H PLC特征圖譜用于傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的比較

李佳鳳

（福建省婦幼保健院，福建 福州 350001）

H PLC特征圖譜用于傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的比較

李佳鳳

（福建省婦幼保健院，福建 福州 350001）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測定傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的指紋圖譜，并對其進(jìn)行對比研究，考察電陶瓷煎藥壺與傳統(tǒng)砂鍋煎煮湯劑的差別。方法：應(yīng)用傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯，湯藥濃縮后比較形態(tài)，干燥后考察得膏率；應(yīng)用紅外光譜測定儀測定紅外光譜，分析電煎藥壺煎煮所得浸膏是否引起基團(tuán)的變化；HPLC建立指紋圖譜，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2004A版）”分析兩種湯劑的相似度。結(jié)果：電陶瓷煎藥壺煎出的湯劑濃縮后稠膏呈膠凍狀，濃縮干燥成浸膏粉末后，平均質(zhì)量為92.11 g，傳統(tǒng)砂鍋煎煮出的湯劑濃縮后呈稠厚糖漿狀，濃縮干燥成浸膏粉末后，平均質(zhì)量94.20 g，略多于電陶瓷煎藥壺。兩種方法煎煮的湯藥紅外光譜一致，沒有發(fā)現(xiàn)異?；鶊F(tuán)；HPLC指紋圖譜的相似度大于0.90，兩者色譜峰的數(shù)量、峰形和保留時(shí)間沒有明顯差別，共有峰11個(gè)。結(jié)論：建立的HPLC指紋圖譜從整體上反映出湯藥的化學(xué)成分信息，兩種不同方法煎煮出的湯藥HPLC圖譜相似度大于 0.90，沒有顯著差別，紅外光譜未見異?；鶊F(tuán)，電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的湯藥與傳統(tǒng)砂鍋一致，可用于上下相資湯的煎煮。

上下相資湯；砂鍋；電煎藥壺；高效液相指紋圖譜；比較

中藥方劑成分復(fù)雜，普遍含有生物堿、皂苷、揮發(fā)油等多種物質(zhì)，傳統(tǒng)以砂鍋煎煮湯劑為主，各藥按處方調(diào)配后，一起煎煮，取協(xié)同之效，歷代醫(yī)書對煎煮的時(shí)間和火候進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定，以保證處方達(dá)到預(yù)計(jì)的效果，砂鍋煎煮是沿襲千年的習(xí)慣。但隨著時(shí)代的進(jìn)步，群眾生活節(jié)奏的加快，現(xiàn)代化技術(shù)呈現(xiàn)日新月異的發(fā)展，孕育而生的中藥煎藥機(jī)因?yàn)槠浔憷膬?yōu)勢，正逐步取代傳統(tǒng)砂鍋應(yīng)用于中藥的煎煮?，F(xiàn)代化煎藥機(jī)是否適用于傳統(tǒng)中藥湯劑的煎煮，或者優(yōu)于傳統(tǒng)的砂鍋煎煮，目前這方面的研究較少。

上下相資湯出自《石室秘錄·燥證門》，方由人參10 g、沙參20 g、玄參15 g、麥冬15 g、玉竹20 g、五味子 15 g、熟地黃 12 g、山萸肉 20 g、車前子15 g、牛膝 12 g等組成，全方上潤肺陰，下滋腎水，子母相滋，養(yǎng)陰清熱，固沖止血，用于經(jīng)亂無期，量少淋漓不盡或量多勢急，色鮮紅，質(zhì)稍稠的虛熱型崩漏證的治療[1]。上下相資湯源于清代名醫(yī)，因其治療婦女更年期疾病效果顯著，而流傳沿用至今，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常經(jīng)過辨證加減后衍生應(yīng)用于多種婦科經(jīng)期疾病，亦可收獲極佳的療效。胡茜瑩[2]采用上下相資湯加減治療“崩漏”（現(xiàn)代醫(yī)學(xué)稱為功能失調(diào)性子宮出血），發(fā)現(xiàn)止血效果確切，效果明顯優(yōu)于葆宮止血顆粒，可在臨床推廣應(yīng)用。鄭利茶等[3]報(bào)道謝萍教授運(yùn)用上下相資湯辨證加減，治療上熱下寒證，效果頗佳。

中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒別手段，通過指紋特征相似程度的比較，判斷真?zhèn)?、評價(jià)優(yōu)劣、考察穩(wěn)定性和一致性，是符合中藥特色的質(zhì)量控制模式之一[2]。本研究通過考察傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的得膏率，紅外光譜考察浸膏內(nèi)各化學(xué)成分的基團(tuán)穩(wěn)定性，建立高效液相色譜法（HPLC）考察浸膏，應(yīng)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2004A版）”比較分析指紋圖譜，分析比較電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯的湯藥與傳統(tǒng)砂鍋的區(qū)別。

1　材料與儀器

1.1材料

人參、沙參、玄參、麥冬、玉竹、五味子、熟地黃、當(dāng)歸、山茱萸、車前子、牛膝等藥材為飲片，購自福州市藥材公司，均符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，甲醇（色譜純，批號：1746607431，德國Merck公司）；超純水（自制）。

1.2儀器

陶瓷煎藥壺（型號：GX-500A，潮安縣東鳳鎮(zhèn)廣興五金燃具廠），DL-I-15臺式封閉電爐（天津市泰斯特儀器有限公司），減壓干燥器（型號：20A型島津制備高效液相色譜儀，島津公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2.2Diamonsil C18分析柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；水為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，梯度洗脫（0～10 min，5% ～ 10%B；10～ 20 min，10% ～30%B；20～30 min，30%～40%B；30～45 min，40%～ 50%B；45～ 50 min，50%～ 5%B）；體積流量1.0 mL/min；測定波長220 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μL。

2.3供試品溶液的制備

2.3.1傳統(tǒng)砂鍋煎煮稱取1劑處方量飲片于砂鍋中，加入650 mL飲用水 （按中醫(yī)基礎(chǔ)理論要求，浸沒藥材 2 cm）浸泡 30 min，武火煎煮至沸騰，轉(zhuǎn)文火煎煮60 min，關(guān)火，趁熱濾出，收集濾液。濾渣繼續(xù)加入325 mL飲用水武火煎煮至沸騰，轉(zhuǎn)小火煎煮 20 min，關(guān)火，趁熱過濾，收集濾液，合并濾液。濾液濃縮成稠膏，減壓干燥至恒重，制得浸膏，平行操作3劑處方，制備浸膏，編號Ⅰ1，Ⅰ2，Ⅰ3，密封備用。

2.3.2電陶瓷煎藥壺煎煮稱取1劑處方量飲片于煎藥機(jī)中，加入 650 mL飲用水，浸泡 30 min，余下操作同傳統(tǒng)煎煮法，平行操作3劑處方，制備浸膏，編號Ⅱ1，Ⅱ2，Ⅱ3，密封備用。

2.3.3供試品溶液的配制精密稱取干燥至恒重的各份浸膏約0.5克，分別置于25 mL容量瓶中，加入超純水，超聲完全溶解后，定容，分別制得供試品溶液各25 mL，密封備用。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1精密度試驗(yàn)?、?浸膏制得的供試品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μL，測定指紋圖譜，以生成的對照圖譜為參照，計(jì)算主要色譜峰的相對保留時(shí)間和峰面積的RSD，比較相似度，結(jié)果各色譜圖色譜峰RSD小于1.9%，相似度均大于0.98，表明儀器的精密度良好。

2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸?、?供試品溶液20 μL，按“2.1”項(xiàng)的色譜條件，分別于 0，2，4，8，10 h測定指紋圖譜，以生成的對照圖譜為參照，計(jì)算主要色譜峰的相對保留時(shí)間和峰面積的RSD，比較相似度，結(jié)果各色譜圖色譜峰 RSD小于1.5%，相似度均大于0.96，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取Ⅰ浸膏5份，按“2.3”項(xiàng)下“供試品溶液的配制”制備供試品溶液，精密吸取20 μL進(jìn)樣，記錄指紋圖譜，以生成的對照圖譜為參照，計(jì)算主要色譜峰的相對保留時(shí)間和峰面積的RSD，比較相似度，結(jié)果各色譜圖色譜峰RSD小于2.0%，相似度均大于0.95，表明方法重復(fù)性良好。

2.5指紋圖譜的建立及分析

2.5.1供試品指紋圖譜數(shù)據(jù)采集分別精密稱取各種浸膏粉末各約0.1 g于10 mL容量瓶中，加入30%甲醇溶液，超聲，完全溶解后，定容。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL，測定，記錄色譜圖，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2004A版）”，以對照品色譜圖為參照，考察共有色譜峰的保留時(shí)間和相對峰面積，結(jié)果見表1。建立指紋圖譜共有模式，評價(jià)各色譜圖的相似度。

表1　傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯共有峰峰面積均值及相應(yīng)比值

2.5.2共有峰的標(biāo)定分析比較6份上下相資湯供試品圖譜，計(jì)算不同供試品色譜圖中共有峰占總面積的百分比，結(jié)果顯示，6份上下相資湯指紋圖譜共有峰占總面積大于90%，符合要求，可進(jìn)行相似度比較。

2.5.3指紋圖譜共有模式及相似度評價(jià)結(jié)果應(yīng)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2004 A版）”分析比較砂鍋煎煮和電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯指紋圖譜，以砂鍋煎煮的供試品Ⅰ1為參照圖譜，標(biāo)示兩種煎煮方法所得浸膏的指紋圖譜中11個(gè)共有峰，如圖1，時(shí)間窗寬度為0.10，多點(diǎn)校正，自動(dòng)匹配，采用中位數(shù)法生成對照圖譜，見圖2～4。分別對砂鍋煎煮和電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，砂鍋煎煮的3劑處方與對照圖譜的相似度分別為0.940，0.922，0.948，色譜圖見圖2；電陶瓷煎藥壺煎煮的3劑處方與對照圖譜的相似度分別為0.986，0.938，0.955，色譜圖見圖3；砂鍋煎煮和電陶瓷煎藥壺煎煮6劑上下相資湯指紋圖譜與對照圖譜的相似度分別為0.907，0.916，0.906，0.995，0.965，0.904，見圖 4。相似度均大于0.90，符合指紋圖譜要求，可進(jìn)行樣品的比較。兩種煎煮方法所得色譜圖相似度較高，有11個(gè)共有峰。

圖1　上下相資湯HPLC指紋圖譜（標(biāo)記11個(gè)共有峰）

圖2　砂鍋煎煮上下相資湯指紋圖譜相似度比較

圖3　電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯指紋圖譜相似度比較

圖4　6份上下相資湯指紋圖譜相似度比較

3　紅外光譜測定

分別取“2.3”項(xiàng)下制備的供試品干燥浸膏Ⅰ1，Ⅰ2，Ⅰ3，Ⅱ1，Ⅱ2，Ⅱ3適量于石英皿中，KBr壓片，在 3 000～ 600/cm波長范圍掃描，并比較 6個(gè)樣品的紅外光譜圖，見圖5。

圖5　6份樣品紅外光譜比較

結(jié)果6份樣品的紅外光譜一致性很好，在3800/cm處均有最大吸收峰，推測為-OH吸收峰；在1 000/cm有強(qiáng)吸收峰，推測為飽和C-H鍵振動(dòng)引起的吸收峰。在3 000～ 600/cm處指紋區(qū)的吸收峰也相同，電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯所得的浸膏沒有產(chǎn)生異?；鶊F(tuán)，浸膏的紅外光譜與砂鍋煎煮的浸膏紅外光譜一致，物質(zhì)基礎(chǔ)穩(wěn)定。

4　結(jié)論

電陶瓷煎藥壺煎出的湯劑濃縮后呈稠膠凍狀，濃縮干燥成浸膏粉末后平均質(zhì)量46.055 g，傳統(tǒng)砂鍋煎煮出的湯劑濃縮后呈稠厚糖漿狀，濃縮干燥成浸膏粉末后，平均質(zhì)量47.10 g，略多于電陶瓷煎藥壺。兩種不同方法煎煮的湯藥HPLC指紋圖譜的相似度大于0.90，兩者色譜峰的數(shù)量、峰形和保留時(shí)間沒有明顯差別，可標(biāo)示的共有峰有11個(gè)。浸膏經(jīng)紅外光譜儀檢測發(fā)現(xiàn)兩種煎煮方法所得浸膏的紅外光譜一樣，電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯不會引起物質(zhì)基礎(chǔ)的改變，適用于上下相資湯的煎煮。

5　討論

中藥湯劑是最為傳統(tǒng)的一種制劑形式，湯劑質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)系到臨床的治療效果，因此處方的煎煮十分重要。自動(dòng)煎藥機(jī)省去了傳統(tǒng)砂鍋明火煎煮的繁瑣，可方便快捷地獲得湯藥，但煎出的湯藥是否與傳統(tǒng)砂鍋的一樣，需要進(jìn)行深入研究。

本文采用傳統(tǒng)砂鍋與電陶瓷煎藥壺煎煮上下相資湯，發(fā)現(xiàn)電陶瓷煎藥壺煎出的湯劑濃縮后成膠凍狀，而傳統(tǒng)砂鍋煎煮出的湯劑濃縮后呈稠厚糖漿狀，干燥后質(zhì)量略多于電陶瓷煎藥壺。從HPLC指紋圖譜分析，6份樣品的色譜圖相似度較高，紅外光譜檢測也未發(fā)現(xiàn)差異基團(tuán)，譜圖一致。但兩種煎煮方法所得湯藥濃縮成稠浸膏后，外觀狀態(tài)不同，得膏率方面存在約1 g的差距，推測是因?yàn)榻嘀谐煞蛛m然相同，但所含的量具有一定的差別，為驗(yàn)證這一結(jié)果，應(yīng)在調(diào)配處方時(shí)，精密稱定各味藥材，使所含飲片的質(zhì)量接近，減少因投藥量不同引起的誤差。另外，由于對比研究的實(shí)驗(yàn)次數(shù)較少，所得的樣品有限，為了研究結(jié)果更具有代表性，應(yīng)繼續(xù)研究觀察該處方及其他方劑應(yīng)用電煎藥壺煎煮后的各類指標(biāo)，積累相關(guān)數(shù)據(jù)，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

上下相資湯養(yǎng)陰清熱，固沖止血，用于虛熱型崩漏的治療，屬于補(bǔ)虛類藥物，參考文獻(xiàn)補(bǔ)益類藥物一煎應(yīng)為武火煮沸60分鐘，二煎為煮沸后文火繼續(xù)煎煮30分鐘。按照電陶瓷煎藥壺的煎煮要求，其煎煮的用水量要比傳統(tǒng)砂鍋大，為了實(shí)驗(yàn)的可比性，傳統(tǒng)砂鍋煎煮也使用相同的水量，因此，最終湯劑較稀，需濃縮成干燥浸膏后進(jìn)行對比。

[1]張玉珍.中醫(yī)婦科學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：106-115.

[2]胡茜瑩.中醫(yī)治療陰虛血熱型圍絕經(jīng)期無排卵性功能失調(diào)性子宮出血的療效觀察[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2015，28（10）：1355-1356.

[3]鄭利茶，趙美珠，陳姚宇，等.謝萍教授運(yùn)用上下相資湯加減治療上熱下寒證經(jīng)驗(yàn)[J].中醫(yī)研究，2013，26（1）：39-40.

[4]白瑞，王真真.指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（12）：1458-1462.

[5]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007.

Application of HPLC Fingerprint to Evaluation of Casserole Decoction and Electric Tisanes Pot in Boiling of Shangxia Xiangzi Tang

Li Jiafeng（Fujian Maternal and Child Health Care Hospital，F(xiàn)ujian Fuzhou 350001，China）

Objective：To develop the HPLC fingerprints of shangxia xiangzi tang boiled by casserole decoction and electric tisanes pot and evaluate their difference.Methods：Shangxia xiangzi tang was boiled by casserole and electric tisanes pot respectively，then concentrated and dried to calculate the yield of extract.The infrared spectrum of obtained shangxia xiangzi tang solution was determined to analyze whether decoction by electric tisanes pot caused the change of groups.The HPLC fingerprints were developed，based on which the similarities of shangxia xiangzi tang solutions bolied by casserole and electric tisanes pot were analyzed according to the Traditional Chinese Medicine（TCM）chromatographic fingerprint similarity evaluation system（2004 A）.Results：The shangxia xiangzi tang solution boiled by electric tisanes pot was in a form of thick paste，of which the weight of dry power obtained by concentration and drying was 92.11 g.However，the shangxia xiangzi tang solution bolied by casserole was in a form of thick syrup，of which the weight of dry power was 94.20 g.The infrared spectra of the two solutions were in agreement，and no abnormal groups were observed.The similarities of HPLC fingerprints of two solutions was more than 0.90，while the numbers，shapes and retention times of chromatographic peaks showed no significant difference.A total of eleven common peaks were observed.Conclusion：The developed HPLC fingerprints reflected thechemical composition of liquid forms of shangxia xiangzi tang solutions，and the similarities of the solutions boiled by two methods was more than 0.90，which showed no significant difference.No abnormal groups were observed in infrared spectra of the two solutions.Electric tisanes pot is suitable for boiling shangxia xiangzi tang.

Shangxia Xiangzi Tang；Casserole Decoction；Electric Tisanes Pot of Boiling；HPLC fingerprint；Comparison

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.12.007

李佳鳳，男，副主任藥師。研究方向：醫(yī)藥醫(yī)學(xué)。通訊作者E-mail：260598487@qq.com

（2016-09-22）