多項(xiàng)研究提出，UC的發(fā)病與ICAM-1、HLA [1]及TNFSF15等多個(gè)基因密切相關(guān)，已有研究表明，TNFSF15基因是CD的易感基因之一[2-3]，但鮮有TNFSF15基因與UC相關(guān)性的研究。該試驗(yàn)以2013年1月—2015年12月該院就診的103例UC患者為研究對(duì)象，選取TNFSF15基因的5個(gè)位點(diǎn)，即探討TNFSF15基因是否為中國漢族人群中潰瘍性結(jié)腸炎的易感基因之一，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該院該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，告知患者研究的目的以及方法，獲得患者知情同意。研究開展時(shí)間為2013年1月—2015年12月，隨機(jī)抽取該院就診的103例UC患者為研究對(duì)象，均符合“2012年于廣州我國炎癥性腸病診斷及治療共識(shí)意見”中制訂的潰瘍性結(jié)腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，排除：①細(xì)菌性痢疾、腸結(jié)核等感染性結(jié)腸炎及結(jié)腸CD、缺血性結(jié)腸炎、放射性結(jié)腸炎等疾病患者；②未定型經(jīng)腸炎及無法耐受腸鏡檢查者；③合并大腸腫瘤及其他部位腫瘤者；④合并其他自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染以及多臟器功能衰竭者；⑤合并糖尿病、高血壓、高脂血癥等致動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素者；⑥麻風(fēng)病人、妊娠期及哺乳期婦女、智力障礙及精神類疾病患者。其中男57例，女46例，患者年齡22～64歲，平均年齡為（42.8±6.5）歲。抽取103名同期該院體檢中心及門診的健康者作為對(duì)照組，排除IBD史、IBD家族史以及無自身免疫性疾病史患者，其中男51名，女52名，年齡21～68歲，平均年齡為（43.1±6.8）歲。對(duì)兩組研究對(duì)象的一般資料錄入至統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中處理，結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），基本均衡可比。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)儀器及主要試劑由生物生工（上海）股份公司提供

1.3 測序 PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒（生工SK1141）測序

測序圖譜（.abl）使用說明：峰圖文件（.abl）可用Chromas軟件或SeqMan軟件打開。序列比對(duì)可用SeqMan軟件。

1.4 分型數(shù)據(jù)

TYPER軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，獲得分型數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)中率的比較以χ2檢驗(yàn)。年齡采用（x±s）表示， 組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，確認(rèn)兩組SNPs位點(diǎn)基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，對(duì)樣本的群體代表性進(jìn)行分析，分析兩組間5個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型和等位基因頻率的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

UC組5個(gè)SNPs等位基因1、2的頻數(shù)（頻率）分別為124、82，119、87，117、89，106、100，124、82；對(duì)照組等位基因1、2的頻數(shù)（頻率）分別為130、76，123、83，111、95，112、94，12。用χ2檢驗(yàn)兩組間等位基因頻率，P值分別為0.612，0.764，0.620，0.622，1.00，P>0.05，表明兩組5個(gè)SNPs等位基因頻率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

兩組基因型頻數(shù)：UC組5個(gè)SNPs基因型11、12、22的頻率依次為34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；對(duì)照組基因型頻率依次為35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。兩者對(duì)比，P值分別為0.685， 0.903， 0.750， 0.808，0.988，P>0.05，表明兩組5個(gè)SNPs基因型頻率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎病變部位主要局限于大腸粘膜和粘膜下層，患者臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、粘液膿血便等，伴有發(fā)熱、貧血、消瘦等癥狀。相關(guān)調(diào)查顯示，近年來，我國UC發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)，成為我國社會(huì)衛(wèi)生關(guān)注的問題。TNFSF15基因位于第9號(hào)染色體上（9q32），具有23908個(gè)堿基，含4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子。其蛋白產(chǎn)物腫瘤壞死因子樣配體1A（TL1A）可抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與特異性受體死亡受體3（DR3）結(jié)合后具有活化T細(xì)胞、促進(jìn)炎癥因子的分泌等作用，在免疫調(diào)節(jié)及炎癥性疾病發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。UC的發(fā)病具有明顯家族遺傳現(xiàn)象，可能與基因類型及基因突變有關(guān)，多項(xiàng)研究表明[5]，TNFSF15基因的單核苷酸多態(tài)性與IBD有關(guān)，特別是CD有明顯相關(guān)性。已有研究表明，TNFSF15基因與非猶太高加索人種的UC具有相關(guān)性，但與猶太高加索人種UC無顯著相關(guān)性。相關(guān)學(xué)者研究報(bào)道，TNFSF15基因rs3810936與日本人的UC具有顯著相關(guān)性[6]。但在朝鮮人群中，TNFSF15基因中8個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）（rs4574921、 rs10114470 、rs 3810936、rs6478108、rs4979462、 rs7865494、 rs7848647和rs1322057）與UC無顯著相關(guān)性[7]。王強(qiáng)等[8]研究中，對(duì)TNFSF15基因多態(tài)性與浙江地區(qū)漢族人克羅恩病遺傳易感性的相關(guān)性進(jìn)行檢測。分別設(shè)置克羅恩病組（克羅恩病患者）、對(duì)照組 （健康者），設(shè)計(jì)3個(gè)單核苷酸多態(tài)性 （rs3810936，rs6478109， rs7848647）目的基因特異性引物，擴(kuò)增樣本中的目的基因測序。結(jié)果顯示，兩組rs3810936，rs6478109，rs7848647 3個(gè)位點(diǎn)等位基因的攜帶頻率及基因型頻率無明顯差異。經(jīng)多因素Logistic回歸分析，TNFSF15的單核苷酸多態(tài)性與克羅恩病的臨床亞型無顯著相關(guān)性，但rs3810936與rs6478109有相關(guān)性（r=0.802，P<0.05），rs3810936與rs7848647有顯著相關(guān)性（r=0.793，P<0.05），rs6478109與rs7848647有相關(guān)性（r=0.948， P<0.05）。因而認(rèn)為，TNFSF15的三個(gè)單核苷酸多態(tài)性（rs3810936，rs6478109，rs7848647）與浙江地區(qū)漢族人克羅恩病遺傳易感性、臨床亞型無顯著相關(guān)性。綜上可說明，UC的遺傳易感性具有種族遺傳和地區(qū)差異。目前，有關(guān)于中國北方人群小樣該研究顯示TNFSF15基因并非UC的易感基因之一。而該研究中選取TNFSF15基因的5個(gè)位點(diǎn)，隨機(jī)抽取該院就診的103例UC患者為研究對(duì)象，另抽取同期體檢者作對(duì)照，結(jié)果顯示UC組5個(gè)SNPs等位基因1、2的頻數(shù)（頻率）分別為124、82，119、87， 117、89，106、100，124、82；對(duì)照組等位基因1、2的頻數(shù)（頻率）分別為130、76，123、83，111、95，112、94，12。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩組間等位基因頻率，P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中UC組5個(gè)SNPs基因型11、12、22的頻率依次為34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；對(duì)照組基因型頻率依次為35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。兩者對(duì)比，P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因而該組研究可證實(shí)TNFSF15基因與UC無顯著相關(guān)性（P=0.74）。

綜上所述，結(jié)合其他省市醫(yī)院的相關(guān)研究可以證實(shí)，TNFSF15基因并非中國漢族人群的易感基因之一，但該組研究未將種族遺傳、地域差異作為影響因素納入分析，且該研究樣本量少時(shí)間較短，因而存在一定的局限性，還需進(jìn)一步行全國大范圍研究及擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步探尋UC的易感基因，為臨床上更好地、有針對(duì)性治療UC提供依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

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