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    鴨胚大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的分離鑒定與藥敏分析

    2015-05-30 10:48:04王苗利陳靜李玉杰徐鴻曹振山
    家禽科學(xué) 2015年6期
    關(guān)鍵詞:肺炎克雷伯菌大腸桿菌

    王苗利 陳靜 李玉杰 徐鴻 曹振山

    摘 ?要:2015年4月,濱州市無棣縣某鴨場(chǎng)最近出現(xiàn)鴨胚孵化率下降,死胚率達(dá)到30%。實(shí)驗(yàn)室對(duì)送檢的3枚鴨胚進(jìn)行了細(xì)菌分離、生化鑒定及藥敏分析。通過對(duì)鴨胚的細(xì)菌分離純化,得到兩種細(xì)菌,均為革蘭氏陰性桿菌;通過對(duì)兩種細(xì)菌生化鑒定,結(jié)果為大腸桿菌和肺炎克雷伯菌;對(duì)兩種菌進(jìn)行藥敏分析,根據(jù)藥敏結(jié)果對(duì)鴨場(chǎng)進(jìn)行科學(xué)用藥,降低濫用藥、過度用藥對(duì)鴨場(chǎng)帶來的危害。

    關(guān)鍵詞:鴨胚;細(xì)菌分離;生化鑒定;藥敏分析;大腸桿菌;肺炎克雷伯菌

    中圖分類號(hào):S858.325.1 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B ? ? 文章編號(hào):1673-1085(2015)06-0010-03

    大腸桿菌病是養(yǎng)鴨場(chǎng)最常見的細(xì)菌病之一。大腸桿菌既可以水平傳播,也可以垂直傳播,主要引起鴨的卵黃吸收不全、心包炎、氣囊炎、肝周炎[1],本菌由于很容易產(chǎn)生耐藥性,實(shí)際生產(chǎn)中感染途徑及感染原因不一,臨床治療越來越復(fù)雜。

    肺炎克雷伯菌廣泛分布于自然界,該菌近年來成為僅次于大腸桿菌的最重要的條件致病菌[2-4],主要存在于人和動(dòng)物腸道、呼吸道、泌尿生殖道。肺炎克雷伯菌可在全身各部位發(fā)生感染,但最高的發(fā)病率在尿路和呼吸道。

    近年來,禽病感染發(fā)病原因越來越復(fù)雜,混合感染越來越常見,再加上抗生素的濫用,細(xì)菌的耐藥性越來越強(qiáng),給臨床診斷帶來了很大的困難。因此,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室診斷以及科學(xué)的藥敏分析,合理的指導(dǎo)用藥治療,成為今后發(fā)展的趨勢(shì),相信如果廣大養(yǎng)殖用戶都能科學(xué)、合理的用藥,一定會(huì)改善抗生素濫用、細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)的現(xiàn)象,減少抗生素給禽以及人類帶來的危害,更好地應(yīng)對(duì)禽場(chǎng)的疫病防控。

    1 ?發(fā)病情況

    2015年4月份,濱州市無棣縣某鴨場(chǎng)最近出現(xiàn)了鴨胚在孵化過程中死亡情況,經(jīng)過了解,場(chǎng)內(nèi)種鴨正常,無明顯癥狀,之前受精卵、孵化率均正常,大約28日出殼;但最近一批鴨胚孵化至24d落盤后,至第26天開始出現(xiàn)死胚。實(shí)驗(yàn)室接到場(chǎng)主送檢的樣本后,立即開展檢驗(yàn),并根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)用藥,得到了良好效果。

    2 ?試驗(yàn)材料與方法

    2.1 ?試驗(yàn)材料 ?科馬嘉顯色培養(yǎng)基,營養(yǎng)瓊脂,革蘭氏染色液,奧林巴斯顯微鏡,梅里埃生化及藥敏儀VITEC2。

    2.2 ?試驗(yàn)方法

    2.2.1 ?病料接種 ?無菌操作,將鴨胚表面用酒精和碘酊消毒;從蛋殼氣室一端敲一小孔,用無菌棉棒伸入蛋內(nèi)至卵黃,沾取病料接種于顯色培養(yǎng)基上,接種完后將平皿倒置放于溫箱中,37℃培養(yǎng)18~24h。

    2.2.2 ?細(xì)菌染色鏡檢及分離純化 ?挑取顯色平板上培養(yǎng)出的細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色,染色步驟為:結(jié)晶紫溶液染色1.5min后,清水洗凈;革蘭氏碘液酶染1.5min后,清水洗凈;酒精脫色40s后,清水洗凈;最后用復(fù)紅溶液染色20s后,清水洗凈。將玻片自然晾干,在目標(biāo)區(qū)域滴加松柏油,100倍油鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。

    結(jié)合鏡檢結(jié)果及培養(yǎng)基培養(yǎng)出的細(xì)菌顏色、形態(tài)的不同,挑取單菌落,三線劃線法純化到營養(yǎng)瓊脂平板上,將營養(yǎng)瓊脂平板倒置放于溫箱中,37℃培養(yǎng)18~24h。

    2.2.3 ?細(xì)菌鑒定及藥敏分析 ?將純化的營養(yǎng)平板取出,置于超凈臺(tái)內(nèi),根據(jù)染色鏡檢結(jié)果,選擇合適的鑒定、藥敏卡片;無菌操作,分別挑取單菌落接種于3ml 0.45%氯化鈉溶液中,菌懸液濃度控制在0.5~0.63Mc濃度,備裝鑒定卡片;濃度調(diào)好后,無菌吸取250μl菌懸液于新的3ml 0.45%氯化鈉溶液中,備裝藥敏卡片;將鑒定卡片和藥敏卡片分別插入制備好的菌懸液中,做好標(biāo)記,裝載上機(jī),5~18h后讀取結(jié)果。

    3 ?結(jié)果與分析

    3.1 ?病料接種培養(yǎng)結(jié)果 ?經(jīng)過溫箱37℃培養(yǎng)18~24h后,取出平板,觀察到平板上長(zhǎng)出兩種細(xì)菌,分別為紫紅色和藍(lán)色的菌落。

    3.2 ?細(xì)菌染色鏡檢結(jié)果 ?經(jīng)過革蘭氏染色,確定平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌為兩種,均為革蘭氏陰性桿菌。

    3.3 ?細(xì)菌生化鑒定及藥敏分析 ?生化鑒定結(jié)果見表1、表2,根據(jù)鏡檢結(jié)果,選擇GN革蘭氏陰性桿菌鑒定卡片和GN13革蘭氏陰性桿菌藥敏卡片,制備菌懸液并上機(jī);經(jīng)過鑒定和藥敏分析,鑒定結(jié)果為大腸桿菌和肺炎克雷伯菌,藥敏結(jié)果見表3、表4。

    由表1可知,生化結(jié)果符合大腸桿菌生化譜,置信度極好的鑒定結(jié)果,符合率為99%;由表2可知,生化結(jié)果符合肺炎克雷伯菌生化譜,置信度極好的鑒定結(jié)果,符合率為98%;由表3可知,此大腸桿菌首選藥依次為厄他培南、慶大霉素、妥布霉素,由表4可知,此肺炎克雷伯菌首選藥依次為環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、厄他培南、慶大霉素。

    4 ?討論

    結(jié)合此次藥敏試驗(yàn)的結(jié)果,以及考慮較小的血藥濃度,建議此鴨場(chǎng)選擇慶大霉素治療,血藥濃度控制在1μg/ml,防止濫用藥、過度用藥,造成微生物生態(tài)失衡、耐藥菌株的增加的現(xiàn)象。

    另外,大腸桿菌、肺炎克雷伯菌是常見的傳染性病原菌,建議養(yǎng)殖場(chǎng)在日常中注意生物安全的科學(xué)管理,舍內(nèi)、舍外定期消毒,減少病原菌的繁殖;及時(shí)清理病死禽及糞便,并做無害化處理;定期對(duì)場(chǎng)內(nèi)鼠類等動(dòng)物進(jìn)行滅殺;減少外來獸醫(yī)等人員帶來的感染風(fēng)險(xiǎn);減少與場(chǎng)外禽類的接觸風(fēng)險(xiǎn)。

    參考文獻(xiàn):

    [1] ?宋修慶.鴨場(chǎng)大腸桿菌病的危害與防治[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊,2011(10):30-31.

    [2] ?Ronald A.The ctiology of urinary tract infection:traditional and emerging pathogens[J].Dis Mon,2003,49(2):71-82.

    [3] ?Craven DE.What is healthcarc-associated pneumonia,and how should it be treated?[J].Curr Opin Infect Dis,2006,19(2):153-160.

    [4] ?Gupta A.I lospital-acquired infections in the neonatal intensive care unit-Klebsiella pneumonia[J].Semin Pcrinatol,2002,26(5):340-345.

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