男性精液參數(shù)與體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的相關(guān)性研究

徐艷霞

(廣東省東莞康華醫(yī)院生殖中心　523080)

·論著·

男性精液參數(shù)與體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的相關(guān)性研究

徐艷霞

(廣東省東莞康華醫(yī)院生殖中心523080)

摘要:目的探討男性精液參數(shù)與體外受精(IVF)-胚胎移植妊娠結(jié)局的相關(guān)性。方法收集2013年1月至2014年12月東莞康華醫(yī)院生殖中心第1周期長方案IVF -胚胎移植的371個周期，分析不同妊娠結(jié)局中男性精液參數(shù)的差異。結(jié)果臨床妊娠組和未妊娠組精子密度、活率、活力和精子正常形態(tài)百分比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論精液參數(shù)對IVF臨床妊娠結(jié)局的預測價值比較有限。

關(guān)鍵詞:精子；體外受精-胚胎移植；妊娠結(jié)局

近年來，不孕癥已成為一個困擾社會、家庭的實際問題，其發(fā)病率呈上升趨勢。據(jù)預測，在21世紀不孕不育將成為僅次于腫瘤和心腦血管疾病的第3大疾病。目前，我國不孕不育發(fā)病率為12.5%～15.0%。不孕不育夫婦中約30%是由男性因素引起的，另有20%～30%是夫婦雙方因素共同導致。精液分析參數(shù)是臨床上常檢測的項目，對預測體外受精(IVF)結(jié)局具有一定的參考價值[1]?！禬HO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)指出，一次射精的精子總數(shù)和精子濃度與妊娠時間和妊娠率存在相關(guān)性，并且精子密度、精子形態(tài)、精子活力和精子活率是評價精液質(zhì)量的主要參數(shù)[2]。本研究旨在分析進行輔助生殖技術(shù)(ART)治療的夫婦精子密度、精子活率、精子活力和精子形態(tài)對ART患者體外受精(IVF)妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2014年12月在東莞康華醫(yī)院生殖中心行第1周期長方案IVF-胚胎移植的371個周期作為研究對象，男方平均年齡(33.69±4.86)歲，女方平均年齡(30.44±3.05)歲，不孕年限(4.25±2.89)年。納入標準：(1)選擇不孕原因單純?yōu)榕捷斅压芤蛩鼗蚰蟹缴?、弱、畸精子癥，第1周期，篩除女方年齡大于35歲者。(2)排除女方因素的排卵障礙、子宮內(nèi)膜異位癥等影響卵子發(fā)育的情況及宮腔因素。(3)男方無遺傳病家族史及性功能障礙病史，無不良生活習慣(嗜酒、抽煙、吸毒等)，體檢未發(fā)現(xiàn)明顯外生殖器及輸精管異常。

1.2研究方法

1.2.1主要試劑(1)精子形態(tài)學檢測：精子形態(tài)染色檢測試劑盒(Diff-Quik法)購自深圳華康生物醫(yī)學工程有限公司。(2)IVF及胚胎培養(yǎng)：G-MOPS PLUS、G-IVF PLUS、G1-PLUS、G2-PLUS，SPERMRINSE及SPERMGRAD等試劑均來自瑞典Vitrolife公司。

1.2.2控制性促排卵女方均使用長方案促排卵，在前次月經(jīng)周期的第21～23天開始注射促性腺激素釋放激素激動劑(GnRHa)，使用14～16 d后再用促排卵藥物，定期監(jiān)測卵泡及雌激素水平，當超聲監(jiān)測到直徑大于或等于18 mm的優(yōu)勢卵泡有2個以上時肌肉注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)10 000 U,36～38 h經(jīng)陰道B超引導下取卵。

1.2.3精液采集按照《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)規(guī)定，標本采集時間應(yīng)為禁欲至少2 d，最長不超過7 d，在靠近實驗室取精室取精，采用手淫法，將射出的全部精液采集在一個潔凈的塑料容器內(nèi)，待液化后處理。

1.2.4精液分析嚴格按照《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)規(guī)定進行精液常規(guī)分析及精子形態(tài)學分析。精子形態(tài)學分析采用精子形態(tài)染色檢測試劑盒(Diff-Quik法)染色，100倍油鏡下計數(shù)不少于200個精子，計算正常形態(tài)精子百分率。

1.2.5精液處理所有精液均采用密度梯度離心法+上游法處理，處理后置于培養(yǎng)箱中待用。

1.2.6IVF-胚胎移植取卵后4～6 h在含有卵子的培養(yǎng)皿3037中加入精子，使精子最終濃度為1萬條a+b級精子/卵子，置37 ℃、6%CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。授精4～6 h后剝除顆粒細胞并觀察卵子受精情況(觀察第2極體)，若出現(xiàn)完全受精失敗(受精率為0)或受精低下(受精率小于30%)，則告知患者，簽署卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù)(ICSI)知情同意書，行完全或部分補救。受精16～18 h觀察原核。取卵后分別于48、72 h觀察胚胎發(fā)育情況，并對第3天胚胎進行評級，選擇優(yōu)質(zhì)胚胎(Ⅰ級或Ⅱ級胚胎)在B超引導下進行胚胎移植，移植后常規(guī)黃體支持。移植14 d血和尿HCG為陽性，則為生化妊娠；4周后B超可見妊娠囊則為臨床妊娠。

2結(jié)果

2.1臨床妊娠組和未妊娠組臨床基本資料比較見表1。臨床妊娠組和未妊娠組女方年齡、男方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、不孕年限、女方基礎(chǔ)促卵泡刺激素(FSH)值、促卵泡生成素(Gn)天數(shù)、Gn總量、HCG日雌二醇(E2)值、HCG日促黃體生成素(LH)值、HCG日孕酮(P)值、內(nèi)膜厚度、獲卵總數(shù)、第2次減數(shù)分裂中期(MⅡ)卵數(shù)等臨床基本資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1　　臨床妊娠組和未妊娠組基本資料比較±s)

續(xù)表1　　臨床妊娠組和未妊娠組基本資料比較±s)

2.2臨床妊娠組和未妊娠組實驗室數(shù)據(jù)比較見表2。受精率、卵裂率、可利用胚胎率及優(yōu)質(zhì)胚胎率兩組差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3臨床妊娠組和未妊娠組處理前精液參數(shù)比較見表3。 臨床妊娠組和未妊娠組處理前精子密度、精子活率、精子活力和精子正常形態(tài)百分比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2　　臨床妊娠組和未妊娠組實驗室數(shù)據(jù)比較(%)

表3　　臨床妊娠組和未妊娠組處理前精液參數(shù)比較±s)

3討論

目前精液參數(shù)是臨床上最常用的評價男性生育功能的主要指標，為輔助生殖技術(shù)助孕方案的選擇提供重要依據(jù)。依據(jù)WHO第5版《人類精液檢查與處理實驗室手冊》，其中精子密度、精子形態(tài)、精子活力和精子活率是判斷精液質(zhì)量的主要參考指標。本研究主要探討精液參數(shù)與ART結(jié)局的相關(guān)性，為了排除女方因素的干擾，故本研究選擇不育原因單純?yōu)榕捷斅压芤蛩鼗蚰蟹饺?、畸精子癥的患者作為研究對象。本研究371個新鮮移植周期，臨床妊娠組和未妊娠組女方年齡、男方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、不孕年限、女方基礎(chǔ)FSH值、Gn天數(shù)、Gn總量、HCG日E2值、HCG日LH值、HCG日P值、內(nèi)膜厚度、獲卵總數(shù)、MⅡ卵數(shù)等臨床基本資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，由此表明兩組數(shù)據(jù)具有可比性。

精子質(zhì)量是IVF治療成功的關(guān)鍵因素之一，在IVF治療過程中發(fā)現(xiàn)，受精率低下(受精率低于30%)和受精失敗的患者占20%～30%。盡管目前尚不完全清楚受精失敗的原因，但是相當部分與精液質(zhì)量差有關(guān)，常有少精子癥、弱精子癥、畸精子癥，以及與卵子結(jié)合能力低下等[3]。對于精液參數(shù)對胚胎質(zhì)量的影響，不同研究結(jié)果存在一定的爭議。有研究認為，精液參數(shù)可在胚胎發(fā)育的早期影響胚胎質(zhì)量，甚至影響移植胚胎的質(zhì)量，并可能影響IVF臨床結(jié)局[4]。也有研究認為，精子參數(shù)和胚胎質(zhì)量無相關(guān)性，對IVF臨床結(jié)局的預測價值有限[5-6]。本研究實驗室數(shù)據(jù)顯示，臨床妊娠組和未妊娠組的受精率、卵裂率、可利用胚胎率及優(yōu)質(zhì)胚胎率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，由此提示不同妊娠結(jié)局胚胎質(zhì)量無顯著差異。有研究報道，處理后精子密度過低(≤2×106/mL)有可能會降低宮腔內(nèi)人工授精的成功率[7]。IVF精液處理均使用雙層密度梯度離心法加上游法進行處理，加精濃度均控制在a+b級1×104/卵，控制了IVF處理前精子密度對受精率的影響，對于處理后精液達不到a+b級1×104/卵，那么助孕方式也改為ICSI，處理前精液密度對IVF的影響是有限的。本研究中雖然臨床妊娠組處理前精子密度高于未妊娠組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，由此提示處理前精子濃度對IVF結(jié)局的預測價值是有限的。

自然狀態(tài)下精子活力對妊娠影響十分重要，活力不足導致運動速度減慢，不能及時到達輸卵管，無法與卵子正常結(jié)合[8]。由精子活力不足導致的弱精癥成為不孕癥最顯著的影響因素[9]。有研究認為，IVF活力差的胚胎碎片較多，并且胚胎的卵裂率和優(yōu)胚率顯著降低，但受精率、妊娠率、著床率、早期流產(chǎn)率等與活力正常組無顯著差異[6]。還有研究表明，周期前精子活力(a%+b%)對不同IVF結(jié)局的差異無統(tǒng)計學意義[10]。本研究臨床妊娠組和未妊娠組處理前精子活力差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，和上述研究相符。但有研究表明，處理后前向運動精子總數(shù)小于1.0×106是影響受精率的高危因素[11]。IVF精子優(yōu)化的過程可以去除死精子、活動力差的精子、凝集精子及紅、白細胞，還可去除可能存在的炎性細胞和抗精子抗體等雜質(zhì)及對受精有害的成分，降低精液黏稠度，優(yōu)選出活力好、形態(tài)正常的精子。此外在培養(yǎng)液的孵育過程中能夠促進精子獲能，引起精子各項參數(shù)指標恢復，從而提高受精能力。優(yōu)化后的精子活率對預測IVF受精率的價值更大，而優(yōu)化前精子活力對于妊娠結(jié)局的預測是有限的[12]。

精子正常形態(tài)與其功能密切相關(guān)是反映精子質(zhì)量的重要參數(shù)之一。精子形態(tài)在IVF中對胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局的預測價值目前尚存在爭議。正常形態(tài)精子率、頭部畸形精子率、中段畸形精子率及尾部畸形精子率與胚胎質(zhì)量間均無顯著相關(guān)性差異，精子形態(tài)與胚胎質(zhì)量無相關(guān)性[5]。回顧性分析提示，正常精子形態(tài)率與常規(guī)IVF的受精率有關(guān)，與卵裂率、臨床妊娠率、種植率、流產(chǎn)率等無相關(guān)性[6]。也有相似研究發(fā)現(xiàn)，精子形態(tài)主要影響IVF的受精率，而對妊娠率和流產(chǎn)率均無顯著性影響，對IVF妊娠結(jié)局無預測作用[13]。本研究中臨床妊娠組和未妊娠組處理前精子正常形態(tài)百分比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，也提示了精子形態(tài)可能對IVF妊娠結(jié)局的預測價值不大。有研究按照WHO《人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》正常精子形態(tài)百分比按小于15%和大于或等于15%進行分組，精子形態(tài)對IVF的受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和妊娠率差異均有統(tǒng)計學意義[14]。胚胎植入率和臨床妊娠率在上游后正常形態(tài)小于10%和大于或等于10%組相比差異有統(tǒng)計學意義[15]。IVF精子經(jīng)過上游處理后，可以優(yōu)選出活力好、形態(tài)正常的精子。同樣，優(yōu)化后的正常精子形態(tài)率對妊娠結(jié)局的預測價值更大，而優(yōu)化前正常精子形態(tài)率的預測價值是有限的。這些結(jié)論差異可能是由于研究對象的選取、形態(tài)評判標準及染色方法不同等原因造成的。因此，單純以精子形態(tài)對臨床結(jié)局的預測價值是有限的。

綜上所述，本研究從精液常規(guī)方面分析了精子質(zhì)量參數(shù)與IVF臨床結(jié)局的關(guān)系。不同妊娠結(jié)局處理前精液參數(shù)差異無統(tǒng)計學意義，胚胎質(zhì)量差異也無統(tǒng)計學意義?？赡艿脑蚴蔷簝?yōu)化后顯著改善了處理前精液質(zhì)量，同時對于優(yōu)化后精液達不到加精要求(a+b級1×104/卵)，那么助孕方式也改為ICSI。精液優(yōu)化及助孕方式的改變，限制了處理前精液參數(shù)對IVF的影響，因此僅憑精液參數(shù)對IVF的臨床妊娠結(jié)局的預測價值比較有限。此外，在精液常規(guī)完全正常的情況下，仍然有部分患者受精低下甚至完全不受精。受精失敗與卵母細胞質(zhì)量也緊密相關(guān)，僅憑精子參數(shù)還不能完全預測受精結(jié)局、胚胎質(zhì)量及臨床妊娠結(jié)局。因此，今后需要進一步研究針對精子功能檢測的方法，能夠提前預測可能出現(xiàn)的受精障礙，從而選擇更合適的助孕方法。

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The correlation between male semen factors and IVF-ET outcomes

XUYanxia

(ReproductiveCenter,KanghuaHospital,Dongguan,Guangdong523080,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the correlation between male semen parameters and in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET) outcomes.MethodsA total of 371 IVF-ET cycles with first cycle of long-time protocol were collected from Reproductive Center of Kanghua Hospital from January 2013 to December 2014.The semen parameters were analyzed in different pregnancy outcomes．ResultsThere was no significant differences in sperm density,survival rate,activity and percentage of normal sperm morphology between clinical pregnancy group and non-pregnancy group (P>0.05)．ConclusionMale semen parameters are limited in predicting the outcome of IVF-ET.

Key words:spermatozoa;IVF-ET;pregnancy outcome

作者簡介：徐艷霞，女，主管檢驗技師，主要從事臨床免疫及生殖醫(yī)學實驗研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.022

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)11-1505-03

(收稿日期：2016-01-28修回日期：2016-03-23)