長期吸煙對肺癌組織B7-H4、P53表達(dá)的影響及臨床意義

王再紅，高兆芳，李海剛，李鴻波，張　靜，楊燕君

(1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院呼吸科，河北 秦皇島 066000；2.北京市第二醫(yī)院綜合內(nèi)科，北京 100031)

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長期吸煙對肺癌組織B7-H4、P53表達(dá)的影響及臨床意義

王再紅1，高兆芳1，李海剛1，李鴻波1，張靜1，楊燕君2

(1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院呼吸科，河北 秦皇島 066000；2.北京市第二醫(yī)院綜合內(nèi)科，北京 100031)

[摘要]目的 比較長期吸煙和非長期吸煙肺癌患者癌組織、癌旁組織及周邊組織含V-Set域的T細(xì)胞激活抑制因子(V-Set domain-containing t-cell activation inhibitor 1，B7-H4)、P53表達(dá)的差異,探討長期吸煙對B7-H4、P53在肺癌及周邊組織表達(dá)的影響及其臨床意義。方法選擇肺癌患者115例,其中吸煙組65例,非吸煙組50例。采用免疫組織化學(xué)方法檢測2組中肺癌組織、癌旁組織及周邊組織B7-H4和P53蛋白的表達(dá)。結(jié)果2組癌組織中B7-H4、P53陽性表達(dá)均高于癌旁組織及周邊組織(P<0.05)；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4、P53陽性表達(dá)均高于非吸煙組(P<0.05)。B7-H4、P53在吸煙組和非吸煙組肺癌組織中的表達(dá)均呈正相關(guān)。結(jié)論吸煙可使肺組織B7-H4、P53蛋白高表達(dá)，二者具有協(xié)同作用,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

[關(guān)鍵詞]肺腫瘤；吸煙；基因表達(dá)

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2016.05.022

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一。全球每年新發(fā)肺癌120萬例，平均每30 s就有1人死于肺癌。其中，中國每年有60多萬人死于肺癌[1]。大量的流行病學(xué)調(diào)查顯示肺癌與吸煙的關(guān)系最為密切。吸煙者除了吸入煙草中含有的多種化學(xué)致癌物，還可導(dǎo)致基因的改變[2]。共刺激分子B7家族中的重要成員含V-Set域的T細(xì)胞激活抑制因子(V-Set domain-containing t-cell activation inhibitor 1，B7-H4)[3]，可介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[4-5]，其在正常上皮中不表達(dá)或低表達(dá)，在多種腫瘤高表達(dá)。野生型P53是有代表性的抑癌基因，但突變的P53失去了抑癌作用，具有了致癌作用。本研究檢測B7-H4、P53在長期吸煙與非吸煙肺癌患者術(shù)后癌組織、癌旁組織及周邊組織中表達(dá)的差異，旨在探討吸煙對肺癌的作用?，F(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2011年1月—2013年3月在河北省秦皇島市海港醫(yī)院行根治手術(shù)并經(jīng)病理確診為肺癌的患者115例。其中高分化58例，中分化41例，低分化16例。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受放療、化療或其他針對腫瘤治療的患者及被動吸煙的患者。所有納入研究的肺癌患者吸煙史明確，并且臨床資料完整。按1984年世界衛(wèi)生組織關(guān)于吸煙調(diào)查方法的標(biāo)準(zhǔn)建議：如果每天吸煙1支以上，時間長于1年者為吸煙，吸煙量1～9支/d為輕度，10～19支/d為中度，20支以上為重度。由于部分病例中僅有吸煙年限的記錄，而吸煙年限也能夠在一定程度上反映出其吸煙量的多少，故將其吸煙年限<10年者定位輕度，11～19年為中度，20年以上為重度。本研究中所指的長期吸煙為吸煙支數(shù)20支/d以上、吸煙年限20年以上。據(jù)此分為吸煙組65例，男性 43例，女性22例，年齡34～71 歲，平均(56.17±4.28)歲。非吸煙組50例，男性36例，女性14例，年齡36～74歲，平均(58.12±4.56)歲。2組性別、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2B7-H4、P53蛋白的檢測方法本研究B7-H4和P53蛋白濃縮液購自武漢博士德生物工程有限公司，按不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實驗，選取最理想表達(dá)的濃度進(jìn)行正式實驗。2種蛋白的實驗檢測均應(yīng)用免疫組織化學(xué)二步法。嚴(yán)格按實驗步驟操作，努力減少誤差。

1.3免疫組織化學(xué)結(jié)果的判定B7-H4以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，P53以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞。計數(shù)5個400倍的高倍視野，取其平均值作為最終的陽性表達(dá)率，以陽性細(xì)胞≥5%定為陽性，<5%定為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1免疫組織化學(xué)檢測B7-H4、P53表達(dá)B7-H4、P53在吸煙組和非吸煙組肺癌組織中均高表達(dá)，均明顯高于癌旁組織和周邊組織(P<0.05)；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4和P53的表達(dá)均高于非吸煙組的癌旁組織和周邊組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；但吸煙組與非吸煙組癌組織B7-H4、P53表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　2組肺癌組織、癌旁組織及周邊組織中B7-H4、P53表達(dá)比較　(例數(shù)，%)

*P<0.05與同組癌組織比較#P<0.05與同組癌旁組織比較(χ2檢驗)

2.2相關(guān)性分析在2組肺癌組織中B7-H4的表達(dá)與P53的表達(dá)呈正相關(guān)(吸煙組rs=0.339、P=0.006，非吸煙組rs=0.477、P=0.000)。提示兩者在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有協(xié)調(diào)作用。

3　討　　論

肺癌的發(fā)生發(fā)展是多階段、多基因、多因素共同作用的結(jié)果。吸煙是導(dǎo)致肺癌的首位危險因素，90%肺癌的發(fā)病與吸煙有關(guān)，并且肺癌中吸煙者的病死率亦高于不吸煙者。Meta分析表明吸煙初始年齡越早，吸煙時間越長，吸煙總量和每日吸煙量越大，吸煙深度越深，戒煙時間越短，發(fā)生肺癌的危險性就越大。吸煙導(dǎo)致肺癌發(fā)生的機(jī)制包括自由基氧化損傷、癌基因與抑癌基因的突變、肺部炎癥損傷等。研究表明，煙草煙霧中含有多種致癌物可經(jīng)體內(nèi)代謝酶的作用激活，形成親電子產(chǎn)物，損傷DNA并使基因突變，從而導(dǎo)致肺癌的發(fā)生[2]。B7-H4、P53在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中均起了重要的作用。本研究通過檢測B7-H4、P53在長期吸煙和非長期吸煙肺癌患者癌組織、癌旁組織及周邊組織表達(dá)的差異,探討長期吸煙對B7-H4、P53在肺癌及周邊組織表達(dá)的影響及其臨床意義。

B7-H4分子含有282個氨基酸[6-7]，屬于B7-CD28共同刺激分子超家族，主要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞等多種細(xì)胞的表面，與其他B7成員不同，B7-H4并沒有明顯的跨膜區(qū)，在腫瘤發(fā)生的免疫應(yīng)答過程中起到重要作用。人B7-H4蛋白能通過降低細(xì)胞因子產(chǎn)生即減少機(jī)體IL-2和IL-4的分泌，抑制CD4+和CD8+的T細(xì)胞活化，阻滯T細(xì)胞周期進(jìn)展，使T細(xì)胞停留在G0/G1期，從而抑制T細(xì)胞增殖進(jìn)展[7-10]。正常生理狀況下，協(xié)同共刺激分子B7-H4通過抑制T淋巴細(xì)胞增殖，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答作用，以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，但B7-H4異常高表達(dá)可使機(jī)體由對腫瘤的免疫監(jiān)視發(fā)展為對腫瘤的免疫耐受，從而實現(xiàn)腫瘤免疫逃逸，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[10]。本研究結(jié)果顯示，吸煙組及非吸煙組肺癌組織中B7-H4均高表達(dá)，從而推斷肺癌組織中B7-H4的高表達(dá)，使得肺癌組織具備了逃逸機(jī)體免疫監(jiān)視的能力，促進(jìn)了肺癌的惡化和轉(zhuǎn)移；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4陽性表達(dá)均高于非吸煙組(P<0.05)，推斷吸煙暴露促進(jìn)了B7-H4蛋白的高表達(dá)，從而揭示吸煙通過對B7-H4表達(dá)的影響而促進(jìn)肺癌的發(fā)生。

P53基因是于1979年發(fā)現(xiàn)的一種可以編碼蛋白的基因。開始認(rèn)為它是一種癌基因，但隨著進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)P53基因是一種重要的抑癌基因，近年來一直受到廣泛的關(guān)注[11]。其編碼的P53蛋白能夠通過調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄來應(yīng)對DNA損傷、癌基因信號激活及基因毒性應(yīng)激等不利因素。P53蛋白是一種核內(nèi)磷酸化蛋白，它以四聚體形式與DNA結(jié)合，分布于細(xì)胞核中。近年來有研究提示P53基因是人類惡性腫瘤中突變頻率最高的基因之一[12]。突變的P53基因在多種腫瘤中高表達(dá)，獲得了致癌功能，是細(xì)胞凋亡的調(diào)控因子[13]，可促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[14]。有研究表明，P53基因在肺癌組織中基因突變的檢出率可以高達(dá)60%～80%。野生型P53蛋白在細(xì)胞中的含量很低，且半衰期極短，所以很難檢測出來。本研究檢測的亦為突變型P53蛋白，顯示吸煙組及非吸煙組肺癌組織中P53蛋白高表達(dá)，且明顯高于癌旁組織及周邊組織。這與卞安春等[15]研究一致，他們發(fā)現(xiàn)突變型P53蛋白在肺腺癌組織中的表達(dá)率為63.7%，并且與肺癌大小及病理分期有關(guān)，通過多因素生存分析顯示P53基因突變的肺腺癌患者預(yù)后較差。本研究結(jié)果還顯示，吸煙組癌旁組織和周邊組織P53陽性表達(dá)均高于非吸煙組(P<0.05)。說明P53基因與肺組織癌變過程密切相關(guān)，而有煙草暴露的情況下P53基因容易發(fā)生突變，提示吸煙與P53基因突變之間存在相關(guān)，并且存在P53基因突變時患者預(yù)后較差。

煙草煙霧中含有4 000多種化學(xué)物質(zhì)，其中大多數(shù)為致癌物質(zhì)，包括一氧化碳、尼古丁和煙焦油，分為氣相和顆粒相兩部分。大部分化學(xué)致癌物在酶的作用下產(chǎn)生自由基而引起DNA突變[1]。本研究中B7-H4、P53在吸煙組及非吸煙組肺癌組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)，且明顯高于癌旁組織和周邊組織；B7-H4、P53在2組肺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。提示B7-H4和P53的高表達(dá)，能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，兩者具有協(xié)同作用，表明肺組織癌變過程與B7-H4、P53基因密切相關(guān)。B7-H4、P53在吸煙組癌旁組織和周邊組織的表達(dá)陽性率均高于非吸煙組癌旁組織和周邊組織， 從而推斷B7-H4、P53基因的突變?yōu)槲鼰煴┞端隆?/p>

總之，深入研究B7-H4、P53與腫瘤的關(guān)系，將有助于進(jìn)一步揭開腫瘤的發(fā)病機(jī)制和對腫瘤進(jìn)行早期的臨床診斷，并為腫瘤的免疫治療提供新的干預(yù)策略和治療靶點。

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(本文編輯：許卓文)

[收稿日期]2015-08-07；[修回日期]2015-11-13

[作者簡介]王再紅(1973-)，女， 河北昌黎人，河北省秦皇島市海港醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事呼吸內(nèi)科疾病診治研究。

[中圖分類號]R734.2

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]B

[文章編號]1007-3205(2016)04-0582-03