脂聯(lián)素mRNA在不同程度子癇前期患者中的表達(dá)分析

明芳+楊潔+呂秀芳

[摘要]目的探究脂聯(lián)素mRNA在不同程度子癇前期患者中的表達(dá)水平，探討其在子癇前期中的作用及相關(guān)性。方法研究對(duì)象選取2014年6月～2015年9月我院收治的62例子癇前期患者，其中輕度子癇30例，重度子癇32例，分別設(shè)為輕度組和重度組，選取同期的50例正常妊娠婦女作為對(duì)照組，檢測(cè)各組受檢者胎盤及外周血中的脂聯(lián)素mRNA水平進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.39±0.12）和（0.11±0.01），輕度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.67±0.15）和（0.46±0.09），對(duì)照組胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.81±0.23）和（0.50±0.04），重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平顯著高于輕度組和對(duì)照組（P<0.05），輕度組和對(duì)照組之間則無顯著差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論脂聯(lián)素的低表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)病有所相關(guān)，且隨著程度的增加水平顯著降低，這種情況在胎盤和外周血中均有體現(xiàn)，可能是子癇前期病理生理過程的重要影響因素。

[關(guān)鍵詞]子癇前期；脂聯(lián)素；mRNA；表達(dá)

子癇前期是常見的妊娠期疾病之一，是影響孕婦及胎兒健康及生命安全的隱形殺手。目前臨床尚未完全闡明子癇的發(fā)病機(jī)制，有學(xué)者認(rèn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂是導(dǎo)致此類疾病發(fā)生的主要原因，血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎性反應(yīng)、胰島素抵抗作用和脂肪細(xì)胞脂解都參與了子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞分泌的一種激素蛋白，其水平變化和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能有著明顯的相關(guān)性。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)法（RT-PCR）對(duì)不同程度子癇前期患者胎盤和外周血中的脂聯(lián)素mRNA水平進(jìn)行了測(cè)定，以探究其在子癇前期中的作用及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

研究對(duì)象選取2014年6月～2015年9月我院收治的62例子癇前期患者，診斷符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除原發(fā)性高血壓、甲狀腺功能亢進(jìn)及糖尿病患者，排除輸血史、免疫治療史患者。其中輕度子癇30例，重度子癇32例，分別設(shè)為輕度組和重度組，選取同期的50例正常妊娠婦女作為對(duì)照組。輕度組年齡22～37歲，平均（27.4±2.9）歲，孕周38～42周，平均（39.2±0.6）周；重度組年齡21～37歲，平均（27.6±2.7）歲，孕周38～42周，平均（39.4±0.5）周；對(duì)照組年齡22～39歲，平均（28.1±2.5）歲，孕周38～41周，平均（39.4±0.6）周。三組患者在年齡、孕周等一般資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集待胎兒娩出后在無菌狀態(tài)下取臍根部胎盤母體面組織1.00cmx1.0cmx1.0cm大小，避開出血點(diǎn)及鈣化點(diǎn)，用生理鹽水沖洗干凈后干燥，置于液氮中保存待用。且在分娩后第2天清晨取空腹肘靜脈血5mL，于-80℃下保存待用。

1.2.2檢驗(yàn)方法

取胎盤組織剪成小塊研碎，加入Trizol試劑1mL研磨勻漿，按照標(biāo)準(zhǔn)RNA提取步驟進(jìn)行操作。取血漿標(biāo)本1mL，進(jìn)行上述步驟操作提取RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis KitTaKaRa）分別進(jìn)行cDNA提取，取2μL逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行。反應(yīng)體系以β-actin作內(nèi)參照，脂聯(lián)素引物序列為上游5-AACATGCCCATFCGCqWFAC-3、下游5一TCTCCTFCCCCATACACCTG-3，片段大小281bp。反應(yīng)條件：94%條件下5min，94℃條件下30s，72℃條件下1min，72℃條件下10min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物取5μL在瓊脂糖凝膠電泳，90V10min，70V 20min。在圖像分析系統(tǒng)下觀察并記錄。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，多組間計(jì)量資料對(duì)比用方差檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.39±0.12）和（0.11±0.01），輕度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.67±0.15）和（0.46±0.09），對(duì)照組胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平分別為（0.81±0.23）和（0.50±0.04），重度組患者胎盤和外周血的脂聯(lián)素mRNA水平顯著高于輕度組和對(duì)照組。見表1。

3討論

脂聯(lián)素是由脂肪細(xì)胞分泌的一種激素蛋白，最早由Scherer等發(fā)現(xiàn)并命名。近年來的研究顯示，脂聯(lián)素具有調(diào)控胰島素、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗炎的作用，是目前唯一的一個(gè)負(fù)性調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞因子。脂聯(lián)素能夠加速脂肪和葡萄糖的分解，減輕胰島素抵抗癥狀，促進(jìn)肌肉對(duì)脂肪酸的吸收，降低游離脂肪酸的含量。脂聯(lián)素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用主要是通過對(duì)炎性介質(zhì)的抑制來實(shí)現(xiàn)的，有研究表明脂聯(lián)素能夠抑制血管中A型清道夫受體的表達(dá)，并增加血管舒張因子的生成，從而達(dá)到促進(jìn)血管內(nèi)皮修復(fù)的作用。

大量研究顯示脂聯(lián)素水平在糖尿病、心血管疾病、高脂血癥以及代謝性綜合征患者外周血中是降低的，而且脂聯(lián)素水平的降低程度與病情成正相關(guān)。Kumada等采用ELISA法檢測(cè)到子癇前期患者中的脂聯(lián)素水平明顯低于正常孕婦，而且重度子癇患者的脂聯(lián)素水平下降明顯，因此指出脂聯(lián)素水平可能與子癇前期的發(fā)生發(fā)展有著密切的相關(guān)。Ouchi等采用免疫組化法進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)子癇前期患者的胎盤中也存在脂聯(lián)素，而且大多分布在絨毛血管，因此認(rèn)為脂聯(lián)素對(duì)于胎盤絨毛血管的內(nèi)皮損傷具有一定的修復(fù)作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的舒張因子能夠維持妊娠期的正常血管調(diào)節(jié)，而脂聯(lián)素的水平則會(huì)影響舒張因子的合成，因此推測(cè)脂聯(lián)素水平的改變可能是導(dǎo)致子癇前期發(fā)病的主要原因。但也有學(xué)者的研究顯示部分子癇前期孕婦的脂聯(lián)素水平出現(xiàn)升高，并指出可能與孕婦的肥胖、孕周有所相關(guān)。

從本研究數(shù)據(jù)來看，所有子癇前期患者的脂聯(lián)素水平與對(duì)照組相比均有所降低，但輕度子癇前期患者的脂聯(lián)素mRNA水平降低并不顯著，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。隨著病情程度的增加，無論是在胎盤還是外周血中的脂聯(lián)素水平均顯著降低，重度組患者的脂聯(lián)素mRNA水平顯著低于對(duì)照組和輕度組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這說明脂聯(lián)素水平表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，舒張因子合成降低，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，血管痙攣，進(jìn)而引發(fā)子癇前期。

綜上所述，脂聯(lián)素的低表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)病有所相關(guān)，且隨著程度的增加水平顯著降低，這種情況在胎盤和外周血中均有體現(xiàn)，可能是子癇前期病理生理過程的重要影響因素。