• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    復方健腎片的水提工藝研究

    2016-11-30 07:31:13阿依古麗·穆太力普祖里皮亞·
    中國醫(yī)藥導報 2016年25期
    關(guān)鍵詞:正交設(shè)計提取工藝

    阿依古麗·穆太力普++++++祖里皮亞·塔來提++++++斯拉甫·艾白

    [摘要] 目的 通過高效液相色譜法和紫外分光光度法對毛蕊花糖苷和總多糖進行含量測定,優(yōu)化復方健腎片的水提工藝條件,為復方健腎片的進一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法 采用Waters C18 色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流動相:甲醇-0.1%甲酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:330 nm處測定毛蕊花糖苷含量和以苯酚-硫酸法,在490 nm波長處測定總多糖含量。 結(jié)果 毛蕊花糖苷和總多糖分別10.4~104 μg/mL(r=0.9993,n=6),20~100 μg/mL(r=0.9995)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。影響水提工藝各因素的作用主次為: A(提取次數(shù))>B(提取時間)>C(溶劑用量),最佳提取工藝條件是A3B1C1,即用10倍量水,提取3次,每次1.5 h。 結(jié)論 本研究的含量測定方法符合要求,通過正交試驗設(shè)計優(yōu)選得到的復方健腎片的水提工藝條件穩(wěn)定可行。

    [關(guān)鍵詞] 復方健腎片;毛蕊花糖苷;總多糖;正交設(shè)計;提取工藝

    [中圖分類號] R917 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2016)09(a)-0030-05

    [Abstract] Objective To optimize an HPLC and UV Spectrophotometry method for the determination of ascoside and total polysaccharides for water extraction method in Fufang Jianshen Tablets and lay a foundation for its further study. Methods Waters C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used with the mobile phase of methanol-0.1% formic acid (35∶65) at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 330 nm. The column temperature was maintained at 30℃. The extracting method of Fufang Jianshen Tablets was optimized by orthogonal design, taking the extraction rate of ascoside, total polysaccharides and extract yield as indexes. Results The results showed that the linear ranges of acteoside and total polysaccharides were in the range of 10.4-104 μg/mL (r=0.9993, n=6), 20-100 μg/mL (r=0.9995). The factors that influence water extraction: A(extraction times)>B (extraction time)> C (solvent consumption). The optimum extracting condition was A3B1C1: with the volume of 10 folds, extracting for 3 times, 1.5 hours one time. Conclusion The determination method of this study accords with the requirements, the optimum technology is stable and feasible for the extraction of Fufang Jianshen Tablets by orthogonal experiment.

    [Key words] Fufang Jianshen Tablets; Verbascoside; Total polysaccharides; Orthogonal design;Extraction process

    復方健腎片由肉蓯蓉、白術(shù)、生地黃、枸杞子、杜仲、紅參、鹿茸等藥物組成,具有健脾益氣、溫腎助陽、調(diào)和腸胃,主要用于疲乏無力、畏寒肢冷、腰痛腿酸、性欲減退等癥。復方健腎片為在自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院臨床使用20 余年的院內(nèi)制劑,現(xiàn)擬將其開發(fā)成新藥。本實驗在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以毛蕊花糖苷和總多糖含量及出膏率為評價指標,采用L9 (34)正交實驗設(shè)計對水提工藝進行優(yōu)化,為復方健腎片的進一步研究提供參考依據(jù)。

    1 一般材料

    Waters alliance e2695高效液相色譜儀(美國Waters公司);Waters 2489紫外檢測器,Empower 3數(shù)據(jù)采集系統(tǒng);UPT-1-5T超純水器(25 MΩ,四川優(yōu)普超純科技有限公司);SQP電子天平(1/10萬,德國Sartorius 公司)、超聲清洗器(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。GZX-9070MBE電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),DZT-6020型真空干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);手提式高速粉碎機(DFT-100);XMTD-4000電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司);DZTW電熱套(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。

    毛蕊花糖苷對照品 (批號111530-201411),D-無水葡萄糖對照品(批號110833-201205)均購自中國食品藥品檢定研究院。所有藥材均購自亳州金藥堂中藥飲片有限公司,經(jīng)新疆維吾爾醫(yī)藥研究所希爾艾力主任藥師鑒定,符合《中國藥典》2015年版項下標準;甲醇(色譜純,SIGMA公司);水為超純水; 其他試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 試驗設(shè)計

    根據(jù)前期單因素試驗結(jié)果,選取對提取工藝影響較大的提取次數(shù)(A)、提取時間(B)和加水量(C)為考察因素,以毛蕊花糖苷、總多糖提取量和出膏率為評價指標,按L9(34)正交表進行試驗[1]。因素與水平設(shè)為:A 1、2、3次,B 1.5、2.0、2.5 h,C 10、12、14倍,本實驗評價指標的權(quán)重系數(shù)為0.4、0.4、0.2。

    綜合評分=(毛蕊花糖苷含量/最大毛蕊花糖苷含量)×40+(總多糖含量/最大總多糖含量)×40+(出膏率/最大出膏率)×20。

    2.2 毛蕊花糖苷含量測定

    2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.1%甲酸水溶液(35∶65)為流動相;檢測波長為330 nm;流速為1 mL/min;柱溫為30℃;進樣量10 μL[2]。

    2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取毛蕊花糖苷對照品適量,置25 mL量瓶中,加50%甲醇制成每毫升含0.416 mg的溶液,即得。

    2.2.3 供試品溶液的制備 取樣液經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.2.4 標準曲線的制備 分別精密吸取毛蕊花糖苷對照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL至10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解,稀釋至刻度,搖勻。精密吸取上述溶液各10 μL注入液相色譜儀,記錄峰面積。以毛蕊花糖苷濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標進行線性回歸,回歸方程:Y=12 318X-33 456,r=0.9993,毛蕊花糖苷對照品濃度在10.4~104 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

    2.2.5 樣品測定 精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μL,依據(jù)“2.2.1”項下色譜條件進行測定。

    2.2.6 精密度試驗 取濃度為0.416 mg/mL的毛蕊花糖苷對照品溶液,按“2.2.1”項下色譜條件進行測定,連續(xù)進樣6次,每次10 μL,6次進樣峰面積的RSD=0.93%(n=6),表明操作過程中儀器精密度良好。

    2.2.7 重復性試驗 在優(yōu)化的水提取工藝基礎(chǔ)上進行提取的同一批提取液,按照上述“2.2.3”項下方法制成供試液,連續(xù)進樣6次,每次10 μL,6次進樣峰面積的RSD=1.1%(n=6),說明該方法的重復性良好。

    2.2.8 穩(wěn)定性試驗 同一批供試品,別在同一天的不同時間0、2、4、6、8、12 h進樣10 μL(每隔2 h),用含量測定方法重復測定,計算毛蕊花糖苷含量的RSD為2.3%;結(jié)果供試品溶液穩(wěn)定。

    2.2.9 回收率測定 采用標準添加法測定回收率。取已知含量的樣品供試液7份,每份1 mL,置于10 mL容量瓶中,第一份作為空白回收,其余6份分別準確加入濃度為41.6 μg/mL的毛蕊花糖苷對照品溶液1 mL,制備供試液,搖勻,用孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過,按“2.2.1”項下色譜條件測定,進樣10 μL,提取液中毛蕊花糖苷平均回收率為100.9%,RSD為1.13%(n=6),表明本方法的回收率良好,準確度高。見表1。

    2.3 總多糖含量測定(硫酸苯酚法)

    2.3.1 D-無水葡萄糖對照品溶液的制備 精密稱取無水葡萄糖對照品適量,置50 mL量瓶中,加適量水溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得(每毫升中含無水葡萄糖0.504 mg)。精密移取上述無水葡 萄糖對照品溶液10 mL,置50 mL量瓶中,用水定容至刻度,搖勻,即得(每毫升中含無水葡萄糖0.1008 mg)。

    2.3.2 標準曲線的制備 分別精密吸取上述對照品溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL,分別置于10 mL的量瓶內(nèi),加水稀釋至刻度,搖勻。分別吸取上述溶液1.0 mL于10 mL具塞刻度試管中,加入新鮮配制的5%苯酚試劑(精密稱取苯酚試劑5 g,置于100 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻制備)1 mL,并迅速加入濃硫酸5 ml,靜置10 min,搖勻,放置30 min,以第一份為空白對照液,在200~800 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描,得最大吸收波長為490 nm。照分光光度法試驗,在最大波長處測定各樣品吸收度,以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線,得回歸方程為Y=9.883X+0.0075,r=0.9995,在20~100 μg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

    2.3.3 供試品溶液制備 精密吸取提取液3 mL于25 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,精密吸取稀釋液1.0 mL于25 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,精密吸取稀釋液1.0 mL于10 mL具塞刻度試管中,照標準曲線項下自“加入新鮮配制的5%苯酚試劑”起,依法測定吸收度,隨行空白,照分光光度法(《中國藥典》2015年版一部,附錄通則0401)在波長490 nm處測定吸收度,依標準曲線計算總多糖含量。

    2.3.4 精密度試驗 取0.1008 mg/mL無水葡萄糖對照品溶液4.0 mL,置于10 mL的量瓶內(nèi),加水稀釋至刻度,搖勻。吸取上述溶液1.0 mL于10 mL具塞刻度試管中,加入新鮮配制的5%苯酚試劑1 mL,并迅速加入濃硫酸5 mL,靜置10 min,搖勻,放置30 min,以相應的溶劑為空白,于490 nm處連續(xù)測定吸光度值6次,計算RSD=0.38%(n=6),表明操作過程中儀器精密度良好。

    2.3.5 重復性試驗 在優(yōu)化的水提取工藝基礎(chǔ)上進行提取的同一批提取液,按照上述“2.3.3”項下方法制成供試液,連續(xù)測定吸光度值6次,計算RSD=1.23%(n=6),說明該方法的重復性良好。

    2.3.6 穩(wěn)定性試驗 同一批供試品分別在同一天的不同時間0、2、4、6、8、12 h(每隔2 h),按照上述“2.3.3”項下方法制成供試液測定,計算總多糖含量的RSD為1.78%;結(jié)果供試品溶液穩(wěn)定。

    2.3.7 回收率測定 采用標準添加法測定回收率。取已知含量的樣品供試液7份,每份1 mL,置于10 mL具塞試管中,第一份作為空白回收,其余6份分別準確加入濃度為60.048 μg/mL的無水葡萄糖苷對照品溶液1 mL,制備供試液,搖勻,按照標準曲線項下自“加入新鮮配制的5%苯酚試劑”起,依法測定吸收度。提取液中總多糖平均回收率為99.03%,RSD值為1.01%(n=6),表明本方法的回收率良好,準確度高。見表2。

    2.4 出膏率的測定

    精密吸取各提取液100 mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,于105℃烘內(nèi)干燥至恒重,至干燥器中冷卻30 min,迅速精密稱定重量,計算出膏率。

    2.5 正交試驗優(yōu)選最佳水提工藝

    在前期單因素試驗的基礎(chǔ)上,按處方比例稱取復方建腎片水提藥材。按2.1中因素水平的設(shè)置進行L9(34)正交試驗,提取液合并,濾過,濾液定容至2000 mL,分別測定毛蕊花糖苷、總多糖含量和出膏率。結(jié)果見表3~4。

    由表3直觀分析結(jié)果可知:各因素對試驗結(jié)果的影響程度為提取次數(shù)>提取時間>加水倍量,各因素的最佳水平為A3B3C3。由表4方差分析結(jié)果表明,各因素對試驗結(jié)果的影響程度依次為:提取次數(shù)>提取時間>加水倍量,提取次數(shù)對試驗結(jié)果比較,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05),A3優(yōu)于A2和A1。而提取時間和加水倍量對試驗結(jié)果比較,差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05)。結(jié)合單因素和生產(chǎn)成本綜合考慮,確定最佳提取工藝為A3B1C1,即加水量為10倍,提取時間為1.5 h,提取次數(shù)為3次。以上結(jié)果說明,L9(34)正交表的9次試驗中并沒有優(yōu)選工藝,因此還需要對優(yōu)選工藝進行驗證試驗。稱取3份1/4處方比例,結(jié)合優(yōu)選的提出參數(shù)A3B1C1進行驗證試驗,毛蕊花糖苷、總多糖及出膏率含量數(shù)據(jù)較穩(wěn)定,且出膏率和含量均較高。因此,我們認為該工藝合理、穩(wěn)定。故確定A3B1C1為最佳工藝,即藥材加水煎煮3次,每次10倍量,煎煮1.5 h。見表6。

    3 討論

    肉蓯蓉為復方健腎片的君藥,大量研究表明,肉蓯蓉有雌激素作用,肉蓯蓉提取物能通過降低雌二醇量,升高促性腺激素和睪酮水平,從而發(fā)揮補腎助陽作用[3]。肉蓯蓉由苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、揮發(fā)性成分和多糖等多種化學成分組成的,而苯乙醇總苷是肉蓯蓉中的主要活性成分[4],而毛蕊花糖苷是肉蓯蓉苯乙醇總苷類代表性化合物,研究報道毛蕊花糖苷能增加包皮腺和提肛肌的重量,為肉蓯蓉雄性激素樣作用的主要活性成分之一[5]。有研究報道,肉蓯蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷都能結(jié)合雌激素受體 ERα和ERβ,可增強雌激素應答元件(ERE) 的熒光素酶活性、從而發(fā)揮雌激素作用[6]。毛蕊花糖苷還能顯著縮短“腎陽虛”模型小鼠陰莖勃起潛伏期,可增加精子數(shù)量,提高性器官臟器系數(shù),從而改善睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)[7]。綜上所述,毛蕊花糖苷文獻報道的藥理作用與本方功能主治相一致?,F(xiàn)代研究表明,白術(shù)[8-9]、生地黃[10-11]、枸杞子[12-13]、杜仲[14-15]、肉蓯蓉[4]等藥材均含有多糖類成分組成學成分。研究報道,肉蓯蓉多糖能顯著提高東莨菪堿導致學習記憶障礙模型小鼠突觸素(SYP)、促進相關(guān)蛋白43(GAP-43)的表達,可增多海馬區(qū)突觸數(shù)量,增強突觸的可塑性,可以達到緩解學習障礙表現(xiàn)的目的[16]。白術(shù)水溶性多糖能刺激小鼠產(chǎn)生特異性IgG類抗體和非特異性交叉抗體,推測白術(shù)多糖可能是一種特異性免疫調(diào)節(jié)劑[17]。現(xiàn)代研究表明枸杞子以枸杞多糖(LBP)為主[18],枸杞多糖把血清TC、TG、LDL、FBG、FINS 、血清Cr 等明顯降低,可明顯減少腎臟LDL與OX-LDL[19],對肥胖大鼠腎臟有一定的保護作用。從已有研究報道得知,杜仲樹皮中分離的多糖eucomman A(97)和eucomman B(98),都能明顯增強網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的活性,從而增強機體非特異性免疫功能[14,20]。

    綜上所述,肉蓯蓉、白術(shù)、生地黃、枸杞子、杜仲等藥材的多糖類成分,都具有與本方功能主治相關(guān)的藥理作用。因此,在這個復方中以有效成分毛蕊花糖苷和總多糖含量及出膏率作為評價指標。

    本制劑的水煎部分由肉蓯蓉、白術(shù)、生地黃、枸杞子、杜仲等八種藥材組成,此煎煮工藝研究是保障復方健腎片安全有效和質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié),故本研究以有效成分毛蕊花糖苷和總多糖含量及出膏率作為評價指標,通過正交設(shè)計法對復方健腎片的水提取工藝進行了優(yōu)選。通過實驗結(jié)果,本著節(jié)約能源、降低成本的原則,即將藥材加水煎煮3次,每次1.5 h,每次加水量為藥材量的10倍。

    [參考文獻]

    [1] 羅海燕,申雨薇,毛彩霓,等.正交實驗法優(yōu)選海杞咀嚼片的提取工藝[J].工程技術(shù),2016,35(4):92-95.

    [2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

    [3] 馬建玲,陶大勇.肉蓯蓉提取物對雄性小鼠性激素分泌的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2014(4):43-45.

    [4] 胡佳琦,馮佳媛.肉蓯蓉的化學成分和藥理作用[J].中醫(yī)臨床研究,2012,4(15):26-28.

    [5] 宋志宏,雷麗,屠鵬飛.肉灰蓉屬植物的藥理活性研究進展[J].中草藥,2003,34(9):16-18.

    [6] 王琳琳,李薇,宋新波,等.肉蓯蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的植物雌激素活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2015,26(3):377-380.

    [7] 馬晶晶,趙帆,孫云.類葉升麻昔對腎陽虛小鼠補腎壯陽作用的研究[J].揚州大學學報:農(nóng)業(yè)與生命科學版,2009, 30(1):22-25.

    [8] 黃海英.白術(shù)活性成分的提取、純化及功能性研究[D].南昌:南昌大學生命科學學院,2006.

    [9] 董鳳彩.白術(shù)不同化學成分的藥理作用[J].中醫(yī)臨床研究,2015,14(7):28-29.

    [10] 李建軍,李靜云,王瑩,等.地黃藥用研究概述[J].生物學教學,2013,38(3):4-6.

    [11] 付國輝,杜鑫.地黃化學成分及藥理作用研究進展[J].中國醫(yī)藥科學,2015,5(15):39-41.

    [12] 如克亞·加帕爾,孫玉敬,等.枸杞植物化學成分及其生物活性的研究進展[J].中國食品學報,2013,16(8):161-172.

    [13] 滕俊,袁佳,葉莎莎.枸杞子化學成分及藥理作用相關(guān)性概述[J].海峽藥學,2014,26(6):36-37.

    [14] Gonda R,Tomoda M,Shimizu N,et al. An acidic polysaccharide having activity on the reticuloendothe-lial system from the bark of Eucommia ulmoides [J]. Chem Pharm Bull,1990,38(7):1966-1969.

    [15] 馮晗,周宏灝,歐陽冬生.杜仲化學成分及藥理作用研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學,2015,20(6):713-720.

    [16] 尹若熙,李剛,俞騰飛,等.肉蓯蓉多糖對東莨菪堿所致學習記憶障礙模型小鼠在突觸可塑性方面的保護作用[J].中國藥理學通報,2014,30(6):801-807.

    [17] 孫文平,李發(fā)勝,侯殿東,等.當歸、白術(shù)、制白附子多糖對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(7):37-38.

    [18] 陳立格.枸杞子的藥理作用和臨床應用價值分析[J].中醫(yī)中藥,2015,15(1):92.

    [19] 陳武,馬衛(wèi)成,徐錦龍,等.暢枸杞多糖對肥胖大鼠腎臟的保護作用及機制的初步研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2013, 31(2):397-398.

    [20] Tomoda M,Gonda R,Shimizu N,et al. A reticuloendothe-lial system-activating glycan from the barks of Eucommia ulmoides [J]. Phytochemistry,1990,29(10):3091-3094.

    猜你喜歡
    正交設(shè)計提取工藝
    超聲波輔助的乙醇—硫酸銨雙水相聯(lián)合提取魚腥草總黃酮工藝
    基于極限平衡法的邊坡坡面形狀的研究
    薏苡仁酯提取工藝優(yōu)化及其滴丸的制備
    蒲公英黃酮提取方法的研究現(xiàn)狀及進展
    葛黃顆粒水提取工藝研究
    烏腺金絲桃中總黃酮超聲法提取工藝研究
    正交試驗法篩選白虎定喘口服液提取工藝研究
    麒麟尾總黃酮提取及其抗氧化作用研究
    核桃仁脂肪油提取工藝的研究
    東方教育(2016年16期)2016-11-25 03:34:47
    祁山藥醇提物提取工藝研究
    科技視界(2016年20期)2016-09-29 11:36:29
    av播播在线观看一区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲电影在线观看av| 国产激情偷乱视频一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 一区二区三区免费毛片| 日本av手机在线免费观看| 综合色丁香网| 欧美成人一区二区免费高清观看| 春色校园在线视频观看| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲精品色激情综合| 亚洲av熟女| 日本黄色片子视频| 91狼人影院| 22中文网久久字幕| 久久久久久久午夜电影| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产探花在线观看一区二区| 黄色一级大片看看| 国产 一区精品| 久久久久久大精品| 乱系列少妇在线播放| 国产精品久久久久久久久免| 免费黄网站久久成人精品| 老司机影院成人| 床上黄色一级片| 一级毛片电影观看 | 国产精品永久免费网站| 国产视频内射| 国产成人aa在线观看| 一本久久精品| 亚洲欧美日韩高清专用| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 视频中文字幕在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产av不卡久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费看a级黄色片| 欧美一区二区国产精品久久精品| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品电影一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲美女视频黄频| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品伦人一区二区| 麻豆成人av视频| 久久99精品国语久久久| 深爱激情五月婷婷| 欧美极品一区二区三区四区| 熟女电影av网| 亚洲av福利一区| 亚洲四区av| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲激情五月婷婷啪啪| 综合色av麻豆| 欧美3d第一页| 久久久久久久久久久免费av| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久网色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜亚洲福利在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 久久草成人影院| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人91sexporn| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| av线在线观看网站| 大话2 男鬼变身卡| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器| kizo精华| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品无人区乱码1区二区| 日韩欧美在线乱码| av国产免费在线观看| 久久99热这里只频精品6学生 | 日韩人妻高清精品专区| 欧美一区二区亚洲| 亚洲图色成人| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 最近视频中文字幕2019在线8| 国产老妇伦熟女老妇高清| 一级爰片在线观看| 日本五十路高清| 18禁在线播放成人免费| 欧美成人免费av一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99久久精品热视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产成人一区二区在线| 草草在线视频免费看| 毛片一级片免费看久久久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久久久久大av| 岛国在线免费视频观看| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 高清毛片免费看| 青春草视频在线免费观看| www.av在线官网国产| 精品久久久久久电影网 | 国产极品精品免费视频能看的| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产av在哪里看| 视频中文字幕在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99热这里只有是精品在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精品一及| 麻豆成人午夜福利视频| 一个人看视频在线观看www免费| 免费观看a级毛片全部| 欧美zozozo另类| 亚洲精品一区蜜桃| 精品人妻偷拍中文字幕| 卡戴珊不雅视频在线播放| 高清在线视频一区二区三区 | 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲国产精品国产精品| 欧美又色又爽又黄视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲在线观看片| 精品人妻偷拍中文字幕| 男女视频在线观看网站免费| 国产成人精品一,二区| 最近中文字幕2019免费版| 久久久午夜欧美精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲欧洲日产国产| 嫩草影院入口| 99热全是精品| 直男gayav资源| 亚洲,欧美,日韩| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | av在线老鸭窝| 日韩国内少妇激情av| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 禁无遮挡网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人毛片60女人毛片免费| or卡值多少钱| 级片在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲五月天丁香| 中文字幕久久专区| 欧美bdsm另类| 热99re8久久精品国产| 国产成人freesex在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 97热精品久久久久久| 成人综合一区亚洲| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品久久久久久av不卡| 久久这里有精品视频免费| 黄片无遮挡物在线观看| av卡一久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲真实伦在线观看| 国产免费视频播放在线视频 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人特级av手机在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 插逼视频在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 国产综合懂色| av国产免费在线观看| 大香蕉97超碰在线| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av免费在线观看| 色视频www国产| 免费av不卡在线播放| 国产成人福利小说| 直男gayav资源| 22中文网久久字幕| 久久久久九九精品影院| 内射极品少妇av片p| 亚洲精品色激情综合| 国产69精品久久久久777片| 欧美区成人在线视频| 97在线视频观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av在线天堂中文字幕| av线在线观看网站| 欧美日本亚洲视频在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 最近中文字幕2019免费版| 成人午夜高清在线视频| 老女人水多毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 在现免费观看毛片| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品日韩av在线免费观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久6这里有精品| 中文字幕久久专区| 七月丁香在线播放| 免费看av在线观看网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一区二区三区四区激情视频| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 看十八女毛片水多多多| 综合色丁香网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产 一区精品| 欧美色视频一区免费| www.av在线官网国产| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美成人免费av一区二区三区| av在线蜜桃| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲四区av| 岛国毛片在线播放| 青春草亚洲视频在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 老司机影院成人| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲内射少妇av| 国产91av在线免费观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品人妻久久久久久| 99热网站在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 免费av毛片视频| 美女高潮的动态| 亚洲第一区二区三区不卡| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产在视频线在精品| 日本与韩国留学比较| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | kizo精华| 国国产精品蜜臀av免费| 免费看av在线观看网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 91aial.com中文字幕在线观看| 97超碰精品成人国产| 亚洲av中文av极速乱| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品蜜桃在线观看| 女人久久www免费人成看片 | 国模一区二区三区四区视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 女人久久www免费人成看片 | 三级国产精品片| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品一区二区性色av| 国产精品日韩av在线免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 99热这里只有精品一区| 在线a可以看的网站| 婷婷六月久久综合丁香| 久久6这里有精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美激情久久久久久爽电影| 看非洲黑人一级黄片| 六月丁香七月| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲色图av天堂| 韩国高清视频一区二区三区| 中文字幕制服av| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av.av天堂| 99久久精品国产国产毛片| 午夜精品一区二区三区免费看| .国产精品久久| 日韩大片免费观看网站 | 国产美女午夜福利| 中文字幕久久专区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲av熟女| 亚洲av不卡在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 午夜爱爱视频在线播放| 国产免费男女视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产一区亚洲一区在线观看| av在线观看视频网站免费| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 草草在线视频免费看| 好男人视频免费观看在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩欧美 国产精品| 91久久精品国产一区二区三区| 青春草国产在线视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 大香蕉97超碰在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久 | 真实男女啪啪啪动态图| 一区二区三区高清视频在线| 我要搜黄色片| 内地一区二区视频在线| 日韩欧美 国产精品| 舔av片在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 三级国产精品欧美在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 伦理电影大哥的女人| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产成人午夜福利电影在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 人人妻人人看人人澡| 国产精品日韩av在线免费观看| 黄色欧美视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲综合色惰| 国产一区有黄有色的免费视频 | 久久精品久久久久久久性| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久国内精品自在自线图片| 1000部很黄的大片| 亚洲国产色片| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美日韩综合久久久久久| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美+日韩+精品| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 秋霞伦理黄片| 久久久精品欧美日韩精品| 国产又色又爽无遮挡免| 色综合站精品国产| av在线亚洲专区| or卡值多少钱| 特级一级黄色大片| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人freesex在线| 嫩草影院新地址| 日本熟妇午夜| 性插视频无遮挡在线免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 丰满乱子伦码专区| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产在线一区二区三区精 | 插阴视频在线观看视频| av.在线天堂| 好男人视频免费观看在线| 久久久久国产网址| videossex国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 性色avwww在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲五月天丁香| 小说图片视频综合网站| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美日韩综合久久久久久| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 熟女电影av网| 在线免费十八禁| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩欧美精品免费久久| 国产免费福利视频在线观看| 久99久视频精品免费| 边亲边吃奶的免费视频| 午夜激情福利司机影院| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 中文字幕av在线有码专区| 日韩强制内射视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产黄片视频在线免费观看| av天堂中文字幕网| 国产亚洲av嫩草精品影院| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品熟女久久久久浪| 国产高潮美女av| 国产人妻一区二区三区在| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产麻豆成人av免费视频| 免费看a级黄色片| 国产精品久久久久久久久免| 久久这里只有精品中国| 久久人妻av系列| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品人妻久久久久久| 青青草视频在线视频观看| www.av在线官网国产| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲美女搞黄在线观看| av免费在线看不卡| 成人午夜精彩视频在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产人妻一区二区三区在| 日本黄色视频三级网站网址| 三级毛片av免费| 亚洲精品,欧美精品| 韩国高清视频一区二区三区| 2022亚洲国产成人精品| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久性生活片| 一级黄色大片毛片| 91精品伊人久久大香线蕉| 搞女人的毛片| 91久久精品国产一区二区三区| 久久人妻av系列| 日韩制服骚丝袜av| 成人二区视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品人妻熟女av久视频| 日本免费在线观看一区| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产午夜精品一二区理论片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 草草在线视频免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 婷婷色综合大香蕉| 婷婷色av中文字幕| 国产三级中文精品| 桃色一区二区三区在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 人妻系列 视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 色吧在线观看| 久久久欧美国产精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 插逼视频在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲成色77777| 精品一区二区三区视频在线| 国产三级在线视频| 级片在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 成人无遮挡网站| 在线a可以看的网站| 人妻少妇偷人精品九色| eeuss影院久久| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| h日本视频在线播放| 亚洲四区av| 国产三级在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品国产高清国产av| 午夜免费激情av| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久久久久久国产电影| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久精品人妻少妇| 中文字幕亚洲精品专区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产激情偷乱视频一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 熟女电影av网| 国产亚洲一区二区精品| 日韩大片免费观看网站 | 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲国产最新在线播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产在线一区二区三区精 | av在线老鸭窝| 一级毛片久久久久久久久女| 日本黄色视频三级网站网址| 美女高潮的动态| 国产私拍福利视频在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 丰满少妇做爰视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 黄片无遮挡物在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久综合国产亚洲精品| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 中文亚洲av片在线观看爽| a级毛色黄片| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久免费精品人妻一区二区| 午夜福利在线观看吧| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品蜜桃在线观看| 精品久久久久久久久av| 伦理电影大哥的女人| 乱系列少妇在线播放| 最新中文字幕久久久久| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久6这里有精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久久网色| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品久久久噜噜| 综合色丁香网| 永久免费av网站大全| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 真实男女啪啪啪动态图| 免费观看人在逋| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 精品久久久久久久久av| 国产精品1区2区在线观看.| 少妇熟女欧美另类| 亚洲综合色惰| 中文资源天堂在线| 国产精品熟女久久久久浪| 精品久久久久久久久亚洲| 中文字幕久久专区| 免费搜索国产男女视频| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲国产精品国产精品| 欧美一区二区亚洲| 身体一侧抽搐| 欧美高清性xxxxhd video| 成年女人永久免费观看视频| 网址你懂的国产日韩在线| 99热全是精品| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 特级一级黄色大片| 国产真实乱freesex| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 麻豆一二三区av精品| 亚洲五月天丁香| 2021天堂中文幕一二区在线观| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 偷拍熟女少妇极品色| 三级国产精品欧美在线观看| 内地一区二区视频在线| 乱人视频在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品蜜桃在线观看| 男女国产视频网站| 免费观看在线日韩| 国产精品伦人一区二区| 男女边吃奶边做爰视频| 插逼视频在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 91久久精品国产一区二区三区| 熟女电影av网| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久久久大精品| 国产av码专区亚洲av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 男人狂女人下面高潮的视频| 成年女人永久免费观看视频| 在线天堂最新版资源| 中文字幕亚洲精品专区| 激情 狠狠 欧美| av在线蜜桃| 99久久成人亚洲精品观看| 综合色丁香网| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 老女人水多毛片| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲国产精品专区欧美|