小兒氨酚黃那敏顆粒有關(guān)物質(zhì)對氯苯乙酰胺檢測方法的建立

郭艷　劉英來　李洪建　趙清爽　邢耘

[摘 要]文章旨在建立小兒氨酚黃那敏顆粒中有關(guān)物質(zhì)對氯本乙酰胺的檢測方法。文章采用高效液相色譜法，對該成分的檢測方法進行了摸索，結(jié)果顯示所建方法簡便，專屬性強，對氯苯乙酰胺與對乙酰氨基酚能夠有效分離，可用于測定小兒氨酚黃那敏顆粒中有關(guān)物質(zhì)對氯苯乙酰胺。

[關(guān)鍵詞]小兒氨酚黃那敏；有關(guān)物質(zhì)；對氯苯乙酰胺；檢測方法

[DOI]10.13939/j.cnki.zgsc.2016.36.247

小兒氨酚黃那敏顆粒為甲類非處方兒童感冒藥，適用于緩解兒童普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏等癥狀。本品收載于國家藥品標準地方標準上升國家標準第三冊[WS-10001-（HD-0214）-2002]，但質(zhì)量標準中無有關(guān)物質(zhì)檢查項，該制劑中對氯苯乙酰胺為對乙酰氨基酚的工藝雜質(zhì)，具有遺傳毒性結(jié)構(gòu)，故建立該檢測方法，有利于提高患者用藥安全性。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀；小兒氨酚黃那敏顆粒[葵花藥業(yè)集團（衡水）得菲爾有限公司，批號：110801]；對乙酰氨基酚[河北冀衡（集團）有限公司]，對乙酰氨基酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100078-200414）對氯苯乙酰胺對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100850-201102）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬C8色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95g，磷酸二氫鈉3.9g，加水溶解至1000ml，加10%四丁基氫氧化銨12ml）—甲醇（60∶40）；檢測波長為245nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL·min-1；進樣量：20μl。

2.2 測定方法

精密稱取對乙酰氨基酚含量測定項下的細粉適量（約相當于對乙酰氨基酚200mg），置容量瓶中，精密量取溶劑[甲醇-水（4∶6）]制成1ml中約含20mg對乙酰氨基酚的溶液，搖勻過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密量取對氯苯乙酰胺對照品和對乙酰氨基酚對照品適量，用溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀釋制成1ml中各含1μg的混合溶液，作為對照品溶液。照色譜條件，精密吸取對照品溶液20ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使對氯苯乙酰胺色譜峰的峰高約為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液與對照品溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，含對氯苯乙酰胺不得過0.005%。

2.3 專屬性試驗

2.3.1 空白干擾試驗

精密稱取陰性制劑（按處方量除對乙酰氨基酚外的其他原料與輔料）約3.2g，置25ml量瓶中，加入溶劑10ml使溶解，搖勻，作為陰性空白溶液，精密量取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果在對氯苯乙酰胺對照品相應保留時間處未出峰，表明空白無干擾。

2.3.2 破壞性試驗

取供試品1批（批號：110801）置表面皿中，于5000lx強光下和60℃水浴中放置6個小時；用流動相溶解并稀釋成1ug/ml的溶液，作為強光破壞和高溫破壞溶液。分別精密量取強光破壞和高溫破壞溶液20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各破壞溶液分別進行檢測，結(jié)果見下圖，表明小兒氨酚黃那敏顆粒在高溫、強光、氧化破壞條件下均未生產(chǎn)對氯苯乙酰胺。表明對氯苯乙酰胺并非對乙酰氨基酚降解而產(chǎn)生，其來源是對乙酰氨基酚原料藥制備過程中引入的雜質(zhì)。

小兒氨酚黃那敏顆粒破壞性試驗的色譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品10mg，置100ml量瓶中，加溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對氯苯乙酰胺對照溶液A，精密量取對氯苯乙酰胺溶液A 0.2ml，0.5ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml分別置100ml容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度。分別精密量取上述溶液注入色譜儀進行測定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為：y=212139x+1694.7，其中R2=0.999，表明對氯苯乙酰胺濃度在0.06882μg/ml～1.7205μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗

取制備好的供試品溶液分別于0、2、4、6、8h進行測定，其RSD均小于2%，且雜質(zhì)個數(shù)未見增加，結(jié)果表明該溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗

取樣品6份，分別加入一定量的對氯苯乙酰胺對照品，由不同的分析人員，在不同的設備上，按有關(guān)物質(zhì)對氯苯乙酰胺的方法測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.7 最低檢測限

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品適量，加溶劑稀釋制成約含1ug/ml對氯苯乙酰胺的溶液，進樣，精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。當信噪比為3∶1時，對照品溶液濃度即為最低檢測濃度，經(jīng)計算得出對氯苯乙酰胺的檢測限為0.4ng。

2.8 定量限

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品和對乙酰氨基酚對照品適量，用溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀釋制成1ml中各含1μg的混合溶液，精密量取上述混合溶液3ml，置50ml容量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即為最低定量限濃度的溶液，配制6份。依法測定，當信噪比比例為10∶1，即為定量限，記錄色譜圖，經(jīng)計算定量限為1.2ng。

2.9 樣品有關(guān)物質(zhì)的測定

取3批樣品，按照 “2.2”項下進行測定，供試品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果見下表。

3 討 論

3.1 耐用性的考察

分別考察流動相比例變化±5%、柱溫變化、不同型號色譜柱，鑒于樣品中未檢測出對氯苯乙酰胺，為驗證方法的耐用性，我們向樣品中添加一定量的對氯苯乙酰胺對照品進行測定，結(jié)果表明流動相比例變化±5%，柱溫變化±5℃以及不同型號色譜柱條件下，對氯苯乙酰胺峰與對乙酰氨基酚峰的分離度符合要求，色譜峰峰形良好，試驗結(jié)果無差別，表明該檢測方法耐用性強。

3.2 結(jié)論

本文中有關(guān)物質(zhì)對氯苯乙酰胺的測定方法符合方法學的各項要求，并且對不同型號的色譜柱、不同柱溫等有良好的耐用性，從兒童用藥安全性角度考慮，建立本品有關(guān)物質(zhì)對氯苯乙酰胺檢測方法有著十分重要的意義。因此，建議將該方法定入小兒氨酚黃那敏顆粒的質(zhì)量標準中。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].二部.北京：化學工業(yè)出版社，2010：234.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].二部.北京：化學工業(yè)出版社，2010：194.