電針對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及腦內(nèi)海馬區(qū)NO、NOS 的影響*

馬 莉，姜 歡，劉 征△，孫士紅

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040)

血管性癡呆(VD)是由各種腦血管疾病引起的腦功能障礙［1］，以認(rèn)知功能缺損為主要表現(xiàn)。近幾年，VD 的發(fā)病率逐年升高，成為僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)的第2 位癡呆類型。臨床觀察表明，針刺可以改善VD 患者的學(xué)習(xí)記憶功能，針刺具有多靶點(diǎn)、多通道、多水平的調(diào)控作用。本課題采用2－血管阻斷法(2－VO)制作VD 大鼠模型［2］，觀察電針頭部額區(qū)對(duì)VD 大鼠海馬區(qū)自由基代謝的影響，以深入研究針刺治療VD 的有效機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)器材 722 光柵分光光度計(jì);LG－10 低溫高速離心機(jī);分析振蕩器;電動(dòng)玻璃勻漿機(jī);電熱恒溫水浴箱;電子天平;Morris 迷宮儀。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用健康Wistar 雄性老齡大鼠，60只，月齡為18 ～20，體重為(500 ±20)g。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模方法 VD 大鼠模型采用2－VO 阻斷法建立。將60 只Wistar 老齡大鼠按照完全隨機(jī)分組法分為4 組，每組各15 只，分別為假手術(shù)組、電針組、模型組及西藥組。給予常規(guī)消毒后，以10%烏拉坦(1 g/kg)腹腔注射麻醉，頸部行正中切口，鈍性剝離左右頸總動(dòng)脈和神經(jīng)，給予腹腔注射硝普鈉2.5 mg/kg，之后以無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉左右頸總動(dòng)脈，為時(shí)10 min，之后撤掉動(dòng)脈夾再通10 min，再夾閉10 min。造模結(jié)束后縫合頸部傷口，假手術(shù)組僅分離左右頸總動(dòng)脈后即縫合傷口。造模后籠中飼養(yǎng)大鼠，注意保溫，同時(shí)給予肌注青霉素防止傷口感染，每只20 萬U，連續(xù)5 天。

1.2.2 治療方法 術(shù)后7 天各組給予相應(yīng)治療。電針組按照于致順頭穴分區(qū)叢刺法選取VD 大鼠額區(qū)給予叢刺方法，先以神庭透刺至囟會(huì)，并在此基礎(chǔ)上向左、右各1 寸和2 寸處再引4 條平行線刺入。之后連通電麻儀，2 Hz 頻率，選取疏密波，以大鼠額區(qū)輕微顫動(dòng)為度，持續(xù)20 min。撤掉電麻儀后再留針30 min，每日1 次。西藥組給予40 mg/ml 濃度的腦復(fù)康(湖南迪諾制藥有限公司，批號(hào):H43020666)溶液灌胃，劑量為6 ml/kg。余兩組給予等量生理鹽水灌胃，每日各1次。30 天后結(jié)束治療。

1.2.3 Morris 水迷宮檢測 治療結(jié)束后各組大鼠進(jìn)行Morris 水迷宮檢測，觀察各組大鼠的行為學(xué)改變。本方法包括空間探索試驗(yàn)及定位航行試驗(yàn)，訓(xùn)練共6天，上午下午各進(jìn)行4 次，定位航行試驗(yàn)中觀測大鼠2 min內(nèi)找到平臺(tái)的時(shí)間，記錄其逃避潛伏期。定位航行試驗(yàn)結(jié)束后撤除平臺(tái)，進(jìn)行空間探索試驗(yàn)，選取任一個(gè)相同入水點(diǎn)將各組大鼠分別放入水中，在2 min 內(nèi)觀測并記錄大鼠跨越原平臺(tái)象限的次數(shù)。

1.2.4 海馬區(qū)自由基的檢測 Morris 水迷宮檢測結(jié)束后，將各組大鼠斷頭并取雙側(cè)大腦組織的海馬區(qū)，按照試劑盒說明制備勻漿，之后經(jīng)離心機(jī)離心，取上清液，應(yīng)用比色法測定NO 和NOS 的含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析計(jì)算，組間比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)用±s 表示。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 Morris 水迷宮檢測結(jié)果

假手術(shù)組與模型組比較，兩組間數(shù)據(jù)有明顯差異(P ＜0.01)，假手術(shù)組的大鼠逃避潛伏期明顯少于模型組，空間探索試驗(yàn)中假手術(shù)組的跨越次數(shù)明顯多于模型組，提示該方法造模成功;西藥組、電針組分別與模型組比較，兩組間有顯著差異(P ＜0.05)，西藥組及電針組大鼠的逃避潛伏時(shí)間較模型組均明顯縮短，跨越次數(shù)均明顯增多;西藥組與電針組比較無差異(P ＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠平均逃避潛伏期、跨越次數(shù)的比較(±s)

表1 各組大鼠平均逃避潛伏期、跨越次數(shù)的比較(±s)

注:與模型組比較，△P ＜0.01，▲P ＜0.05;與電針組比較，▽P ＞0.05。

組別 例數(shù) 逃避潛伏期(s) 跨越次數(shù)(次)假手術(shù)組 15 35.91 ±2.54△ 9.91 ±1.04△模型組 15 54.23 ±4.56 3.13 ±0.51西藥組 15 43.50 ±1.13▲▽ 6.94 ±0.12▲▽電針組 15 40.61 ±3.28▲ 7.53 ±0.61▲

2.2 自由基檢測結(jié)果

假手術(shù)組與模型組比較有顯著差異，假手術(shù)組NO 的含量和NOS 活性均低于模型組(P ＜0.01);治療后，西藥組、電針組與模型組相比較，兩組間有顯著差異，西藥組和電針組大鼠海馬組織中NO 含量和NOS 活性明顯降低(P ＜0.05);西藥組與電針組比較無差異(P ＞0.05)。見表2。

表2 各組大鼠NO、NOS 的比較(±s)

表2 各組大鼠NO、NOS 的比較(±s)

注:與模型組比較，△P ＜0.01，▲P ＜0.05;與電針組比較，▽P ＞0.05。

組別 例數(shù) NO(mmol/L) NOS(mmol/L)假手術(shù)組 15 10.78 ±0.21△ 15.67 ±0.27△模型組 15 19.24 ±0.65 28.24 ±0.32西藥組 15 15.06 ±0.23▲▽ 21.03 ±0.33▲▽電針組 15 14.35 ±0.19▲ 19.36 ±0.18▲

3 討論

我院于致順老師頭針療法主要用于治療腦源性疾病，因其能調(diào)節(jié)大腦皮層的功能，所以臨床應(yīng)用較為廣泛。于老在探尋頭部不同腧穴或治療區(qū)的相同或不同作用的基礎(chǔ)上，提出了頭穴治療區(qū)的劃分，為臨床應(yīng)用提供了更簡便有效的方法。其中額區(qū)主要用于治療智力障礙及精神神志疾病，包括記憶力減退、癲、狂、癇等神志變化癥狀［3］。在臨床中筆者采用額區(qū)叢刺并利用電針的方法治療血管性癡呆，較好地改善了患者的智能狀態(tài)。

本實(shí)驗(yàn)中筆者采用2－VO 阻斷法制作VD 動(dòng)物模型，反復(fù)夾閉并再通Wistar 老年大鼠的左右頸總動(dòng)脈，同時(shí)降低大鼠的血壓，很好地模擬了人類血管性癡呆的發(fā)病機(jī)制，此方法操作簡單、穩(wěn)定性較好，可導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)明顯學(xué)習(xí)記憶障礙，且死亡率較低，是目前較為理想的VD 動(dòng)物模型。采用Morris 水迷宮來檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，結(jié)果顯示VD 模型組大鼠的逃避潛伏時(shí)間明顯延長，跨過原平臺(tái)象限的次數(shù)明顯減少，說明VD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降，而經(jīng)過電針治療后大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力得到很好的改善，空間記憶能力增強(qiáng)，大大縮短了逃避潛伏期，跨過原平臺(tái)象限的次數(shù)也明顯增多，說明該治療方法可以增強(qiáng)大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，改善VD 大鼠的癡呆狀態(tài)。

血管性癡呆是以學(xué)習(xí)記憶障礙為主的疾病，反復(fù)缺血是其主要病因之一［4］。海馬是腦部缺血損傷最敏感的區(qū)域，其功能與信息儲(chǔ)存和記憶密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)表明，一氧化氮(NO)是一種血管活性因子，同時(shí)兼具有神經(jīng)遞質(zhì)功能，在調(diào)節(jié)大腦的血液循環(huán)、抑制或促進(jìn)遞質(zhì)釋放及學(xué)習(xí)思維記憶等多項(xiàng)生理過程中發(fā)揮著重要的作用［5］，因此推測NO 在血管性癡呆的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。大量研究表明，NO 濃度、產(chǎn)生部位和時(shí)間、作用部位的不同，決定了NO 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮著不同的作用，包括神經(jīng)保護(hù)作用和神經(jīng)毒性作用兩種［6］。NO 在血管性癡呆中介導(dǎo)何種作用，其催化酶NOS 含量的不同是一個(gè)至關(guān)重要的因素。本實(shí)驗(yàn)中模型組與假手術(shù)組比較，NO 的含量和NOS活性均明顯高于假手術(shù)組，推測過高的NOS 導(dǎo)致過量的NO 產(chǎn)生，從而引發(fā)神經(jīng)毒性作用，損傷神經(jīng)細(xì)胞膜和突觸膜，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生壞死與凋亡［7］，加重腦損傷;電針治療后，VD 大鼠腦組織NO 含量和NOS 活性顯著降低，說明電針VD 大鼠額區(qū)可以通過減少NO的過量生成，抑制由此路徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡發(fā)生，降低NO 的神經(jīng)毒性作用，保護(hù)腦細(xì)胞免受損傷，從而促進(jìn)VD 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到改善，提高大鼠智能狀態(tài)。

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