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    脂聯(lián)素mRNA在不同程度子癇前期患者中的表達(dá)分析

    2017-02-06 17:38明芳楊潔呂秀芳
    中國(guó)醫(yī)藥科學(xué) 2016年15期
    關(guān)鍵詞:脂聯(lián)素子癇前期表達(dá)

    明芳+楊潔+呂秀芳

    [摘要]目的探究脂聯(lián)素mRNA在不同程度子癇前期患者中的表達(dá)水平,探討其在子癇前期中的作用及相關(guān)性。方法研究對(duì)象選取2014年6月~2015年9月我院收治的62例子癇前期患者,其中輕度子癇30例,重度子癇32例,分別設(shè)為輕度組和重度組,選取同期的50例正常妊娠婦女作為對(duì)照組,檢測(cè)各組受檢者胎盤及外周血中的脂聯(lián)素mRNA水平進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.39±0.12)和(0.11±0.01),輕度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.67±0.15)和(0.46±0.09),對(duì)照組胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.81±0.23)和(0.50±0.04),重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平顯著高于輕度組和對(duì)照組(P<0.05),輕度組和對(duì)照組之間則無顯著差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論脂聯(lián)素的低表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)病有所相關(guān),且隨著程度的增加水平顯著降低,這種情況在胎盤和外周血中均有體現(xiàn),可能是子癇前期病理生理過程的重要影響因素。

    [關(guān)鍵詞]子癇前期;脂聯(lián)素;mRNA;表達(dá)

    子癇前期是常見的妊娠期疾病之一,是影響孕婦及胎兒健康及生命安全的隱形殺手。目前臨床尚未完全闡明子癇的發(fā)病機(jī)制,有學(xué)者認(rèn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂是導(dǎo)致此類疾病發(fā)生的主要原因,血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎性反應(yīng)、胰島素抵抗作用和脂肪細(xì)胞脂解都參與了子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞分泌的一種激素蛋白,其水平變化和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能有著明顯的相關(guān)性。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)法(RT-PCR)對(duì)不同程度子癇前期患者胎盤和外周血中的脂聯(lián)素mRNA水平進(jìn)行了測(cè)定,以探究其在子癇前期中的作用及意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    研究對(duì)象選取2014年6月~2015年9月我院收治的62例子癇前期患者,診斷符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),排除原發(fā)性高血壓、甲狀腺功能亢進(jìn)及糖尿病患者,排除輸血史、免疫治療史患者。其中輕度子癇30例,重度子癇32例,分別設(shè)為輕度組和重度組,選取同期的50例正常妊娠婦女作為對(duì)照組。輕度組年齡22~37歲,平均(27.4±2.9)歲,孕周38~42周,平均(39.2±0.6)周;重度組年齡21~37歲,平均(27.6±2.7)歲,孕周38~42周,平均(39.4±0.5)周;對(duì)照組年齡22~39歲,平均(28.1±2.5)歲,孕周38~41周,平均(39.4±0.6)周。三組患者在年齡、孕周等一般資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2方法

    1.2.1標(biāo)本采集待胎兒娩出后在無菌狀態(tài)下取臍根部胎盤母體面組織1.00cmx1.0cmx1.0cm大小,避開出血點(diǎn)及鈣化點(diǎn),用生理鹽水沖洗干凈后干燥,置于液氮中保存待用。且在分娩后第2天清晨取空腹肘靜脈血5mL,于-80℃下保存待用。

    1.2.2檢驗(yàn)方法

    取胎盤組織剪成小塊研碎,加入Trizol試劑1mL研磨勻漿,按照標(biāo)準(zhǔn)RNA提取步驟進(jìn)行操作。取血漿標(biāo)本1mL,進(jìn)行上述步驟操作提取RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis KitTaKaRa)分別進(jìn)行cDNA提取,取2μL逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增,嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行。反應(yīng)體系以β-actin作內(nèi)參照,脂聯(lián)素引物序列為上游5-AACATGCCCATFCGCqWFAC-3、下游5一TCTCCTFCCCCATACACCTG-3,片段大小281bp。反應(yīng)條件:94%條件下5min,94℃條件下30s,72℃條件下1min,72℃條件下10min,共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物取5μL在瓊脂糖凝膠電泳,90V10min,70V 20min。在圖像分析系統(tǒng)下觀察并記錄。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,多組間計(jì)量資料對(duì)比用方差檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.39±0.12)和(0.11±0.01),輕度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.67±0.15)和(0.46±0.09),對(duì)照組胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為(0.81±0.23)和(0.50±0.04),重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平顯著高于輕度組和對(duì)照組。見表1。

    3討論

    脂聯(lián)素是由脂肪細(xì)胞分泌的一種激素蛋白,最早由Scherer等發(fā)現(xiàn)并命名。近年來的研究顯示,脂聯(lián)素具有調(diào)控胰島素、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗炎的作用,是目前唯一的一個(gè)負(fù)性調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞因子。脂聯(lián)素能夠加速脂肪和葡萄糖的分解,減輕胰島素抵抗癥狀,促進(jìn)肌肉對(duì)脂肪酸的吸收,降低游離脂肪酸的含量。脂聯(lián)素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用主要是通過對(duì)炎性介質(zhì)的抑制來實(shí)現(xiàn)的,有研究表明脂聯(lián)素能夠抑制血管中A型清道夫受體的表達(dá),并增加血管舒張因子的生成,從而達(dá)到促進(jìn)血管內(nèi)皮修復(fù)的作用。

    大量研究顯示脂聯(lián)素水平在糖尿病、心血管疾病、高脂血癥以及代謝性綜合征患者外周血中是降低的,而且脂聯(lián)素水平的降低程度與病情成正相關(guān)。Kumada等采用ELISA法檢測(cè)到子癇前期患者中的脂聯(lián)素水平明顯低于正常孕婦,而且重度子癇患者的脂聯(lián)素水平下降明顯,因此指出脂聯(lián)素水平可能與子癇前期的發(fā)生發(fā)展有著密切的相關(guān)。Ouchi等采用免疫組化法進(jìn)行檢驗(yàn),發(fā)現(xiàn)子癇前期患者的胎盤中也存在脂聯(lián)素,而且大多分布在絨毛血管,因此認(rèn)為脂聯(lián)素對(duì)于胎盤絨毛血管的內(nèi)皮損傷具有一定的修復(fù)作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的舒張因子能夠維持妊娠期的正常血管調(diào)節(jié),而脂聯(lián)素的水平則會(huì)影響舒張因子的合成,因此推測(cè)脂聯(lián)素水平的改變可能是導(dǎo)致子癇前期發(fā)病的主要原因。但也有學(xué)者的研究顯示部分子癇前期孕婦的脂聯(lián)素水平出現(xiàn)升高,并指出可能與孕婦的肥胖、孕周有所相關(guān)。

    從本研究數(shù)據(jù)來看,所有子癇前期患者的脂聯(lián)素水平與對(duì)照組相比均有所降低,但輕度子癇前期患者的脂聯(lián)素mRNA水平降低并不顯著,與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。隨著病情程度的增加,無論是在胎盤還是外周血中的脂聯(lián)素水平均顯著降低,重度組患者的脂聯(lián)素mRNA水平顯著低于對(duì)照組和輕度組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這說明脂聯(lián)素水平表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂,舒張因子合成降低,導(dǎo)致炎癥反應(yīng)增強(qiáng),血管痙攣,進(jìn)而引發(fā)子癇前期。

    綜上所述,脂聯(lián)素的低表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)病有所相關(guān),且隨著程度的增加水平顯著降低,這種情況在胎盤和外周血中均有體現(xiàn),可能是子癇前期病理生理過程的重要影響因素。

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