HPLC法測(cè)定慈航顆粒中鹽酸水蘇堿的含量

唐新 鐘彩娜

（廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 南寧 530003）

【摘 要】目的：建立高效液相色譜法測(cè)定慈航顆粒中鹽酸水蘇堿的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（5μm，4.6 mm×250 mm），乙腈-水（70∶30）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm。結(jié)果：鹽酸水蘇堿在50.24～502.40μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，r=0.999 2，平均回收率為98.37%，RSD=0.52%。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便、快速、專(zhuān)屬性好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

【關(guān)鍵詞】慈航片；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R286 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-0688（2016）04-0079-03

慈航顆粒為部頒中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品種“慈航片”的升級(jí)換代品種，由益母草、當(dāng)歸、川芎組成，具有逐瘀生新的功效。臨床上用于婦女經(jīng)血不調(diào)，瘤瘕痞塊，產(chǎn)后血暈，惡露不盡。方中君藥為益母草，性味辛苦涼，入心、肝、膀胱經(jīng)。具有活血、祛瘀、調(diào)經(jīng)、消水的功效。治月經(jīng)不調(diào)，胎漏難產(chǎn)，胞衣不下，產(chǎn)后血暈，淤血腹痛，崩中漏下，尿血，瀉血，癰腫瘡瘍。它具有促進(jìn)子宮興奮和抗血小板聚集、改善冠脈循環(huán)、保護(hù)心臟、增強(qiáng)心血管的收縮、讓呼吸中樞興奮的藥理作用。它的主要有效成分為鹽酸水蘇堿[1]。臣藥當(dāng)歸，性溫，味甘辛。歸心、肝、脾經(jīng)。補(bǔ)血和血，調(diào)經(jīng)止痛，潤(rùn)燥滑腸。治月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉腹痛，癥瘕結(jié)聚，崩漏；血虛頭痛，眩暈，痿痹；腸燥便難，赤痢后重；癰疽瘡竊，跌撲損傷。臣藥川芎，辛，溫。歸肝、膽、心包經(jīng)?；钛袣猓铒L(fēng)止痛。用于胸痹心痛，胸脅刺痛，跌撲腫痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，頭痛，風(fēng)濕痹痛。目前，慈航片的含量測(cè)定方法是檢測(cè)阿魏酸的含量，因當(dāng)歸和川芎均含有阿魏酸[2-3]，專(zhuān)屬性差，所以不能有效地排除相互干擾。本文改用高效液相色譜法測(cè)定君藥益母草中鹽酸水蘇堿的含量，可提高專(zhuān)屬性和結(jié)果的準(zhǔn)確性，能夠有效地控制成品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫科技公司；Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，5μm，4.6 mm×250 mm。

鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110712-200508），乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷化鍵和硅膠為填料；以乙腈-水（70∶30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為200 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為室溫。

2.2 測(cè)定方法

精密稱(chēng)取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成約含鹽酸水蘇堿0.2 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液；另取慈航顆粒，捻碎混勻，精密稱(chēng)取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液；另取慈航空白樣品顆粒（缺益母草），捻碎混勻，精密稱(chēng)取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為空白溶液。取3種溶液各10μL，用外標(biāo)法以主峰面積定量。

2.2.1 提取方法的選擇

考察超聲處理和過(guò)氧化鋁-活性炭洗脫兩種提取方法，具體如下。

（1）超聲處理：取本品，捻碎混勻，精密稱(chēng)取約10 g，置50 mL容量瓶中，加入適量甲醇搖勻，超聲處理30 min，取出，定容，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。

（2）過(guò)氧化鋁-活性炭洗脫：取本品，捻碎混勻，精密稱(chēng)取約10 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，過(guò)氧化鋁-活性炭柱（堿性氧化鋁5 g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2 g，甲醇預(yù)洗），收集甲醇洗脫液100 mL，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相定容于10 mL量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

結(jié)果：采用超聲處理方式得到供試品含量為1.05 mg/g，采用過(guò)氧化鋁-活性炭洗脫提取方式得到供試品含量為1.03 mg/g，相差0.02 mg，差別很小，考慮到超聲處理方法相對(duì)簡(jiǎn)便，故本法采用超聲提取方法。

2.2.2 提?。ǔ暎r(shí)間的選擇

本試驗(yàn)分別對(duì)提取時(shí)間15 min、30 min、45 min進(jìn)行考察，結(jié)果提取時(shí)間分別為15 min、30 min、45 min時(shí)，樣品含量分別為0.92 mg/mL、1.03 mg/mL、1.04 mg/mL，提取時(shí)間為15 min時(shí)，鹽酸水蘇堿的含量最小，而提取時(shí)間為30 min和45 min時(shí)，其鹽酸水蘇堿含量相差不大，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.68%。為縮短檢驗(yàn)時(shí)間、提高勞動(dòng)效率考慮，最終確定提取時(shí)間為30 min。

2.3 色譜效果

在上述色譜條件下，各取以上3種溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖如圖1所示。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系

精密稱(chēng)取鹽酸水蘇堿對(duì)照品25.12 mg，放置于50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對(duì)照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分別放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品含量為縱坐標(biāo)，峰面積積分值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，則回歸方程為Y=8.1958X+29.356，r=0.999 2，表明鹽酸水蘇堿在50.24～502.40μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)得鹽酸水蘇堿的峰面積的RSD為0.46%。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

對(duì)同一批慈航顆粒（批號(hào)131003），按正文擬訂的方法平行測(cè)定6份，結(jié)果鹽酸水蘇堿含量的平均值為1.05 mg/g（RSD=0.42%，n=6），結(jié)果表明，本法的重復(fù)性較好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)131003）在室溫下立即測(cè)定，放置4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h重新測(cè)定，結(jié)果峰面積測(cè)得值分別為1 567 089、1 598 012、

1 570 234、1 589 012、1 560 132、1 584 121、

1 562 131，平均值為1 575 189，RSD為0.86%，峰面積基本一致，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取已知含量的慈航顆粒約10 g，共9份，精密稱(chēng)定，放置于50 mL量瓶中，加甲醇適量，另分別精密量取鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液（含量為0.202 mg/mL）10 mL、10 mL、10 mL、15 mL、15 mL、15 mL、20 mL、20 mL、20 mL，分別加入以上量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，制成3個(gè)不同濃度的供試品溶液各3份；分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。按外標(biāo)法計(jì)算回收率分別為98.36%、99.03%、98.99%、98.87%、98.84%、97.53%、98.35%、97.55%、98.21%，平均回收率為98.37%，RSD為0.52%。

2.9 樣品測(cè)定

精密稱(chēng)取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成約含鹽酸水蘇堿0.202 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液；另取慈航顆粒適量，捻碎混勻，精密稱(chēng)取10 g，放置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇，搖勻，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。取2種溶液各10μL，用外標(biāo)法以主峰面積定量（見(jiàn)表1）。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

鹽酸水蘇堿易溶于水和醇，因此采用甲醇溶解。

3.2 波長(zhǎng)的選擇

在500～190 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示，鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液在200 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故本法選200 nm為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 結(jié)論

本文建立的高效液相色譜法測(cè)定慈航顆粒中鹽酸水蘇堿的含量，結(jié)果較為準(zhǔn)確，且簡(jiǎn)便、快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)、可靠。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]萬(wàn)斯斯，黃琳瑯.益母草及其成方制劑中鹽酸水蘇堿含量測(cè)定方法[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010（19）：107-108.

[2]康軍.當(dāng)歸化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)中藥，2005（23）：120.

[3]周江.川芎有效成分及其藥理作用研究概況[J].浙江中醫(yī)雜志，2007（10）：615-616.

[責(zé)任編輯：陳澤琦]

【作者簡(jiǎn)介】唐新，男，廣西南寧人，廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司執(zhí)業(yè)藥師，研究方向：新藥的研究及推廣；鐘彩娜，女，廣西南寧人，廣西康華藥業(yè)有限責(zé)任公司執(zhí)業(yè)藥師，研究方向：新藥的研究及推廣。