時(shí)間分辨熒光免疫分析法與ELISA檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的比較

王江南，劉　偉，張　起

(1.宜春職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，江西宜春 336000；2.江西省宜春市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　336000)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

時(shí)間分辨熒光免疫分析法與ELISA檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的比較

王江南1，劉偉2，張起2

(1.宜春職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，江西宜春 336000；2.江西省宜春市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科336000)

摘要:目的探討時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)189例HCV疑似感染者血清標(biāo)本，同時(shí)采用TRFIA和ELISA進(jìn)行抗-HCV檢測(cè)。結(jié)果在189例標(biāo)本中，TRFIA檢測(cè)抗-HCV陽性53例，ELISA陽性45例，兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，符合率為95.77%。當(dāng)標(biāo)本中抗-HCV的S/CO≥2時(shí)，兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但當(dāng)1≤ S/CO<2時(shí)，兩種方法陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論TRFIA檢測(cè)抗-HCV與ELISA相比，特異性好、靈敏度高，提高了臨床檢測(cè)水平，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞:丙型肝炎；時(shí)間分辨熒光免疫分析法；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；丙型肝炎病毒抗體

丙型肝炎病毒(HCV)是丙型病毒性肝炎的病原體，常引起肝炎慢性化。據(jù)WHO報(bào)道：全球有1.3～1.7億慢性HCV感染者，每年新發(fā)感染者達(dá)300～400萬，有超過35萬人死于HCV相關(guān)肝臟疾病[1]。HCV感染呈世界性分布，我國(guó)屬丙型肝炎高發(fā)區(qū)，平均感染率約為3.2%[2-3]。目前，臨床上常以HCV抗體(抗-HCV)檢測(cè)作為判斷患者是否為HCV感染的重要依據(jù)。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)展特異性好、靈敏度高的檢測(cè)抗-HCV方法，對(duì)于控制HCV感染具有重要意義。本研究比較時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)抗-HCV在HCV感染中的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取宜春市第二人民醫(yī)院2014年4月至2015年10月收治的189例HCV疑似感染者血清作為研究標(biāo)本，年齡24～75歲，其中男110例，女79例。

1.2儀器與試劑TRFIA所使用的試劑盒和時(shí)間分辨熒光分析儀(Anytest2000)均為蘇州新波生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，該試驗(yàn)所需的純凈水由杭州天創(chuàng)檢驗(yàn)分析用純水設(shè)備(TCHS-05RO/40F)提供；ELISA使用的試劑盒為北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，酶標(biāo)分析儀(DNM-9602G)為北京普朗新技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.3方法對(duì)待測(cè)的血清標(biāo)本分別采用TRFIA和ELISA進(jìn)行抗-HCV檢測(cè)，全部檢測(cè)均嚴(yán)格參照試劑盒說明書進(jìn)行操作。當(dāng)TRFIA測(cè)得標(biāo)本中抗-HCV熒光計(jì)數(shù)值(S)/cut off(S/CO)≥1，ELISA測(cè)得標(biāo)本中抗-HCVOD值/cut off≥1時(shí)，抗-HCV結(jié)果判定為陽性；反之，結(jié)果判定為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩種方法檢測(cè)抗-HCV結(jié)果比較見表1。在189例待測(cè)血清標(biāo)本中，TRFIA檢測(cè)結(jié)果為陽性53例，ELISA檢測(cè)結(jié)果為陽性45例，兩種方法檢測(cè)結(jié)果同時(shí)為陽性45例，TRFIA為陽性而ELISA為陰性有8例。經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，兩種檢測(cè)方法陽性結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，檢測(cè)結(jié)果符合率為95.77%。

2.2兩種方法不同S/CO值檢測(cè)抗-HCV陽性結(jié)果比較見表2。將TRFIA測(cè)得標(biāo)本中抗-HCV的S/CO劃分為3個(gè)區(qū)間。當(dāng)標(biāo)本中抗-HCV的S/CO≥2時(shí)，兩種檢測(cè)方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；當(dāng)1≤ S/CO<2時(shí)，由于標(biāo)本中抗-HCV水平接近ELISA的最低檢出限，ELISA陽性檢出率下降至50%，兩種檢測(cè)方法陽性檢出結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由表2可以看出，ELISA陽性檢出結(jié)果隨標(biāo)本中抗-HCV的S/CO值增高而升高。

表1　　兩種方法檢測(cè)抗-HCV抗體檢測(cè)結(jié)果的比較

表2　　不同區(qū)間兩種方法檢測(cè)抗-HCV結(jié)果比較

3討論

抗-HCV是機(jī)體感染HCV后出現(xiàn)的非中和性特異抗體,抗-HCV呈陽性是HCV感染的重要輔助診斷指標(biāo)，但抗-HCV呈陰性者也并不能完全排除HCV感染，可能是由于患者免疫功能低下或是機(jī)體內(nèi)HCV復(fù)制不活躍，未能產(chǎn)生足夠檢出量的抗體[4]。因此，發(fā)展一種在低水平就能檢測(cè)出抗-HCV的方法，對(duì)臨床上丙型肝炎的早期診斷、早期治療尤為重要。

ELISA作為傳統(tǒng)的抗-HCV檢測(cè)技術(shù)，因其具有簡(jiǎn)單、快速、方便、成本低、易于大批量檢測(cè)等特點(diǎn)，己被廣泛使用。但由于ELISA對(duì)“灰區(qū)”結(jié)果判讀的可靠性通常較差，當(dāng)機(jī)體內(nèi)抗-HCV水平較低時(shí)，容易發(fā)生漏檢[5]。本研究結(jié)果顯示，采用TRFIA和ELISA檢測(cè)抗-HCV的結(jié)果符合率為95.77%，由此說明這兩種檢測(cè)方法檢測(cè)抗-HCV具有較高的一致性，但當(dāng)血清中抗-HCV水平較低(1≤S/CO<2)時(shí)，ELISA的陽性檢出率僅為50%，說明在此條件下，ELISA的靈敏度明顯不如TRFIA，這可能是因?yàn)镋LISA在操作中的影響因素較多，如抗體的包被質(zhì)量、試劑失效、反應(yīng)溫度、時(shí)間及鉤狀效應(yīng)等，造成了檢測(cè)結(jié)果的假陰性。

本文采用TRFIA是基于雙抗原夾心的非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析，檢測(cè)的是血清中的抗-HCV(包括IgG類和IgM類)，不受不同患者對(duì)HCV反應(yīng)時(shí)所產(chǎn)生不同IgG亞型的限制[6]?？?HCV-IgG陽性是HCV感染的重要指標(biāo)，但其出現(xiàn)較晚?？?HCV-IgM出現(xiàn)較早，但主要作為丙型肝炎急性感染的輔助診斷，故同時(shí)檢測(cè)IgG類和IgM類抗體有利于提高檢出率，縮短HCV感染檢出的“窗口期”[7]。

TRFIA使用鑭系稀土元素Eu作為示蹤物，其熒光壽命長(zhǎng)(10～1 000 μs)且熒光強(qiáng)度高，而血清中的蛋白質(zhì)、膽紅素等發(fā)射出的非特異性熒光壽命短(一般在1～10 ns，最長(zhǎng)不超過20 ns)，利用這一時(shí)間差的特性，待短壽命背景熒光完全衰變后再測(cè)定鑭系稀土元素螯合物的特異性熒光信號(hào)，可有效降低本底熒光的干擾；同時(shí)由于鑭系稀土元素發(fā)光穩(wěn)定，熒光光譜Stokes位移較大，很容易利用簡(jiǎn)單的濾光片把激發(fā)光和發(fā)射光分開，消除激發(fā)光的散射(由樣品池、溶劑分子等引起)引起的干擾，顯著提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性[8]。另外，TRFIA引入了生物素-親和素信號(hào)放大系統(tǒng)(試劑中包含了Eu標(biāo)記的鏈親和素、生物素標(biāo)記的HCV抗原)，一個(gè)完整的鏈親和素上有4個(gè)亞基，均能結(jié)合1個(gè)生物素分子，明顯提高了檢測(cè)的靈敏度。同時(shí)TRFIA分析技術(shù)屬全自動(dòng)檢測(cè)，能夠提供穩(wěn)定、均一、可靠的試驗(yàn)條件，有效避免了由于人為因素所引起的操作誤差[9]。

綜上所述，與ELISA相比，TRFIA有靈敏度高，特異性強(qiáng)，易于自動(dòng)化分析等優(yōu)點(diǎn)，能為臨床提供更準(zhǔn)確的結(jié)果，有利于HCV感染的早期診斷和早期治療，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。TRFIA作為近年來發(fā)展起來的一種新的免疫檢測(cè)技術(shù)，已被認(rèn)為是最有發(fā)展前途的新的超微量分析技術(shù)[10]。

參考文獻(xiàn)

[1]倪語星,尚紅.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012：362-364.

[2]王燕,尹秋霞,竇恒利.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法作為篩選試驗(yàn)測(cè)定丙肝抗體的評(píng)價(jià)[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2013,20(4):246-250.

[3]黃秀瓊,吳英.110例丙肝患者 HCV-RNA載量及抗-HCV 與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,33(15):1809-1810.

[4]丁華,何維娜,陳望,等.3種檢測(cè)方法在丙型肝炎診斷中的臨床評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(24):3387.

[5]尹秀華.丙型肝炎檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐,2013,26(2):171-173.

[6]李保昌,孫萍,楊淑華,等.生物素化HCV多抗原表位融合基因的克隆及可溶性表達(dá)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2004,12(3):359-362.

[7]譚玉華,孫勇,吳道貧,等.丙型肝炎病毒抗體橋式雙抗原夾心時(shí)間分辨熒光免疫分析法的建立[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013,7(9):3814-3819.

[8]王蘭蘭,許化溪.臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)[M].5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012：68-69.

[9]王雄.時(shí)間分辨熒光免疫分析法在乙型肝炎病毒表面抗原檢測(cè)中的應(yīng)用[J].海南醫(yī)學(xué),2013,24(18):2693-2695.

[10]吳健民.臨床化學(xué)自動(dòng)化免疫分析[M].武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社,2000：92.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.060

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4130(2016)11-1579-02

(收稿日期：2016-01-23修回日期：2016-03-26)