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    冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究

    2016-08-10 07:24:51許經(jīng)偉濱州職業(yè)學(xué)院生物工程系山東濱州56603濱州學(xué)院資源環(huán)境系山東濱州56603
    食品科學(xué) 2016年13期
    關(guān)鍵詞:結(jié)構(gòu)鑒定分離純化抗氧化活性

    潘 瑩,許經(jīng)偉(.濱州職業(yè)學(xué)院生物工程系,山東 濱州 56603;.濱州學(xué)院資源環(huán)境系,山東 濱州 56603)

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    冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究

    潘 瑩1,許經(jīng)偉2
    (1.濱州職業(yè)學(xué)院生物工程系,山東 濱州 256603;2.濱州學(xué)院資源環(huán)境系,山東 濱州 256603)

    摘 要:目的:分離純化冬棗多糖,并研究其組分、結(jié)構(gòu)特征和抗氧化活性。方法:采用水提醇沉、脫蛋白脫色、DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-100凝膠色譜柱分離純化冬棗多糖;利用Sephadex G-100凝膠色譜柱進(jìn)行純度鑒定和分子質(zhì)量的測定;通過紫外光譜、紅外光譜、氣相色譜法進(jìn)行了初步結(jié)構(gòu)分析;采用鄰二氮菲法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)體系對(duì)純化多糖進(jìn)行抗氧化活性的研究。結(jié)果:冬棗多糖經(jīng)DEAE-52分離和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分DPA和DPB,經(jīng)Sephadex G-100鑒定均為均一組分,DPA和DPB分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D,不含蛋白質(zhì)和核酸,為吡喃型糖苷環(huán)骨架,DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09;DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78;DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性,隨著多糖質(zhì)量濃度的增加,其抗氧化活性增強(qiáng),在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基清除率分別為28.52%、78.79%,在質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基清除率分別為9.97%、24.54%。結(jié)論:DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性。

    關(guān)鍵詞:冬棗;多糖;分離純化;結(jié)構(gòu)鑒定;抗氧化活性

    引文格式:

    潘瑩, 許經(jīng)偉.冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究[J].食品科學(xué), 2016, 37(13): 89-94.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016. http://www.spkx.net.cn

    PAN Ying, XU Jingwei.Isolation, purification and antioxidant activity of polysaccharides from Zizyphus jujube cv.Dongzao[J].Food Science, 2016, 37(13): 89-94.(in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016. http://www.spkx.net.cn

    冬棗(Zizyphus jujube cv.Dongzao)為鼠李科棗屬植物,為我國特有的一種晚熟鮮食棗。由于冬棗果肉脆嫩多汁,富含人體所需的氨基酸、維生素和微量元素,備受人們喜愛[1]。

    近年來植物多糖成了人們研究的熱點(diǎn),關(guān)于多糖的分離純化[2-4]及活性如抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等[5]研究較多,有文獻(xiàn)報(bào)道冬棗中糖分含量很高,且隨著成熟度的增加,多糖含量也有所增加[1],冬棗多糖物質(zhì)已逐漸引起了人們的關(guān)注。

    目前國內(nèi)外有關(guān)冬棗的研究報(bào)道,主要集中在棗樹的栽培管理、果實(shí)的貯藏與加工、病蟲害防治等方面[6-7],本研究在前期提取工藝[8]和脫蛋白工藝[9]優(yōu)化的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)冬棗多糖進(jìn)行脫色,采用DEAE-52分離和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分,并對(duì)其采用凝膠色譜法、紫外光譜法、紅外光譜法、氣相色譜法進(jìn)行了純度鑒定、分子質(zhì)量測定、光譜特征、單糖組成等基本特征研究,還測定純化多糖的抗氧化活性,以期為開發(fā)天然抗氧劑和冬棗多糖的綜合利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    冬棗 山東省沾化縣市售。

    DEAE-52、葡聚糖T10、T20、T40、T70、T500、藍(lán)色葡聚糖2000 瑞典Phamacia公司;木瓜蛋白酶(3×107U/g)、L-阿拉伯糖 美國Sigma公司;Sephadex G-100、L-鼠李糖、葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、透析袋(截留分子質(zhì)量3 500 D) 上海藍(lán)季生物科技有限公司;D-半乳糖醛酸 上海源葉生物科技有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH) 上海伊卡生物技術(shù)有限公司;粉末狀活性炭 鞏義市元亨凈水材料廠;LS-850樹脂 陜西藍(lán)深特種樹脂有限公司;AB-8型樹脂、D-101型樹脂 安徽三星樹脂科技有限公司;無水乙醇、丙酮、濃硫酸、苯酚、氯化鈉、氫氧化鈉、鹽酸、三氟乙酸、鹽酸羥胺、乙酸酐、肌醇、磷酸二氫鉀、抗壞血酸(VC)、鄰二氮菲、硫酸亞鐵、過氧化氫(H2O2)均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    FR224CN 電子分析天平 奧豪斯儀器有限公司;ZD-85氣浴恒溫振蕩器 金壇市國旺實(shí)驗(yàn)儀器廠;TH-500A梯度混合器、BT1-100恒流泵、SBS-100-LCD數(shù)控計(jì)滴自動(dòng)部分收集器 上海琪特分析儀器有限公司;TU-1810紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司;RE-52AAA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海嘉鵬科技有限公司;FL9720氣相色譜儀 浙江福立分析儀器有限公司;Nicolet 380傅里葉紅外光譜儀 美國Nicolet公司;MD200氮吹儀 金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 冬棗多糖的提取和脫蛋白

    冬棗60 ℃烘干后粉碎過60 目篩,在100 ℃按料液比1∶25(m/V)提取4 h,離心后減壓濃縮,并用無水乙醇于4 ℃靜置過夜,所得沉淀依次用無水乙醇和丙酮洗滌,并經(jīng)真空干燥得冬棗粗多糖。

    將冬棗粗多糖配成1 g/100 mL溶液,先在40 ℃條件下用450 U/mL木瓜蛋白酶酶解1.5 h后,采用9 g/100 mL三氯乙酸脫蛋白,再用1 g/100 mL氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0,得脫蛋白冬棗多糖。

    1.3.2 冬棗多糖的脫色

    脫蛋白冬棗多糖液為橙黃色,在400~780 nm波長范圍內(nèi)掃描發(fā)現(xiàn)其無最大吸收峰,根據(jù)溶液的互補(bǔ)色,選擇在420 nm波長處測定其吸光度,并按公式(1)計(jì)算脫色率。多糖含量采用苯酚-硫酸法[15]測定,其多糖保留率的計(jì)算見公式(2)。

    1.3.2.1 活性炭脫色[10]

    取步驟1.3.1節(jié)中脫蛋白冬棗多糖液,按照1 g/100 mL的量向其中加入活性炭,于40 ℃、125 r/min條件下恒溫振蕩40 min,過濾,取濾液稀釋后測定多糖脫色率和多糖保留率。

    1.3.2.2 樹脂脫色[11]

    采用靜態(tài)吸附法,將預(yù)處理好的AB-8、D-101、LS-850樹脂,樹脂與脫蛋白多糖液按0.75∶10(m/V)的比例在125 r/min常溫條件下振蕩2.5 h,過濾后取濾液稀釋定容到25 mL后測定多糖脫色率和多糖保留率。

    1.3.3 冬棗多糖的分離和純化

    將脫蛋白脫色多糖液配成100 mg/3 mL的溶液,取3 mL上樣于預(yù)先平衡好的DEAE-52纖維素柱(2.6 cm×30 cm),依次用蒸餾水、0.2、0.3、0.5、1 mol/L的NaCl溶液洗脫[12-13],流速為1 mL/min,以每管5 mL收集洗脫液,用苯酚-硫酸法[14]于490 nm波長處隔管檢測,合并各吸收的洗脫液,經(jīng)減壓濃縮裝入透析袋,在流動(dòng)水和蒸餾水中分別透析48 h和24 h后上樣于Sephadex G-100凝膠色譜柱(1.6 cm×40 cm),用蒸餾水洗脫,以每管1.5 mL收集洗脫液,用苯酚-硫酸法逐管檢測,合并各吸收的洗脫液,經(jīng)減壓濃縮和真空干燥得2 種冬棗純化后多糖,分別記為DPA和DPB。

    1.3.4 冬棗多糖組分的純度及分子質(zhì)量

    采用凝膠色譜法測定冬棗多糖的純度及分子質(zhì)量[15]。將標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖T10、T20、T40、T70、T500、冬棗多糖DPA和DPB分別上樣于Sephadex G-100凝膠色譜柱,用蒸餾水洗脫,流速為0.3 mL/min,以每管1.5 mL收集洗脫液,用苯酚-硫酸法逐管檢測,記錄不同相對(duì)分子質(zhì)量的多糖經(jīng)過凝膠柱的洗脫體積(Ve)和用藍(lán)色葡聚糖-2000上柱求得柱的外水體積(V0),以Ve/V0為縱坐標(biāo),lgMw為橫坐標(biāo),計(jì)算曲線方程,并繪制冬棗多糖洗脫曲線,根據(jù)洗脫曲線判斷多糖純度是否均一。

    1.3.5 光譜分析

    1.3.5.1 紫外光譜分析

    將冬棗多糖DPA和DPB粉末分別配制成1 mg/mL的溶液,在200~700 nm波長范圍內(nèi)掃描,觀察其在260、280 nm波長處有無吸收峰。

    1.3.5.2 紅外光譜分析[16]

    將1 mg干燥的冬棗多糖DPA和DPB粉末分別與100 mg KBr固體粉末在瑪瑙研缽中研磨均勻,用壓片機(jī)壓成薄片,在4 000~400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描。

    1.3.6 理化性質(zhì)分析

    1.3.6.1 顯色反應(yīng)[16]

    將2 種冬棗多糖分別配制成1 mg/mL溶液,分別進(jìn)行苯酚-硫酸反應(yīng)、茚三酮反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)、碘-碘化鉀反應(yīng)、斐林試劑反應(yīng)、三氯化鐵反應(yīng)。

    1.3.6.2 比旋度測定

    將2 種冬棗多糖分別配制成10 mg/mL溶液,20 ℃條件下用1 dm的旋光管測定其旋光度。

    1.3.6.3 糖醛酸含量測定

    將冬棗多糖DPB配制成1 mg/mL溶液,以半乳糖醛酸為對(duì)照,采用硫酸-咔唑法[17],在523 nm波長處測定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算多糖DPB中糖醛酸的含量。

    1.3.7 單糖組成分析

    參照文獻(xiàn)[15]的方法,分別稱取10 mg多糖樣品DPA、DPB和標(biāo)準(zhǔn)單糖(鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、葡萄糖、D-半乳糖)各加入3 mL 2 mol/L的三氟乙酸,封管后110 ℃條件下水解4 h,待水解產(chǎn)物冷卻至室溫,加入3 mL甲醇,50 ℃氮吹濃縮至干,重復(fù)3 次,盡量除盡三氟乙酸,得多糖水解產(chǎn)物。水解產(chǎn)物中分別加入10 mg鹽酸羥胺、5 mg肌醇、0.5 mL無水吡啶,混勻后,90 ℃水浴加熱30 min,取出,冷卻至室溫,加入0.5 mL無水乙酐,90 ℃水浴加熱30 min,制得多糖樣品糖腈乙酸化產(chǎn)物。產(chǎn)物在氮吹儀上濃縮至干,加入1.0 mL氯仿復(fù)溶,溶液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后進(jìn)氣相色譜(gas chromatography,GC)儀分析。氣相色譜條件為:SE-30毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm),氫火焰離子化檢測器(hydrogen flame ionization detector,F(xiàn)ID)檢測器;氫氣、空氣、氮?dú)怏w積流量分別為16、150、20 mL/min;進(jìn)樣口溫度230 ℃,檢測器溫度240 ℃;色譜柱采用程序升溫,起始溫度130 ℃,以5 ℃/min速率升至180 ℃/min,保持2 min,再以5 ℃/min速率升至220 ℃,保持10 min。

    1.3.8 抗氧化活性研究

    1.3.8.1 羥自由基(·OH)清除率的測定

    將純化后DPA和DPB分別配制成0.2、0.4、0.8、1.2、2.4、3.2、4、4.8、6.4、8.0 mg/mL的溶液,按照文獻(xiàn)[18],采用鄰二氮菲法進(jìn)行·OH清除率的測定,以VC為對(duì)照。

    1.3.8.2 DPPH自由基清除率的測定

    采用DPPH體系[19]測定純化后DPA和DPB質(zhì)量濃度分別為0.005、0.01、0.02、0.04、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL時(shí)的DPPH自由基清除率,并以VC為對(duì)照。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 冬棗多糖的提取和脫蛋白

    冬棗多糖經(jīng)水提醇沉,無水乙醇和丙酮洗滌,真空干燥后得冬棗粗多糖;再將粗多糖用木瓜蛋白酶-三氯乙酸法脫蛋白,得脫蛋白冬棗多糖。

    2.2 冬棗多糖的脫色

    以多糖脫色率和多糖保留率為指標(biāo),比較幾種脫色工藝,結(jié)果見表1,活性炭脫色效果最好,其多糖脫色率為78.71%,多糖保留率為90.22%。之后將脫蛋白多糖用活性炭脫色后經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得冬棗多糖DPI。

    表 1 冬棗多糖不同脫色方法的結(jié)果Table 1 Pigment removal and polysaccharide retention with differentsorbents指標(biāo) 活性炭 樹脂LS-850 樹脂AB-8 樹脂D-101多糖脫色率/% 78.71 20.77 14.75 46.08多糖保留率/% 90.22 80.05 90.12 83.00

    2.3 冬棗多糖的分離和純化

    DPI經(jīng)洗脫,并用苯酚-硫酸法隔管檢測后,由圖1可知,用蒸餾水和0.2 mol/L NaCl洗脫時(shí),各出現(xiàn)1 個(gè)洗脫峰,再經(jīng)減壓濃縮、透析后分別上Sephadex G-100凝膠色譜柱,由圖2可知,用蒸餾水洗脫,均為單一洗脫峰。收集洗脫峰,經(jīng)減壓濃縮和真空干燥后獲得2 種冬棗多糖DPA和DPB,其總糖含量分別為92.47%、84.99%,其得率分別為脫蛋白脫色多糖的11.49%、10.41%。

    2.4 冬棗多糖組分的純度及分子質(zhì)量

    由標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖的洗脫體積(Ve)和藍(lán)色葡聚糖2000外水體積(V0)及其分子質(zhì)量,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Ve/V0=-0.597 8 lgMw+6.901 2(R2=0.997 3),DPA和DPB的分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D。由圖2可知,DPA和DPB峰形尖銳,對(duì)稱性好,說明其純度較高,分子質(zhì)量分布較為均一。

    2.5 光譜分析

    2.5.1 紫外光譜分析

    由圖3可知,將DPA和DPB分別在200~700 nm波長范圍內(nèi)掃描后,發(fā)現(xiàn)在波長200 nm附近有一個(gè)較強(qiáng)的吸收峰,而在260、280 nm波長處均無吸收,表明其不含核酸和蛋白質(zhì)[20]。

    2.5.2 紅外光譜分析

    由圖4可知,DPA和DPB的紅外光譜在3 400 cm-1附近均有1 個(gè)強(qiáng)的吸收峰,是多糖分子間或分子內(nèi)的O—H的伸縮振動(dòng)引起的;在1 638.03、1 637.41 cm-1處有強(qiáng)的吸收峰,為C=O不對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰;在1 410 cm-1附近的峰是糖類C—H變角振動(dòng)吸收峰;在1 150~1 050 cm-1的峰是吡喃型糖苷環(huán)骨架C—O變角振動(dòng)吸收峰,說明分子中存在C—O—H和糖環(huán)C—O—C結(jié)構(gòu)[21];2 種多糖中分別在864.63、868.59 cm-1處有吸收峰,說明其可能含有β-D-葡萄吡喃糖吸收峰[16],其他結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步研究確證。

    2.6 理化性質(zhì)分析

    2.6.1 顯色反應(yīng)

    DPA和DPB進(jìn)行苯酚-硫酸反應(yīng)為陽性,茚三酮反應(yīng)為陰性,雙縮脲反應(yīng)為陰性,碘-碘化鉀反應(yīng)為陰性,三氯化鐵反應(yīng)為陰性,DPA、DPB斐林試劑反應(yīng)分別為陽性和陰性,說明2 種多糖都為糖類化合物,不含氨基酸、蛋白質(zhì)、淀粉,無酚羥基,其中DPA為還原多糖。

    2.6.2 比旋度

    DPA和DPB在20 ℃條件下測得的比旋度分別為+20.55?、+68.01?。

    2.6.3 糖醛酸含量

    一系列糖醛酸含量按照硫酸-咔唑法所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A523 nm=0.005 8ρ+0.03,式中A523 nm為吸光度,ρ為糖醛酸質(zhì)量濃度。說明在糖醛酸10.7~107 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi),線性關(guān)系保持良好(R2=0.993),DPB中糖醛酸的含量分別為5.56%。

    2.7 單糖組成分析

    將5 種標(biāo)準(zhǔn)單糖、混合標(biāo)準(zhǔn)品及待測的2 種冬棗多糖樣品分別進(jìn)GC,根據(jù)保留時(shí)間確定單糖組成,根據(jù)峰面積確定單糖組成物質(zhì)的量比。由圖5可知,DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09;DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78。DPA的組成主要為阿拉伯糖和葡萄糖,DPB主要組成為阿拉伯糖、半乳糖和鼠李糖。

    2.8 抗氧化活性

    2.8.1 ·OH清除能力

    由圖6可知,在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi),隨著多糖質(zhì)量濃度的增加,·OH清除率逐漸增加,DPA、DPB 的·OH清除率均低于VC。DPA質(zhì)量濃度從0.2 mg/mL上升至8 mg/mL,其·OH清除率幅度變化較小,在8 mg/mL時(shí),其·OH清除率為28.52%;DPB質(zhì)量濃度從3.2 mg/mL上升至8 mg/mL,其·OH清除率幅度增加較大,在8 mg/mL時(shí),其·OH清除率為78.79%。

    2.8.2 DPPH自由基清除能力

    由圖7可知,隨著DPA、DPB質(zhì)量濃度的增加,DPPH自由基清除率逐漸增加,當(dāng)質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí),VC、DPA、DPB的DPPH自由基清除率分別為96.21%、9.97%、24.54%,在質(zhì)量濃度在0.005~0.4 mg/mL間,DPA和DPB的DPPH自由基清除率增加緩慢,其DPPH自由基清除率均不高。

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)以冬棗為原材料,經(jīng)過水提醇沉干燥得冬棗粗多糖,再經(jīng)木瓜蛋白酶-三氯乙酸法脫蛋白,以多糖脫色率和多糖保留率為指標(biāo),比較了活性炭和3 種樹脂脫色效果,結(jié)果表明活性炭脫色效果最好,其脫色工藝條件為向脫蛋白多糖液中加入1%活性炭在40 ℃、125 r/min條件下室溫振蕩40 min,其多糖脫色率為78.71%,多糖保留率為90.22%。

    將脫蛋白脫色多糖液經(jīng)干燥,配成一定溶液上DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分DPA和DPB,采用凝膠色譜法分別對(duì)DPA和DPB進(jìn)行了純度鑒定和分子質(zhì)量測定,結(jié)果表明峰形尖銳,對(duì)稱性好,純度高,其分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D。

    光譜分析表明DPA和DPB不含核酸和蛋白質(zhì),具有多糖特征吸收,理化實(shí)驗(yàn)表明2 種多糖不含氨基酸和蛋白質(zhì),不含淀粉,無酚羥基,其中DPA為還原糖。DPA和DPB的比旋度分別為+20.55 ?、+68.01 ?;DPB中糖醛酸含量為5.56%。

    采用糖腈乙酸酯化衍生法對(duì)DPA、DPB進(jìn)行單糖組成分析,結(jié)果表明DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09;DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78。

    多糖的抗氧化活性與多糖的結(jié)構(gòu)、分子質(zhì)量及單糖的種類和連接方式有關(guān)[22]。對(duì)純化的DPA和DPB進(jìn)行·OH清除率和DPPH自由基清除率的測定,結(jié)果表明DPA和DPB兩種多糖都具有一定的抗氧化活性,隨著多糖質(zhì)量濃度增加,其抗氧化活性逐漸增強(qiáng),DPB具有較高的·OH清除率,而DPA和DPB的DPPH自由基清除率均不高。在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi),DPB的·OH清除率和DPPH自由基清除率均高于DPA,可能與DPB為酸性多糖含帶負(fù)電荷的糖醛酸或分子質(zhì)量大小有關(guān),究其原因有待進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn):

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    DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016

    中圖分類號(hào):TS201.2

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1002-6630(2016)13-0089-06

    收稿日期:2015-07-27

    基金項(xiàng)目:山東省高校科研計(jì)劃項(xiàng)目(J13LE61)

    作者簡介:潘瑩(1982—),女,講師,碩士,研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物活性。E-mail:panying111@163.com

    Isolation, Purification and Antioxidant Activity of Polysaccharides from Zizyphus jujube cv.Dongzao

    PAN Ying1, XU Jingwei2
    (1.Department of Biological Engineering, Binzhou Vocational College, Binzhou 256603, China;2.Department of Resources and Environment, Binzhou University, Binzhou 256603, China)

    Abstract:Objective: To study the monosaccharide composition, structure and antioxidant activity of polysaccharide fractions isolated and purified from Zizyphus jujube cv.Dongzao.Methods: The extraction of polysaccharides was performed by water extraction and subsequent ethanol precipitation, and after removal of proteins and pigments, the polysaccharides were purified by successive DEAE-52 cellulose column and Sephadex G-100 gel column chromatography.The purity and molecular weights of the purified polysaccharides were determined by Sephadex G-100 column chromatography.Preliminary structural characterization was carried out by ultraviolet-visible (UV-VIS) spectroscopy, infrared (IR)spectroscopy and gas chromatography (GC).The antioxidant activity of the crude and purified polysaccharides was evaluated using the phenanthroline method and 1, 1-diphenyl-2-picrylhydroxyl (DPPH) radical scavenging activity assay.Results: Two polysaccharide fractions (DPA and DPB) were purified to homogeneity from the crude polysaccharides as identified by Sephadex G-100.The molecular weight of DPA and DPB was 1.04 × 104and 3.02 × 105D, respectively.DPA and DPB did not contain protein or nucleic acid, but contained the pyranose ring skeleton glucoside.The monosaccharide composition of DPA consisted of arabinose, mannose, glucose and galactose with a molar ratio of 6.66:1.00:6.75:2.09, whereas that of DPB consisted of rhamnose, arabinose, mannose, glucose and galactose with a molar ratio of 4.33:10.90:1.00:3.25:4.78.The crude polysaccharides, DPA and DPB all had antioxidant activity in a concentration dependent manner.The scavenging percentages of DPA and DPB at 8 mg/mL for hydroxyl radical were 28.52% and 78.79% respectively, which were 9.97% and 24.54% at 0.4 mg/mL, respectively.Conclusion: Both DPA and DPB had antioxidant activity.

    Key words:Zizyphus jujube cv.Dongzao; polysaccharide; isolation and purification; structure identification; antioxidant activity

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