129例肺癌患者中ALK陽性病例臨床病理特征研究

葛曉松+劉彥魁+王曉莉

[摘要] 目的 探討無錫地區(qū)肺癌患者中ALK融合基因陽性率。方法 整群選取并回顧性分析2014年9月—2016年7月間該院收治的129例肺癌患者的臨床病理資料及Fish檢測報告。 結果 有6例患者ALK融合基因陽性，且均為腺癌，陽性率為4.65%（6/129），其中男性4例，女性2例，女性患者在ALK陽性中所占比例為33.3%，臨床分期包括II～IV期。結論 該院ALK檢測陽性率與國內(nèi)外報道的陽性率基本一致，對指導肺癌靶向治療，具有重要意義。

[關鍵詞] ALK；非小細胞肺癌；FISH；靶向治療

[中圖分類號] R563 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）11（a）-0030-03

[Abstract] Objective To investigate the positive rate of ALK fusion gene in patients with lung cancer in Wuxu， China. Methods Group selection and use retrospective study method， we Analyzed 129 cases of lung cancer patients in our hospital with their clinical and pathological data and Fish test report between September 2014 to July 2016. Results There are 6 cases ALK fusion gene-positive patients in 129 cases， the pathological type of the six areall adenocarcinoma， ALK fusion gene positive rate was 4.65%（6/129）， including 4 male and 2 female. Female patients with ALK-positive account for the proportion of 33.3%. The clinical stage of patients include stage II to stage IV. Conclusion The positive rate of ALK fusion gene in our hospital are basically consistent with the reported in the literature. It is essential to guide lung cancer targeted therapy.

[Key words] ALK fusion gene；NSCLC； Target therapy； FISH

肺癌是全世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤，同時，肺癌也是死亡率居首位的惡性腫瘤，其5年生存率不足15%[1-3]。肺癌包括非小細胞肺癌（NSCLC）與小細胞肺癌（SCLC）兩大類，近年來，以分子靶向治療為核心內(nèi)容的精準化治療，已經(jīng)成為肺癌治療發(fā)展最快的領域[4]，代表性藥物如易瑞沙對比傳統(tǒng)含鉑類的聯(lián)合化療方案，能顯著改善患者生活質(zhì)量，延長患者生命，且不良反應較小。因此相關位點突變檢測研究已經(jīng)成為肺癌分子靶向治療的熱門方向[5-6]。為評估無錫地區(qū)肺癌患者中ALK融合基因陽性率，同時為評價該院Fish檢測ALK融合基因的準確性。該研究回顧性分析了該院自2014年9月—2016年7月間利用Fish法檢測的129肺癌患者中ALK融合基因表達情況，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究中涉及的患者，均為整群選取就診無錫市第四人民醫(yī)院，且經(jīng)細胞學或病理學明確診斷的肺癌新鮮手術及穿刺組織、石蠟組織標本、胸水脫落細胞，共計129例，其中男性84例，女性45例；肺腺癌117例，肺鱗癌8例，肺大細胞癌3例，肺腺鱗癌1例；患者年齡35～84歲，平均年齡61.5歲；臨床分期為I期8例，II期12例，III期26例，IV期82例。所有標本的采集及處理已征求了患者知情同意并獲得無錫市第四人民醫(yī)院倫理委員會批準實施。

1.2 材料與試劑

所有患者ALK融合基因均采用Fish法檢測，檢測所用試劑盒由基因科技（上海）有限公司提供。

1.3 實驗方法

所有患者病理切片均按照試劑盒廠家推薦的說明書進行操作。ALK FISH檢測判讀標準：高倍鏡視野下計數(shù)50個腫瘤細胞： 如陽性細胞≥50%即25個，判斷患者發(fā)生ALK重組； 如陽性細胞<10%即5個，判斷患者未發(fā)生ALK重組； 如陽性細胞≥10%（5個）且<50%（25個），則重新計數(shù)50個腫瘤細胞，統(tǒng)計這100個腫瘤細胞，若其中陽性細胞≥15%，判斷患者發(fā)生ALK重組；陽性細胞<15%，判斷患者未發(fā)生ALK重組。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析， 計數(shù)資料采用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以 P <0.05 為差異有統(tǒng)計學意義

2 結果

在129例肺癌患者中，有6例患者ALK融合基因突變陽性，陽性率為4.65%，其中男性4例，女性2例，女性在ALK陽性患者中所占比例為33.3%。6人中有4例為IV期，1例為III期，另外1例為II期。所有ALK陽性患者均為肺腺癌，對比文獻報道的統(tǒng)計結果，該院ALK陽性率與國內(nèi)外報道[2]基本一致。值得注意的是，有1例男性患者為EGFR 20外顯子突變及ALK融合基因雙陽性。

3 討論

Anaplastic lymphoma kinase（ALK），即人類間變性淋巴瘤激酶基因，通常編碼一種只在一定的神經(jīng)元細胞中表達的酪氨酸激酶，1994年首次在間變性大細胞淋巴瘤中被發(fā)現(xiàn)而命名。ALK作為一種酪氨酸激酶受體，在細胞生理活動中的許多環(huán)節(jié)包括細胞凋亡、細胞增殖及細胞周期等發(fā)揮重要的調(diào)控作用，其異常表達將導致包括肺癌、淋巴瘤等在內(nèi)的一系列疾病的發(fā)生。ALK的異常形式包括突變、擴增和融合基因的產(chǎn)生，其中最常見的是融合基因的產(chǎn)生。2007年nature雜志首次報道，EML4與ALK基因在約5%的NSCLC患者中發(fā)生融合突變，這2個基因均位于人2號染色體，通過融合形成EML4-ALK基因，其編碼的蛋白產(chǎn)物通過激活PI3K-AKT，MAPK 和 JAK-STAT 途徑，導致腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在NSCLC中發(fā)揮重要的驅(qū)動作用。事實上，在多種腫瘤中，均可檢測到ALK基因融合，其融合的基因和形式多種多樣。研究表明通過小分子抑制劑可阻斷ALK活化，進而抑制腫瘤細胞的增殖[7]。自從2007年首次報道了非小細胞肺癌（NSCLC）中ALK融合基因是肺癌驅(qū)動基因以后，僅過了3年時間，針對ALK融合基因的小分子靶向藥物克唑替尼就研發(fā)成功，并在臨床試驗顯示出強大抗腫瘤活性。與傳統(tǒng)化療相比，ALK陽性肺癌患者在服用克唑替尼后，其臨床客觀緩解率達到64%，疾病控制率接近90%，且不良反應非常少，包括常見的惡性、嘔吐等，患者容易耐受。因此2011年8月克唑替尼被FDA快速批準，用于局部晚期或轉(zhuǎn)移性ALK陽性NSCLC的一線治療。目前已有了ALK抑制劑，包括第1代的克唑替尼，第2代的色瑞替尼（Ceritinib）、Alectinib以及正在進行臨床試驗的第三代Lorlatinib ，均顯示出了強大的抗腫瘤活性。

目前檢測ALK融合基因的手段主要包括3種方法：熒光原位雜交（FISH）、免疫組化（IHC）和聚合酶鏈反應（PCR），其中最常用的為FISH及IHC法。FISH主要用來檢測DNA，與其他2種方法相比，F(xiàn)ISH法檢測的基因組DNA相對穩(wěn)定，IHC受人為因素影響較大，結果偏主觀性。PCR法雖敏感性及特異性均較高，但樣本容易受到污染，從而產(chǎn)生假陽性結果。文獻報[6]ALK融合基因陽性占非小細胞肺癌比例約為3%～6%，預測中國約每年約有超過3萬例新發(fā)EML4-ALK陽性肺癌患者。

該研究中，通過回顧性分析，首次報道了無錫地區(qū)ALK融合基因陽性患者占非小細胞肺癌比例為4.65%，且均為腺癌，Cappuzzo及Rossi等人[7-8]報道EML4-ALK融合基因在非小細胞肺癌中的陽性率約為3%～6%，與之前文獻報道一致。但是在陽性人群中，我們的結果中，女性所占比例與報道相比偏低，可能是本回顧性研究中樣本總量偏少，導致陽性標本偏少引起的誤差。將會繼續(xù)進行ALK融合基因陽性患者的統(tǒng)計工作，擴大樣本總量。同時，檢測的標本包括石蠟切片、富集胸水脫落細胞、穿刺標本、手術標本等多種來源，證實多種臨床標本均可用于ALK融合基因的檢測。在檢測陽性的6例患者中，進行了跟蹤隨訪，其中有2例口服了克唑替尼靶向治療，無進展生存期均接近12個月，且胸悶、氣喘等癥狀均得到了明顯改善，另外4例目前進行傳統(tǒng)化療，有可能在二線治療時，考慮行克唑替尼或色瑞替尼靶向治療。

值得注意的是，在6例ALK融合突變陽性的患者中，有1例為ALK和EGFR雙突變。該患者為EGFR 20外顯子插入突變，未進行EGFR-TKI治療，在培美曲塞單藥維持治療進展后，直接開始口服克唑替尼，患者一般情況及癥狀明顯改善，病灶縮小。以往研究認為ALK融合突變和EGFR基因突變相互排斥，即這2種突變不會發(fā)生在同一病人體內(nèi)。事實上，近年來陸續(xù)有文獻報道人群中ALK與EGFR雙陽性突變發(fā)生率并不低，2014 年 Yang報道人群中 ALK 融合基因合并EGFR基因突變?yōu)?8.6%（12/70）[10-12]，該研究結果與此接近。

綜上所述，ALK融合突變是NSCLC中重要的驅(qū)動基因，文獻報道NSCLC中發(fā)生率約為5%，回顧性分析結果表明，在該院非小細胞肺癌患者中，ALK融合基因檢測陽性率為4.65%，用于指導臨床靶向治療用藥，提高了患者的生存時間，改善了患者的生活質(zhì)量，值得進一步推廣。

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（收稿日期：2016-08-05）