PLC法測定復(fù)方龍血竭膠囊中五種皂苷含量

徐士奎 羅艷秋 覃安

【摘 要】 目的：建立復(fù)方龍血竭膠囊中三七皂苷含量測定的高效液相色譜法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測波長203nm。結(jié)果：三七皂苷R1的線性方程為Y=232.76X- 7.4267，在0.0276～0.276mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1的線性方程為Y=1039X-34.406，在0.112～1.118mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Re的線性方程為Y=13.46X- 2.81，在0.012～0.12mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rb1的線性方程為Y=771.03X+20.68，在0.119-1.186mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rd的線性方程為Y=237.24X+2.3069，在0.0292～0.292mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)論：PLC法能準(zhǔn)確進行定量分析復(fù)方龍血竭膠囊中五種皂苷的含量。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)方龍血竭膠囊；三七總皂苷；高效液相色譜

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-817（201）1-0008-03

復(fù)方龍血竭膠囊是由冰片、龍血竭、三七加工制成的純中藥制劑，具有活血化瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效，主要用于跌打損傷、瘀血作痛、氣血凝滯、外傷出血、膿瘡久不收口及冠心病、心絞痛、心肌梗塞、血瘀證等心腦血管疾病?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等三種對照品對其進行含量測定，檢測成本較高且操作繁瑣，為節(jié)約檢測成本和有效控制藥品質(zhì)量，本研究探索用三七總皂苷對照提取物作為對照物質(zhì)建立高效液相色譜方法，為復(fù)方龍血竭質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司），檢測器：SPD-20A（D2+W））；紫外分光光度計（島津UV-20）；分析天平（Denver B-21D，十萬分之一）；分析天平（SartorIUS BS224S，萬分之一）

1.2 試藥 對照品為三七總皂苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，10870-201002，以三七皂苷R16.9%、人參皂苷Rg1 28.0%、人參皂苷Re 3.8%、人參皂苷Rb1 29.7%、人參皂苷Rd 7.3%計）；方法學(xué)研究用復(fù)方龍血竭膠囊樣品均由云南云河藥業(yè)有限公司提供；乙腈由Merck公司生產(chǎn)，色譜純；水為超純水；磷酸為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，0.1%磷酸為流動相B，按下表進行梯度洗脫。檢測波長為203nm。

2.2 對照品貯備溶液的制備 精密稱取三七總皂苷對照品99.87mg，置2ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml含三七皂苷R1 0.2764mg、人參皂苷Rg1 1.1184mg、人參皂苷Re 0.1180mg、人參皂苷Rb1 1.18646mg、人參皂苷Rd 0.29162mg的對照品溶液，作為儲備液。對照品PLC圖譜見圖1。

2.3 供試品溶液制備 取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取約0.7g，置具塞錐形瓶中，精密加入水2ml，密塞，稱定重量，振搖30min，稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。樣品PLC圖譜見圖2。

2.4 陰性供試品溶液制備 按處方量取缺三七的其余藥材模擬制劑工藝制備陰性樣品，由云南云河藥業(yè)有限公司制備。取陰性樣品0.7g按2.3項下供試品溶液制備方法制備陰性供試品溶液。陰性樣品PLC圖譜見圖3。

2. 方法學(xué)考察[1]

2..1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取儲備液加甲醇制成系列濃度的混合對照品溶液（見表2：標(biāo)準(zhǔn)品的配制濃度），分別精密吸取10μl注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程如表3所示。

研究結(jié)果表明種成分在各自線性范圍內(nèi)，濃度與峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2..2 儀器精密度實驗 取同一對照品溶液（三七皂苷R1濃度0.166mg/ml；人參皂苷Rg1濃度0.671mg/ml；人參皂苷Re濃度0.0912mg/ml；人參皂苷Rb1濃度0.712mg/ml；人參皂苷Rd濃度0.17mg/ml），按照2.1項下的液相色譜條件重復(fù)進樣6次（n=6），每次進樣10μl，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd峰面積的RSD值分別為1.34%、1.43%、1.20%、1.39%、1.41%，均<2%，表明儀器的精密度良好。

2..3 穩(wěn)定性實驗 精密稱取復(fù)方龍血竭膠囊樣品細(xì)粉0.7g，按2.3項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取10μl分別在0、10、20、30、40、0h后進樣，按照2.1項下的色譜條件依法測定，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd的RSD分別為1.27%、1.40%、1.19%、1.33%、1.39%，表明供試品溶液在0小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

2..4 重復(fù)性實驗 精密稱取同一批次復(fù)方龍血竭膠囊樣品細(xì)粉6份，按2.3項下供試品溶液制備方法處理后進行含量測定，按照外標(biāo)法計算各樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd的含量，RSD值分別為0.34%、0.2%、0.80%、1.24%、0.79%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.. 耐用性試驗 取樣品溶液，分別對不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱及不同柱溫進行優(yōu)化測定，結(jié)果表明對被測成分色譜峰的分離度及測定結(jié)果無明顯影響。

2..6 回收率試驗 精密稱取含量已知的復(fù)方龍血竭膠囊細(xì)粉6份，每份約0.37g，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，分別精密加入三七總皂苷對照品適量，按2.3項下供試品溶液制備方法及2.1項下的色譜條件依法測定含量并計算回收率，三七皂苷R1平均回收率為101.042%，RSD=1.8%；人參皂苷Rg1平均回收率為100.39%，RSD=1.9%；人參皂苷Re平均回收率為101.91%，RSD=1.02%；人參皂苷Rb1平均回收率為100.71%，RSD=1.8%；人參皂苷Rd平均回收率為99.99%，RSD=1.29%，表明該方法的回收率良好，結(jié)果分別見表4、表、表6、表7、表8。

3 結(jié)果與討論

本實驗用三七總皂苷對照提取物作為對照組，采取PLC法同時測定復(fù)方龍血竭膠囊中三七皂苷R1、人生皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd 個成分的含量，該方法分離度好、靈敏度高且穩(wěn)定性好，快速、簡便，同時可大大減少檢測成本，不失為藥品質(zhì)量控制好的方法和思路。

藥物療效的發(fā)揮基于其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，化學(xué)成分如何表征是其質(zhì)量評價的關(guān)鍵問題?；趩蝹€化學(xué)成分的表征逐漸被認(rèn)識到違背中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)整體理念和思維體系，無法揭示物質(zhì)基礎(chǔ)-化學(xué)成分群的整體性和復(fù)雜性，而整體質(zhì)量控制的思路越來越被廣泛接收[2]，如何開發(fā)廉價、快速的化學(xué)表征技術(shù)方法是藥品質(zhì)量控制研究的重要內(nèi)容。

參考文獻

[1].國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄130-131.

[2].賀福元，鄧凱文，石繼連，等.中藥有效成分群組方技術(shù)研究若干基礎(chǔ)瓶頸問題及數(shù)理特征化思路的提出[J].中藥材，2009，32（1）：1-6.

（收稿日期：201.0.10）