香椿子不同極性萃取物體外抗氧化活性初步研究

王榮申，張守軍，徐文文，程燕妮，李萬忠（濰坊醫(yī)學院，山東濰坊261053）

香椿子不同極性萃取物體外抗氧化活性初步研究

王榮申，張守軍，徐文文，程燕妮，李萬忠*
（濰坊醫(yī)學院，山東濰坊261053）

研究香椿子不同極性萃取物體外抗氧化活性。采用75%乙醇提取、不同極性有機溶劑萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水4個萃取物，考察其總還原力、DPPH·清除能力，比較香椿子不同極性萃取物抗氧化活性；UV法初步判斷所含官能團和化合物類別。結果表明，香椿子不同極性萃取物具有一定抗氧化作用，總還原力順序為：石油醚＞乙酸乙酯＞正丁醇＞水；DPPH·清除能力順序為：乙酸乙酯＞水＞石油醚＞正丁醇，其中石油醚和正丁醇線性關系較好，EC50值分別為0.4907mg/mL和0.6091mg/mL；UV法推斷香椿子中可能含蒽醌類、苯丙素類、木脂素類、香豆素類等酚羥基成分。關鍵詞：香椿子；極性萃取物；抗氧化活性；DPPH

香椿（Toona sinensis）系楝科落葉喬木，在我國廣泛分布，資源豐富，為藥食兩用植物。香椿，味苦澀、性溫，具有祛風利濕，止血止痛之功效；已有研究發(fā)現(xiàn)香椿子具抗氧化、降血糖、抗凝血和心臟保護及提高纖溶活性等生物活性［1-4］。

自由基為人體生化反應代謝產(chǎn)物，適量可以維持機體正常代謝，過剩則會造成機體損傷，導致腫瘤、心腦缺血、動脈粥樣硬化等疾病。基于此，天然抗氧化劑發(fā)現(xiàn)成為目前研究熱點之一［5-7］。目前，香椿子不同極性萃取物體外抗氧化活性缺乏系統(tǒng)研究，本試驗以總還原力、清除DPPH自由基（DPPH·）能力為指標，評價香椿子體外抗氧化活性；UV法初步判斷所含官能團和化合物類別。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

香椿子：濟南圣科技術開發(fā)有限公司，經(jīng)濰坊醫(yī)學院生藥學教研室許崇梅副教授鑒定為楝科植物香椿的果實；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、無水乙醇等試劑均為分析純。

UV-800A型紫外分光光度計：上海元析儀器公司；EL204電子分析天平：梅特勒-托利多儀器上海有限公司；PS-30超聲波清洗儀：深圳市深華泰超聲洗凈設備有限公司；RE-52系列旋轉蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；HH600-2B精密電熱恒溫三用水箱：上海比朗儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1香椿子提取物制備［8-10］

稱取香椿子適量，適當粉粹，過篩，加75%乙醇100 mL，加熱回流提取1.5 h，過濾，棄去濾渣，濾液備用。依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，萃取物旋蒸濃縮，水浴蒸干，備用。

1.2.2香椿子不同極性萃取物樣品液制備

分別取香椿子石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取物1 g，加適量溶劑溶解，用100 mL容量瓶定容，作母液。石油醚和乙酸乙酯萃取物用95%乙醇溶解，正丁醇和水萃取物用去離子水溶解。

1.2.3總還原力測定［5-7］

每個萃取物取適量，使得濃度梯度為0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 mg/mL，作樣品液。

在試管中依次加入0.2 mol/L，pH=6.6磷酸緩沖液2.5 mL，不同濃度梯度石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取物溶液1 mL，1%鐵氰化鉀2.5 mL，混勻，于50℃水浴反應20 min，取出，加入0.1%三氯化鐵和10%三氯乙酸，混勻，靜置10 min。蒸餾水作空白，700 nm處測吸光度，平行3次，取平均值。相同濃度下，吸光度值越大，表示樣品還原能力越強，試驗選取2.5 mg/mL濃度下進行比較；同時轉化為維生素C濃度進行比較。1.2.4DPPH·清除率測定［11-13］

每個萃取物取適量，使得濃度梯度為0.1、0.25、0.4、0.55、0.7、0.85 mg/mL，作樣品液。

DPPH溶液配制：稱取DPPH 0.004 0 g，乙醇溶解，50 mL容量瓶定容，搖勻，使得濃度為80 mg/L，置冰箱中冷藏備用。

清除率測定：取2 mL待測樣品溶液，加2 mL DPPH溶液，混勻，室溫避光放置45 min，517 nm處測吸光度，為Ai值；取2 mL DPPH溶液，加2 mL乙醇，混勻，517 nm處測吸光度，為A0值；取2 mL樣品液，加2 mL乙醇，517 nm處測吸光度，為Aj值。

自由基清除率（K）：K/%=［1-（Ai-Aj）/A0］×100

1.2.5UV法分析

為初步判斷香椿子不同極性萃取物與抗氧化有關官能團和化合物類別，試驗分別取香椿子石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水萃取物適量，萃取溶劑作空白，于200 nm～1 100 nm范圍進行波長掃描，進行初步定性分析。

2　結果與分析

2.1總還原力測定

根據(jù)鐵氰化鉀總還原力測定原理，取相同濃度（2.5 mg/mL）樣品，測700 nm處吸光度，結果見圖1。

圖1　 香椿子不同極性萃取物2.5 mg/mL濃度下吸光度Fig.1　Absorbance of 2.5 mg/mL different polarity extracts from Toona sinensis seeds

表明香椿子不同極性萃取物均具一定還原能力，總還原力順序為：石油醚萃取物＞乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞水萃取物。

建立維生素C還原力標準曲線，見圖2。

圖2　維生素C還原能力標準曲線Fig.2　Reducing power standard curve of VC

線性回歸方程：y=6.102 5x-0.000 5，線性相關系數(shù)R2=0.997 5，維生素C在0.02 mg/mL～0.18 mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

將香椿子不同極性萃取物還原能力轉化為維生素C濃度，比較總還原力，見圖3。

圖3　香椿子不同極性萃取物總還原力比較Fig.3　Total antioxidant activity of different polarity extracts from Toona sinensis seeds

由圖可知不同極性萃取物總還原力順序為：石油醚萃取物＞乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞水萃取物。

2.2DPPH自由基清除率測定

試驗同時以DPPH自由基清除率為指標，評價香椿子不同萃取物體外抗氧化活性，見圖4。

圖4　 香椿子不同極性萃取物DPPH·清除能力比較Fig.4　DPPH free radicals scavenge activity of different polarity extracts from Toona sinensis seeds

結果表明4個萃取物均具有DPPH自由基清除率能力，隨著其濃度增加，抗氧化能力增強，清除率也增加，但清除DPPH自由基能力不同，順序為乙酸乙酯萃取物＞水萃取物＞石油醚萃取物＞正丁醇萃取物。

對香椿子不同極性萃取物質量濃度與DPPH自由基清除率建立線性方程，見表1。

表1　香椿子不同極性萃取物線性相關比較Table 1　The linear correlation of different polarity extracts from Toona sinensis seeds

表明兩者存在正相關關系，在相同濃度0.1mg/mL～0.85 mg/mL范圍內(nèi)，通過比較相關系數(shù)R2，石油醚萃取物和正丁醇萃取物相關性較乙酸乙酯萃取物和水萃取物好，可知石油醚萃取物和正丁醇萃取物EC50值為0.490 7 mg/mL和0.609 1 mg/mL。

2.3UV法掃描結果

香椿子不同極性萃取物紫外掃描結果，見圖5。

由圖可知：A、B在700 nm左右處出現(xiàn)吸收峰且峰形相似，說明石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物存在相同的母核結構或化合物類別；A、B、C、D在220 nm～400 nm之間連續(xù)出現(xiàn)吸收峰，說明4個萃取物中可能含有相同的母核結構或化合物類別。

圖5　香椿子不同極性萃取物紫外掃描結果Fig.5　UV scanning of different polarity fraction from Toona sinensis seeds

A、B、C、D在252、272、325、405 nm有吸收峰，推斷其可能含有蒽醌類；在203、390、310 nm左右有吸收峰，推斷其可能含有苯丙素類；在240 nm和280 nm～290 nm出現(xiàn)吸收峰，推斷其可能含有木脂素類；D在274 nm和311 nm處有吸收峰，推斷其可能含有香豆素類。

3　討論

1）香椿子4個萃取物均具抗氧能力，抗氧化能力存在一定差異。相同萃取物在不同試驗中有不同抗氧化能力，這與不同萃取物所含官能團和化合物類別有關，至于抗氧化機制尚需進一步研究。

2）香椿子在我國廣泛分布，資源豐富，從中篩選抗氧活性較強萃取物，為下一步香椿子分離純化以及產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

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Antioxidant Activity of Different Polarity Extracts from Toona sinensis Seeds

WANG Rong-shen，ZHANG Shou-jun，XU Wen-wen，CHENG Yan-ni，LI Wan-zhong*（Weifang Medical University，Weifang 261053，Shandong，China）

The antioxidant activities of different polarities extracts from Toona sinensis seeds was studied.Toona sinensis seeds was extracted with 75%alcohol.Four extracts were obtained by using different polarities of solvents，such as petroleum ether，ethyl acetate，n-Butanol and water.The antioxidant activities of different polarities extracts from Toona sinensis seeds was compared by using total antioxidant activity and DPPH free radicals scavenge activity.UV method preliminarily estimated that different polarities extracts from Toona sinensis seeds

contains functional groups and compound categories.Different polarities extracts from Toona sinensis seeds had some antioxidation activities，total antioxidant activity order：petroleum ether＞ethyl acetate＞n-butanol＞water；DPPH free radicals scavenge activity order：ethyl acetate＞water＞petroleum ether＞n-butanol.Linear relationship of petroleum ether and n-butanol were better.EC50 values were 0.490 7 mg/mL and 0.609 1 mg/mL；UV method showed that Toona sinensis seeds might contain anthraquinones，phenylpropanoids，lignans and coumarins et al.

Toonasinensisseeds；polaritiesextracts；antioxidantactivity；DPPH

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.15.046

國家自然科學基金項目（81274049）

王榮申（1990—），男（漢），碩士，研究方向：中藥制劑現(xiàn)代化。*通信作者：李萬忠（1970—），男，副教授，博士。

2016-01-18