兒脾醒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

黃惠瓊　李玲玲

（廈門(mén)市食品藥品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 廈門(mén)361012）

兒脾醒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

黃惠瓊李玲玲

（廈門(mén)市食品藥品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 廈門(mén)361012）

目的：制定兒脾醒顆粒的簡(jiǎn)便快捷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法，鑒別兒脾醒顆粒中山楂、陳皮及薏苡仁；采用高效液相色譜法，建立制劑中陳皮中橙皮苷及山楂中熊果酸的含量測(cè)定方法。結(jié)果：橙皮苷在4.068～101.7 μg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，Y=189 654X-8 534.3（r=1），加樣回收率為100.3%，RSD為1.4%（n=9）；熊果酸在0.027 94～0.465 6 mg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，Y＝6×106X-16 868（r=0.999 8），加樣回收率為98.4%，RSD為2.4%（n=9）。結(jié)論：本法準(zhǔn)確可靠，適用于兒脾醒顆粒的質(zhì)量控制。

兒脾醒顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜；高效液相色譜

“兒脾醒顆?！睘樯介?、麥芽、雞內(nèi)金、山藥、薏苡仁、白扁豆、陳皮和茯苓八味藥材制成的顆粒劑。具有健脾和胃，消食化積之功效。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于局頒試行標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為 WS-10441（ZD-0441）-2002。原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目簡(jiǎn)單，僅設(shè)立山楂和陳皮薄層色譜鑒別，測(cè)定正丁醇提取物，用薄層掃描法測(cè)定山楂中熊果酸的含量，方法繁復(fù)，且重現(xiàn)性差，難以全面控制藥品質(zhì)量。本文對(duì)兒脾醒顆粒進(jìn)行全面研究，修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，重新建立山楂、陳皮、薏苡仁的薄層色譜鑒別；建立高效液相色譜法測(cè)定山楂中熊果酸的含量以及陳皮中橙皮苷的含量，方法簡(jiǎn)便快捷，能很好地控制制劑質(zhì)量。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，島津LC-20A高效液相色譜儀，Agilent1200高效液相色譜儀，Mettler105XS電子天平。

1.2試藥

橙皮苷對(duì)照品、熊果酸對(duì)照品、山楂對(duì)照藥材、陳皮對(duì)照藥材、薏苡仁對(duì)照藥材，均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.3兒脾醒顆粒樣品

兒脾醒顆粒樣品由貴州某公司生產(chǎn)，規(guī)格為2.5 g/袋，批號(hào)為：20100901，20101101，20101201，20101202，20110201，20110401，20110501，20110601，20110701，20110801。

2　方法與結(jié)果

2.1山楂薄層色譜鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加乙醚25 mL，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取山楂對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取熊果酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法〔《中國(guó)藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB〕試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（3→10），在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光及紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，色譜重復(fù)性好，陰性無(wú)干擾，斑點(diǎn)清晰，見(jiàn)圖1。

2.2陳皮薄層色譜鑒別

取本品2 g，研細(xì)，加甲醇30 mL，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取陳皮對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法〔《中國(guó)藥典》（2015年版）四部0502〕試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開(kāi)劑，展至約 3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開(kāi)劑，展至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，色譜重復(fù)性好，陰性無(wú)干擾，斑點(diǎn)清晰，見(jiàn)圖2。

圖1　山楂薄層色譜圖

圖2　陳皮薄層色譜圖

2.3薏苡仁薄層色譜鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加石油醚（60～90℃）60 mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)邮兔眩?0～90℃）1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取薏苡仁對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法〔《中國(guó)藥典》（2015年版）四部0502〕試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以石油醚（60～ 90℃）-乙酸乙酯-醋酸（10∶3∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，色譜重復(fù)性好，陰性無(wú)干擾，斑點(diǎn)清晰，見(jiàn)圖3。

圖3　薏苡仁薄層色譜圖

2.4橙皮苷含量測(cè)定

2.4.1色譜條件色譜柱：Thermo Hypersil BDS C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；島津ODS-SP C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；Agilent extend C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-6%醋酸溶液（30∶70）；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；進(jìn)樣量：10 μL。2.4.2溶液的制備

2.4.2.1供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品適量，研細(xì)，取約2.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）30分鐘，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.2.2對(duì)照品溶液的制備取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.4.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按照處方同法制備缺陳皮藥材的陰性對(duì)照溶液。

2.4.3線性考察精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.203 4 mg/mL的溶液，作為儲(chǔ)備液。分別稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液，按方法測(cè)定。以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：

Y=18 965X－8 534.3，

r=1，表明在4.068～ 101.7 μg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

2.4.4專(zhuān)屬性分別取陰性對(duì)照溶液、供試品溶液以及對(duì)照品溶液，按方法試驗(yàn)，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在橙皮苷峰處無(wú)干擾，結(jié)果表明方法專(zhuān)屬性良好，見(jiàn)圖4。

圖4　橙皮苷液相色譜圖

2.4.5重復(fù)性及范圍取樣品9份，按方法測(cè)定。結(jié)果橙皮苷平均含量為0.344 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好，且在取樣量的50%～150%范圍內(nèi)均適用。

2.4.6準(zhǔn)確度精密稱(chēng)取已知含量的兒脾醒顆粒9份，各1.2 g，按樣品中橙皮苷含量的0.5∶1，1∶1，1.5∶1的比例分別精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液（0.206 2 mg/mL）1，2，3 mL各3份，按方法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為100.3%，RSD為1.4%，表明方法準(zhǔn)確度良好，見(jiàn)表1。

2.4.7精密度按正文方法，取同一橙皮苷對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算峰面積RSD為1.2%，結(jié)果表明方法精密度良好。

2.4.8穩(wěn)定性取同一份供試品溶液（批號(hào)：20110701），間隔一定時(shí)間分別進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.5%，表明供試品溶液在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.9耐用性采用三臺(tái)不同品牌的高效液相色譜儀，三根不同的色譜柱測(cè)定同一批樣品，結(jié)果見(jiàn)表2，表明方法耐用性良好。

表1　橙皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2　耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.10樣品測(cè)定按正文方法對(duì)10批兒脾醒顆粒進(jìn)行含量測(cè)定，本品含橙皮苷在0.31～0.34 mg/g之間，含量較均一，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5熊果酸含量測(cè)定

2.5.1色譜條件色譜柱：Thermo Hypersil BDS C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；島津ODS-SP C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；Agilent extend C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.5.2溶液的制備

2.5.2.1供試品溶液的制備取本品約5 g，精密稱(chēng)定，研細(xì)，加乙醇100 mL加熱回流提取1 h，過(guò)濾，用適量乙醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器和濾渣，合并濾液，蒸干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5.2.2對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12小時(shí)以上的熊果酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含70 μg的溶液，即得。

2.5.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按照處方同法制備缺山楂藥材的陰性對(duì)照溶液。

2.5.3線性考察精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品適量，加甲醇制成0.465 6 mg/mL的溶液，作為儲(chǔ)備液。分別稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液，按方法測(cè)定。以濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：

Y=6×106X－16 868，

r=0.999 8，結(jié)果表明在0.027 94～0.465 6 mg/mL范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

2.5.4專(zhuān)屬性分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按正文方法實(shí)驗(yàn)，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在熊果酸峰處無(wú)干擾，表明專(zhuān)屬性良好，見(jiàn)圖5。

圖5　熊果酸液相色譜圖

2.5.5重復(fù)性及范圍取樣品9份，按正文方法測(cè)定。結(jié)果熊果酸平均含量為0.134 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好，且在取樣量的50%～ 150%范圍內(nèi)適用。

2.5.6準(zhǔn)確度精密稱(chēng)取已知含量的兒脾醒顆粒9份，各2.5 g，按樣品中熊果酸含量的0.5∶1，1∶1，1.5∶1的比例分別精密加入熊果酸對(duì)照品溶液（0.193 9 mg/mL）1，2，3 mL各3份，按正文方法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.4%，RSD為2.4%，表明方法準(zhǔn)確度良好，見(jiàn)表4。

表4　熊果酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.7精密度按正文方法，取同一熊果酸對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，計(jì)算峰面積的RSD為1.0%，結(jié)果表明儀器的進(jìn)樣精密度良好。

2.5.8穩(wěn)定性取同一份供試品溶液（批號(hào)：

20110701），間隔一定時(shí)間分別進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.4%，表明供試品溶液在20小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.9耐用性采用兩臺(tái)不同品牌的高效液相色譜儀及三根不同的色譜柱測(cè)定同一批樣品，以Thermo Hypersil BDS C18柱分離效果最佳，結(jié)果見(jiàn)表5，表明方法耐用性良好。

2.5.10樣品測(cè)定按擬訂方法對(duì)10批兒脾醒顆粒進(jìn)行含量測(cè)定，本品含熊果酸在0.12～0.15 mg/g之間，含量較均一，結(jié)果見(jiàn)表6。

表5　熊果酸耐用性試驗(yàn)結(jié)果

表6　樣品熊果酸含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1兒脾醒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究鮮見(jiàn)文獻(xiàn)研究報(bào)道?，F(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法繁復(fù)，且重現(xiàn)性差，難以全面控制藥品質(zhì)量。本文對(duì)兒脾醒顆粒進(jìn)行全面研究，修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，重新建立山楂、陳皮、薏苡仁的薄層色譜鑒別；建立高效液相色譜法測(cè)定山楂中熊果酸的含量以及陳皮中橙皮苷的含量，方法簡(jiǎn)便快捷，能很好地控制制劑質(zhì)量。

3.2課題同時(shí)對(duì)兒脾醒顆粒中山藥、茯苓、麥芽、白扁豆的薄層色譜鑒別進(jìn)行研究。研究發(fā)現(xiàn)麥芽薄層色譜中陰性對(duì)照干擾嚴(yán)重；供試品未能檢出茯苓相應(yīng)特征斑點(diǎn)；供試品色譜中山藥特征斑點(diǎn)不明顯，且樣品取樣量大，影響判定；白扁豆薄層色譜不理想，故未能建立山藥、茯苓、麥芽及白扁豆的薄層色譜鑒別。

3.3橙皮苷及熊果酸含量測(cè)定流動(dòng)相的選擇。橙皮苷高效液相色譜法測(cè)定中比較不同流動(dòng)相系統(tǒng)，如甲醇-水，甲醇-6%冰醋酸溶液，結(jié)果顯示后者的峰形理想。熊果酸高效液相色譜法測(cè)定中比較了不同流動(dòng)相系統(tǒng)，如甲醇-0.2%磷酸，乙腈-0.3%磷酸，乙睛-甲醇-水（含1 g/L磷酸，2 mL/L三乙胺，60∶25∶15），甲醇-0.05%醋酸，甲醇-0.2%磷酸二氫鈉等流動(dòng)相，結(jié)果顯示流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸（80∶20）的峰形理想。

3.4根據(jù)十批兒脾醒顆粒橙皮苷及熊果酸的含量測(cè)定結(jié)果，橙皮苷及熊果酸的轉(zhuǎn)移率僅約為11%和25%，建議企業(yè)進(jìn)一步優(yōu)化工藝，考察產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2015年版）一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.

[2]劉玲，孫國(guó)兵，陳莉.測(cè)定兒脾醒顆粒中正丁醇提取物[J].中華中西醫(yī)雜志，2006，7（16）：1446-1447.

Study on Quality Standards for Erpixing Granules

Huang Huiqiong，Li Lingling（Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control，F(xiàn)ujian Xiamen 361012，China）

Objective：To establish a quality standard for erpixing granules.Methods：The crataegi fructus，citri reticulatae pericarpium and coicis semen in erpixing granules were identified by thin layer chromatography（TLC），while the content of hesperidin and malol in erpixing granules were determinated by high performance liquid chromatography（HPLC）.Results：The linear range of hesperidin was 4.068～ 101.7 μg/mL（Y=189 654X-8 534.3，r=1）.The average recovery was 100.3%，with a RSD of 1.4%（n=9）.However，the linear range of malol was 0.027 94～ 0.465 6 mg/mL（Y＝6×106X-16 868，r=0.999 8）.The average recovery was 98.4%，with a RSD of 2.4%（n=9）.Conclusion：This method is accurate and reliable，which is suitable for the quality control of erpixing granules.

Erpixing Granules；Quality Standard；Thin Layer Chromatography（TLC）；High Performance Liquid Chromatography（HPLC）

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.12.005

黃惠瓊，女，碩士，副主任藥師。研究方向：藥品質(zhì)量分析。通訊作者E-mail：xmyjhhq@163.com

（2016-10-11）