正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方威茯方提取工藝及其顆粒劑制備工藝研究

黃麗貞　鄧家剛　謝　滟　黃慧學(xué)　廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001　南寧市明秀東路179號(hào)楊玲玲　廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院仁愛(ài)分院　530001

?

正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方威茯方提取工藝及其顆粒劑制備工藝研究

黃麗貞鄧家剛謝滟*黃慧學(xué)廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號(hào)
楊玲玲廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院仁愛(ài)分院530001

摘要目的：優(yōu)選復(fù)方威茯顆粒的最佳制備工藝，為該復(fù)方的開(kāi)發(fā)利用提供試驗(yàn)依據(jù)。方法：采用分光光度法測(cè)定總黃酮含量，以總黃酮和干膏率為綜合考核指標(biāo)，通過(guò)L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)水的用量、提取的時(shí)間和提取的次數(shù)進(jìn)行考察，優(yōu)選復(fù)方威茯方水提工藝，再以浸膏為原料，單因素考察稀釋劑（可溶性淀粉與糊精）的比例及粘合劑（乙醇）的用量，制備復(fù)方威茯顆粒。結(jié)果：最佳水提工藝為A1B2C2，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次；將提取液濃縮至相對(duì)密度為1 g/ml，以50%乙醇醇沉，靜置12 h后濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入可溶性淀粉與糊精（4∶3），混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過(guò)16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即制得復(fù)方威茯顆粒。結(jié)論：該制備工藝合理、可行，為該復(fù)方的開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞復(fù)方威茯方；正交設(shè)計(jì)；提取工藝；制備工藝

Study on Extraction Procedure with Orthogonal Test for Optimization of Compound Wei Fu and Granule Preparation Process

Huang Lizhen,Deng Jiagang,Xie Yan*,Huang Huixue Guangxi University of Chinese Medicine,NO.179,Mingxiu Dong Rd,Nanning,530001
Yang Lingling Charity Branch of the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,530001

Abstract Objective:To optimize the best preparation process for compound Wei Fu granule so as to provide experimental basis for the development and utilization of the compound.Methods:The content of total flavonoids was determined by spectrophotometry.With the content of total flavonoids and yield of soft extract as comprehensive indexes，L9（34）orthogonal test was used to investigate the amount of water，extraction time，and extraction frequency for optimizing the water extracting technology of the compound Wei Fu granule.Then the extract was used as raw materials with single factors investigation for the ratio of diluter（soluble starch and dextrin）and the amount of binder（ethanol）to make the compound Wei Fu granule.Results:The optimum water extraction process was A1B2C2，which meant that the prescribed medicinal materials with 9 times water were extracted 1.5 h for 3 times.The extracted liquid was concentrated to the relative density of 1 g/ml with 50%ethanol alcohol precipitation，standing for 12 hours，filtered，and the filtrate was concentrated to condensed paste with relative density of 1.30～1.35（60℃），adding soluble starch and dextrin（4∶3），mixing，drying，powdering，then adding an appropriate amount of 85% ethanol made soft material，over 16 mesh sieve granulation，drying at 60℃for granulation，so as to make compound Wei Fu granule.Conclusion:The preparation procedure is reasonable and feasible，which provides experimental basis for development and utilization of the compound Wei Fu granules.

Keywords Compound Wei Fu granules;orthogonal test;extraction process;preparation process

復(fù)方威茯方是廣西中醫(yī)藥大學(xué)鄧家剛教授根據(jù)痛風(fēng)的病因病機(jī)，以土茯苓、腫節(jié)風(fēng)等十多味中藥組成的經(jīng)驗(yàn)方，在臨床上應(yīng)用近8年，治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎效果良好。長(zhǎng)期以來(lái)臨床以湯劑給藥，但由于湯劑攜帶、服用不方便，久置易霉敗變質(zhì)，故本課題組擬將其研制成顆粒劑，這樣既可保持湯劑的綜合療效，又可克服湯劑的缺點(diǎn)［1-2］。黃酮類化合物是植物長(zhǎng)期自然生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的一些次級(jí)代謝產(chǎn)物，目前發(fā)現(xiàn)的黃酮種類近萬(wàn)種［3-4］。藥理研究表明，黃酮類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化等多種活性，是多種中藥的主要活性成分［5-6］。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)處方藥材中含有大量的黃酮類化合物，以總黃酮含量和干膏率為綜合考核指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方威茯方的提取工藝，并以得到的干膏為原料進(jìn)行顆粒劑制備工藝研究，為其開(kāi)發(fā)利用提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1材料土茯苓、威靈仙等飲片均購(gòu)自南寧市生源中藥飲片有限責(zé)任公司，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授鑒定為正品；蘆丁對(duì)照品（批號(hào)為130507，供含量測(cè)定用，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司）；尿酸（Kayon Consulting Canada，批號(hào)：Q1736）；秋水仙堿（西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：130123）。

1.2儀器B3200S-T超聲機(jī)（必能信超聲有限公司）；L-204電子天平（梅特勒-托利多中國(guó)分公司）；UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1總黃酮的含量測(cè)定

2.1.1提取方法按處方比例稱取1/4處方量的各藥材，浸泡30 min，加水提取，過(guò)濾，合并濾液，濃縮并定容至100 ml，備用。

2.1.2干膏率測(cè)定精密量取“2.1.1”制得的濃縮液5 ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，于105℃烘箱干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定重量，按公式計(jì)算干膏率。

2.1.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容于25 ml棕色容量瓶中，搖勻，即配成含0.3280 mg/ml蘆丁的對(duì)照品貯備溶液。

2.1.4供試品溶液的制備精密量取按“2.1.1”項(xiàng)下方法所提取的溶液10 ml，移至蒸發(fā)皿中水浴揮干，加甲醇超聲溶解，濾過(guò)，轉(zhuǎn)至10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，備用。

2.1.5檢測(cè)波長(zhǎng)的確定精密量取上述蘆丁對(duì)照品溶液3.5 ml與供試品溶液0.5 ml，分別置25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色［7-8］，以相應(yīng)試劑做空白，于300～700 nm掃描，根據(jù)結(jié)果選取兩者均有最大吸收的波長(zhǎng)500 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.6線性關(guān)系的考察精密吸取已配置的蘆丁對(duì)照品溶液1.5 ml，2.0 ml，2.5 ml，3.0 ml，3.5 ml，4.0 ml，4.5 ml，用甲醇定容于25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，以蘆丁對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸收峰為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y= 11.726X-0.0088，r=0.9983（n=7），結(jié)果表明蘆丁在0.0197～0.0590 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.7精密度試驗(yàn)取蘆丁對(duì)照品溶液3.0 ml，用甲醇定容于25 ml棕色容量瓶中，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果蘆丁吸光度RSD值為0.07%（n=6）。

2.1.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取供試品溶液0.5 ml，置25 ml棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，每隔5 min測(cè)定1次，供試品溶液顯色后在30 min內(nèi)測(cè)定，結(jié)果RSD值為3.03%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液30 min內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.1.9重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批樣品6份，照“2.1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，結(jié)果RSD值為1.27%（n=6），說(shuō)明試驗(yàn)方法重復(fù)性較好。

2.1.10加樣回收試驗(yàn)精密量取9份供試品溶液，每份0.25 ml（濃度為1.6533 mg/ml），置25 ml棕色容量瓶中，分別加入蘆丁對(duì)照品溶液適量（加入量為供試品溶液中蘆丁含量的80%、100%和120%），各3份，用甲醇定容至刻度。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法顯色，以相應(yīng)試劑做空白，在500 nm處測(cè)定吸光度，測(cè)定含量，計(jì)算各自回收率，結(jié)果低、中、高濃度平均回收率分別為102.07%、101.68%、102.80%，RSD值分別為2.93%（n= 3）、2.78%（n=3）、3.01%（n=3），表明測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠。

2.2正交試驗(yàn)優(yōu)化復(fù)方威茯方提取工藝根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果，按處方比例稱取1/4處方量的各藥材，選擇對(duì)提取工藝影響較大的加水量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）作為考察因素，以總黃酮含量和干膏率為考察指標(biāo)，并以干膏率為0.7、總黃酮含量為0.3的權(quán)重系數(shù)對(duì)這兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合加權(quán)評(píng)分［9-10］（最大總黃酮含量與最大干膏率均為100分），通過(guò)L9（34）表正交試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析表3。

直觀分析和方差分析結(jié)果表明：以綜合指標(biāo)考慮，各因素對(duì)水提取工藝的影響程度依次為C>B>A，即煎煮次數(shù)>煎煮時(shí)間>加水量，其中因素C對(duì)提取工藝有顯著性影響，因素A、B沒(méi)有顯著性影響，確定各因素的最佳水平為A1B2C3，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，共提取4次。但從表2結(jié)果來(lái)看，提取3次或4次對(duì)干膏率及總黃酮含量影響不大，從節(jié)約實(shí)際生產(chǎn)成本的角度考慮，可適當(dāng)減少提取次數(shù)，因此確定提取條件為A1B2C2，即處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證所篩選出的提取工藝條件，稱取復(fù)方威茯方處方量藥物3份，分別按2.1.1項(xiàng)下方法制備，稱定干膏率并測(cè)定總黃酮的含量。結(jié)果顯示，干膏率為28.87%，RSD=1.47%（n=3）；總黃酮含量為5.9139 mg/g，RSD=1.95%（n=3）；均高于表2中的平均值（28.27%和5.0643 mg/g）。表明工藝可行。

表1　試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

表2　正交試驗(yàn)方案與結(jié)果

表3　方差分析結(jié)果

2.3復(fù)方威茯顆粒劑制備工藝研究

2.3.1浸膏提取稱取臨床處方湯劑一次服用生藥量172 g，按優(yōu)選工藝條件進(jìn)行提取，可提取出約50 g干浸膏，其提取率約為28.87%。由于得膏率較大，為了使顆粒既易于制粒又盡量減少服用量，考慮用50%醇沉以降低雜質(zhì)含量，故選用水提醇沉工藝，并進(jìn)行水提醇沉的干膏率測(cè)定。按上述最佳提取工藝進(jìn)行操作，將提取液濃縮至相對(duì)密度為1 g/ml，再以50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過(guò)，濃縮并定容至100 ml，精密量取5 ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，于105℃烘箱干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，計(jì)算干膏率。結(jié)果干膏率分別為17.91%、17.49%、17.29%，平均干膏率為17.56%，RSD=1.80%（n=3）。

2.3.2輔料比例的選擇以上述水提醇沉得到的浸膏為原料進(jìn)行顆粒劑的制備。常用的稀釋劑有蔗糖、可溶性淀粉、糊精、乳糖，蔗糖有吸濕性，但糖尿病、肥胖癥、齲齒等患者不宜長(zhǎng)期服用；乳糖化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，與大多數(shù)的藥物不起作用，易溶于水，但價(jià)格昂貴，且糖尿病患者不宜長(zhǎng)期服用；糊精和可溶性淀粉溶解性良好，吸濕而不潮解，在空氣中很穩(wěn)定，且價(jià)格低［11-12］。為了確保該制劑不吸潮，使用范圍更大，因此本實(shí)驗(yàn)只考察可溶性淀粉和糊精，以制粒難易程度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)可溶性淀粉和糊精不同的比例（見(jiàn)表4）進(jìn)行考察，結(jié)果表明可溶性淀粉和糊精最佳比例為4∶3。

表4　輔料比例考察

2.3.3粘合劑的選擇以水為濕潤(rùn)劑時(shí)，制得的軟材黏性較大，難以通過(guò)篩網(wǎng)制粒，故改用不同比例的乙醇為濕潤(rùn)劑，以降低制粒的難度和顆粒的吸濕性［13］。以顆粒制粒難易和成型性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)乙醇不同濃度為粘合劑進(jìn)行考察（見(jiàn)表5），結(jié)果表明宜采用85%乙醇制粒。

表5　粘合劑的考察

2.3.4顆粒制備工藝加9倍量水浸泡30 min后煎煮3次，每次1.5 h，濾過(guò)，合并煎液并濃縮至相對(duì)密度為1 g/ml，50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入糊精與可溶性淀粉（4∶3）混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過(guò)16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即得。

3　討　論

復(fù)方威茯方是由多味中藥材組成的一個(gè)復(fù)方制劑，長(zhǎng)期以來(lái)臨床以湯劑給藥，為遵循中醫(yī)傳統(tǒng)用藥的習(xí)慣，又考慮到生產(chǎn)成本及安全問(wèn)題，故選用水作溶媒進(jìn)行提取，并采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化其提取工藝。由于中藥復(fù)方藥味較多，有效成分還不完全清晰，且各味藥中所含有效成分的理化性質(zhì)不同，單純采用一個(gè)指標(biāo)不易將各味藥的有效成分充分表達(dá)，故本文采用權(quán)重系數(shù)進(jìn)行綜合加權(quán)評(píng)分，以能更加有效地控制該藥質(zhì)量，篩選更加合理、可行的制備工藝。

復(fù)方威茯方具有清熱燥濕、活血化瘀、通絡(luò)止痛之功效，已經(jīng)在臨床上應(yīng)用近8年，治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎收到良好效果。為了方便患者服用，考慮在原湯劑的基礎(chǔ)上進(jìn)行二次開(kāi)發(fā)——將其制備為顆粒劑。由于本組方中未有不良?xì)馕兜闹兴幉?，故考慮在制粒過(guò)程中不添加任何矯味劑，且為滿足糖尿病等特殊患者的需求，擴(kuò)大使用范圍，將其劑型定為無(wú)蔗糖型顆粒劑。經(jīng)試驗(yàn)研究，復(fù)方威茯方最佳的水提工藝為：處方藥材加9倍量水，提取1.5 h，提取3次。提取液濃縮至相對(duì)密度為1 g/ml，以50%乙醇醇沉，靜置12 h，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35（60℃）的稠膏，加入可溶性淀粉與糊精（4∶3），混勻，烘干，打粉，加入適量85%乙醇制軟材，過(guò)16目篩制粒，于60℃烘干，整粒，即制得復(fù)方威茯顆粒。

參考文獻(xiàn)

［1］趙陸陸.淺談中藥湯劑煎煮與服用宜忌［J］.中醫(yī)中藥，2008，5（4）：354-355.

［2］閆麗霞.中藥制劑技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：111.

［3］劉炎.植物黃酮類化合物功能的研究進(jìn)展［J］.科技信息，2012（18）：131-132.

［4］于晶，郝再彬，蒼晶，等.黃酮類化合物的活性研究進(jìn)展［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（12）：125-130.

［5］馬銳，吳勝本.中藥黃酮類化合物藥理作用及作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥物警戒，2013，10（5）：286-290.

［6］代雄，顏杰寬，甘秀海.黃酮類化合物研究進(jìn)展［J］.貴州師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29（9）：38-42.

［7］蔣新龍.廣玉蘭葉、花總黃酮提取方法與含量比較［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（3）：648-650，664.

［8］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：989-990.

［9］柴敏波，賈春玉，甄玉敏.綜合評(píng)分法中的評(píng)分方法研究［J］.商場(chǎng)現(xiàn)代化，2009（17）：22-24.

［10］劉自遠(yuǎn)，劉成福.綜合評(píng)價(jià)中指標(biāo)權(quán)重系數(shù)確定方法探討［J］.中國(guó)衛(wèi)生質(zhì)量管理，2006，13（2）：44-46，48.

［11］張毓，鐘曉明.中藥顆粒劑成型工藝的研究進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（1）：27-28.

［12］馮麗莉，田民強(qiáng)，張東星，等.多指標(biāo)綜合優(yōu)化復(fù)方柴胡顆粒提取工藝及其顆粒劑制備研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，25（11）：2670-2672.

［13］把挹，徐玲玲，年華.中藥顆粒劑制粒技術(shù)綜述［J］.中國(guó)藥師，2010，13（5）：733-736.

（2016-01-04收稿/編輯陳明偉）

*通信作者，E-mail：1733013057@qq.com

基金項(xiàng)目：廣西科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目（編號(hào)：13-051-06）；廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（編號(hào)：13-051-06-K2）

中圖分類號(hào)：R283.6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1003-0719（2016）01-0076-04