膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因TaqIB多態(tài)性與新疆維吾爾族心房顫動(dòng)患者的相關(guān)性研究

郁秀琴，木胡牙提，楊玉春，劉志強(qiáng)

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院綜合心臟內(nèi)科，烏魯木齊　830054)

膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因TaqIB多態(tài)性與新疆維吾爾族心房顫動(dòng)患者的相關(guān)性研究

郁秀琴，木胡牙提，楊玉春，劉志強(qiáng)

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院綜合心臟內(nèi)科，烏魯木齊830054)

摘要：目的探討膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(CTEP TaqIB)T-aqIB多態(tài)性與新疆地區(qū)維吾爾族心房顫動(dòng)(房顫)患者的關(guān)系。方法選取2014年2月—2015年10月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院綜合心臟內(nèi)科收住的維吾爾族非瓣膜性房顫患者100例(房顫組)及在體檢中心進(jìn)行體檢的維吾爾族非房顫患者100例(對(duì)照組)，從外周靜脈血中提取基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性法(PCR-PFLP)進(jìn)行基因多態(tài)性檢測(cè)，比較兩組人群基因多態(tài)性分布的差異。結(jié)果房顫組與對(duì)照組樣本CTEP TaqIB基因多態(tài)性基因型符合哈迪-溫伯格(Hardy-weinberg)平衡(房顫組χ2=0.72，P=0.39；對(duì)照組χ2=0.64，P=0.42)。CTEP TaqIB基因位點(diǎn)的測(cè)序結(jié)果顯示其存在GG型、GA型、AA型3種基因型。基因型GG、GA、AA在維吾爾族房顫人群中分別有39例(39%)、50例(50%)、11例(11%)，在對(duì)照組人群中分別有24例(24%)、54例(54%)、22例(22%)，兩組基因型和等位基因分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.57，P=0.037 4；χ2=6.91，P=0.008 5)。結(jié)論新疆地區(qū)維吾爾族心房顫動(dòng)的發(fā)生與CTEP TaqIB基因多態(tài)性有相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：心房顫動(dòng)； 民族； CTEP； 基因多態(tài)性

心房顫動(dòng)(atrial fibrillation，AF)是臨床上最常見的快速性心律失常，由于心房雜亂無序的電活動(dòng)，使心房喪失有效的收縮和舒張，導(dǎo)致血流動(dòng)力學(xué)改變，可導(dǎo)致一系列嚴(yán)重后果(如腦卒中、心力衰竭、心絞痛、心動(dòng)過速性心肌病等)，患病率高且是一種增齡性疾病[1]，隨著年齡的增長，房顫的發(fā)病率也在明顯增高，美國成年人房顫的患病率為0.9%，其中年齡>50歲人群患病率為0.5%，>80歲人群患病率接近10%[2]。國內(nèi)調(diào)查研究顯示我國房顫患病率為0.77%，>80歲者為7.5%[3]。隨著心臟病搶救成功率的提高和死亡率的下降，社會(huì)人口的老齡化，房顫的發(fā)病率呈現(xiàn)隨年齡增長顯著增高的趨勢(shì)，然而房顫確切的發(fā)生機(jī)制至今尚未完全闡明。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)水平的不斷提高，單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)與房顫的關(guān)系的研究取得了一定的進(jìn)展[4-5]。多國學(xué)者認(rèn)為房顫的發(fā)生和持續(xù)與膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因(CETP TaqIB)多態(tài)性明顯相關(guān)，并且還有關(guān)于多種族房顫易感基因多態(tài)性的研究[6-9]。但目前尚未見新疆維吾爾族房顫的發(fā)生與膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因(CETP TaqIB)相關(guān)聯(lián)的研究報(bào)道，本研究擬在新疆地區(qū)維吾爾族房顫人群與非房顫人群間行CETP TaqIB基因多態(tài)性的研究，旨在探討CETP TaqIB基因多態(tài)性與新疆地區(qū)維吾爾族房顫發(fā)生的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象選取新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年2月-2015年10月在綜合心臟內(nèi)科住院并經(jīng)心電圖、心臟超聲檢查確診為非瓣膜性房顫的維吾爾族患者100例(房顫組)，選擇同期在我院體檢中心就診的維吾爾族非房顫患者100例(對(duì)照組)。房顫以2006年ACC/AHA/ESC房顫防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。房顫組納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)心電圖或動(dòng)態(tài)心電圖證實(shí)為心房顫動(dòng)，并除外其他心律失常；經(jīng)心臟超聲證實(shí)的非瓣膜性心臟病的房顫患者。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：選擇同一醫(yī)院、同一時(shí)期無房顫病史，且其所有心電圖檢查包括Holter無房顫表現(xiàn)的患者。房顫組和對(duì)照組均無瓣膜性心臟病、先天性心臟病、自身免疫性疾病、風(fēng)濕疾病、惡性腫瘤、血緣關(guān)系、肝腎疾病及2 w內(nèi)外傷史患者。兩組患者年齡、性別、吸煙、心力衰竭病史、高血壓病史、糖尿病病史、體質(zhì)指數(shù)(BMI)等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1提取基因組DNA采集所納入的維吾爾族房顫組和非房顫組各100例血液樣本，空腹?fàn)顟B(tài)下每人抽取外周靜脈血5 mL置乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，-20℃冰箱保存。按步驟說明規(guī)范操作使用基因組DNA提取試劑盒(由北京天根生化科技有限公司提供)提取基因組DNA。

1.2.2引物設(shè)計(jì)參照文獻(xiàn)[10]方法設(shè)計(jì)引物，CETP基因TaqIB引物序列如下：正向引物：5′-CAC TAG CCC AGA GAG AGG CC-3′，反向引物：5′-CTG AGC CCA GCC GCA CAC TAA C-3′。

1.2.3聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-PFLP)分析20 μL PCR反應(yīng)體系包括：PCR mix 10 μL、上游引物 0.5 μL、下游引物0.5 μL、超純水(ddH2O)7 μL、基因組DNA2 μL。PCR反應(yīng)條件：CETP基因TaqIB為預(yù)變性95℃ 3 min，變性95℃ 30 s，退火60℃ 30 s，延伸72℃ 45 s，重復(fù)30個(gè)循環(huán)；延伸72℃ 5 min，迅速冷卻至4℃。PCR的產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳觀察擴(kuò)增結(jié)果，并照相存儲(chǔ)照片。由上海生工生物工程有限公司對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，并對(duì)突變位點(diǎn)進(jìn)行定位。

2結(jié)果

2.1兩組患者CETP TaqIB PCR擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物比較CETP TaqIB基因位于第1內(nèi)含子277位的G→A發(fā)生點(diǎn)突變(G277A)，擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為535 bp，見圖1。CETP TaqIB 基因位點(diǎn)的測(cè)序結(jié)果顯示其存在3種基因型：GG型(圖2)、GA型(圖3)、AA型(圖4)(箭頭指向突變位點(diǎn))。

2.2哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)平衡檢驗(yàn)結(jié)果經(jīng)檢驗(yàn)，CETP TaqIB基因多態(tài)性基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，房顫組與對(duì)照組P值均>0.05，提示本試驗(yàn)的樣本具有代表性(表1)。

2.3房顫組和對(duì)照組CETP TaqIB基因頻率對(duì)比基因型GG、GA、AA在維吾爾族房顫人群中分別有39例(39%)、50例(50%)、11例(11%)，在對(duì)照組人群中分別有24例(24%)、54例(54%)、22例(22%)，兩組基因型和等位基因分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.574，P=0.0374；χ2=6.91，P=0.008 5)(表2)。

M: DNA marker; 1～10: 房顫組10例患者DNA樣本

圖2　無突變純合子GG基因型

圖3　雜合子GA基因型

圖4　突變純合子AA基因型

表1　房顫組與對(duì)照組哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)平衡定律吻合度檢驗(yàn)

表2　兩組病例CETP TaqIB基因多態(tài)性基因型分布和等位基因頻率/例(%)

3討論

膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(cholesteryl ester transfer protein，CETP)是一種單鏈高疏水性糖蛋白，其主要功能是負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，與體內(nèi)血脂水平、組成及顆粒的大小密切相關(guān)[10]。CETP基因位于人第16染色體長臂，長度約25 kb，含16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子[11]，是重要的調(diào)脂基因之一，該基因編碼產(chǎn)物 CETP 是一種脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)蛋白，其在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用[12]。CETP影響高密度脂蛋白(High-Density Lipoprotein HDL)和 低密度脂蛋白(Low-Density Lipoprotein LDL)顆粒大小的分布，是參與 HDL 代謝和決定 HDL、LDL 水平的重要因素[13-14]。

已有研究發(fā)現(xiàn)CETP TaqIB與非瓣膜性房顫發(fā)病顯著相關(guān)[10]。Barter等[6]研究發(fā)現(xiàn)，人類CETP基因TaqIB多態(tài)位點(diǎn)A引起血漿中CETP水平降低，使膽固醇酯從HDL-C逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到LDL-C作用減弱，從而使血漿HDL-C升高，LDL-C降低且氧化減少，進(jìn)而降低血管壁的炎癥，CETP G等位基因?qū)е翷DL-C升高，引起血管壁炎癥及氧化應(yīng)激。Shen等[15]研究證明糖尿病、高血壓、心肌梗死都是非瓣膜性房顫的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。國內(nèi)學(xué)者研究顯示，漢族人群 CETP TaqlB 遺傳多態(tài)性與非瓣膜性心房顫動(dòng)發(fā)病可能有相關(guān)性[8-9,17]。徐力辛等[16]發(fā)現(xiàn)CETP TaqlB、KCNE1 S38G、eNOS-T786C基因多態(tài)性之間存在交互作用，能夠增加非瓣膜性房顫易感性。目前尚未見新疆地區(qū)維吾爾族人群CETP TaqlB與非瓣膜性房顫的相關(guān)性研究。本研究基于上述研究基礎(chǔ)，對(duì)新疆地區(qū)維吾爾族人群CETP TaqlB與非瓣膜性房顫的相關(guān)性進(jìn)行研究，研究發(fā)現(xiàn)房顫組和對(duì)照組的TaqlB 基因型均以GG和GA為主，CTEP TaqIB基因存在GG型、GA型、AA型3種基因型。新疆維吾爾族心房顫動(dòng)和非心房顫動(dòng)人群CTEP TaqIB基因多態(tài)位點(diǎn)基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CETP TaqlB基因多態(tài)性與維吾爾族非瓣膜性房顫的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。

綜上所述，新疆地區(qū)維吾爾族CETP TaqlB基因型頻率和等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于CETP基因TaqlB多態(tài)性是位于CETP基因的第1內(nèi)含子，其附近區(qū)域是否存在未知功能的突變位點(diǎn)并不能排除，從而影響CETP含量和活性，導(dǎo)致脂代謝紊亂和心房顫動(dòng)的發(fā)生。因本研究樣本量偏小，且新疆是一個(gè)多民族聚集的地區(qū)，今后還需開展大樣本、多民族的廣泛深入的研究，為非瓣膜性心房顫動(dòng)的治療指引方向。

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(本文編輯楊晨晨)

The correlation on polymorphism of cholesterol ester transfer protein gene TaqIB and atrial fibrillation Uyghur patients in Xinjiang

YU Xiuqin, Muhuyati, YANG Yuchun, LIU Zhiqiang

(Heart Interal Medicine Center，the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the association between polymorphism of cholesterol ester transfer protein gene (CTEP) TaqIB and atrial fibrillation (AF) Uyghur patients in Xinjiang. Methods100 cases Uyghur patients with atrial fibrillation (AF group) and 100 cases Uyghur patients with non-atrial fibrillation (control group) admitted by Heart Center of the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from February 2014 to October 2015 were selected to extract DNA samples from the peripheral blood to monitor gene polymorphism of TaqIB by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique and to compare polymorphism distribution between the two groups. Res-ultsCTEP TaqIB gene polymorphisms genotypes in AF group and control group samples was in the balance of Hardy-Weinberg equilibrium (AF group χ2=0.72, P=0.39; control group χ2=0.64, P=0.42), CTEP TaqIB loci sequencing results showed the existence of GG, GA and AA genotypes. GG, GA and AA in Uighur with AF were 39 cases (39%), 50 cases (50%) and 11 cases (11%), while that in the control group were 24 cases (24%), 54 cases (54%) and 22 cases (22%), in which genotype and allele distribution differences of the two groups were statistically significant (χ2=6.574, P=0.037 4; χ2=6.91, P=0.008 5). ConclusionTaqIB polymorphism had a quite significant correlation to the atrial fibrillation Uyghur patients in Xinjiang.

Keywords:Atrial fibrillation; Ethnic; CTEP; Gene polymorphism

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(81260036)

作者簡介：郁秀琴(1977-)，女，在讀碩士，主治醫(yī)師，研究方向：電生理臨床研究，心血管介入治療與基礎(chǔ)研究。 通信作者：木胡牙提，男(哈薩克族), 博士，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，研究方向： 電生理臨床研究，心血管介入治療與基礎(chǔ)研究，E-mail：muhuyati@163.com。

中圖分類號(hào)：R541.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1009-5551(2016)07-0845-04

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.07.008

[收稿日期：2016-06-02]

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究·