高效液相色譜概述及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

曲學(xué)偉

摘 要：高效液相色譜技術(shù)以其高效、快速、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，使其在藥品的主成分含量及雜質(zhì)檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用，隨著該技術(shù)的不斷探索與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來(lái)越重要。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；藥品檢驗(yàn)；主成分含量

高效液相色譜法是20世紀(jì)70年代開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的高效、快速、準(zhǔn)確度高、適用范圍廣的一項(xiàng)化學(xué)分析及分離的技術(shù)，高效液相色譜具有高壓、高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣、柱子可反復(fù)使用以及樣品量少、容易回收等特點(diǎn)，受到人們廣泛的關(guān)注及重視[1-3]。該檢測(cè)方法也越來(lái)越成熟，得到各行業(yè)的認(rèn)可及利用，已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用[4-6]。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中也被廣泛的應(yīng)用，其對(duì)于藥品中的主成分含量、藥品中的雜質(zhì)檢測(cè)等藥物分析中有著快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)及效果[7-9]。

1 概述

1.1高效液相色譜定義

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析[10，11]。

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相） 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。高效液相色譜應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。

1.2 特點(diǎn)：

高相液相色譜具有高壓的特點(diǎn)，流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓；高速的特點(diǎn)，分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)；高效的特點(diǎn)，分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；高靈敏度的特點(diǎn)，紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)；應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)，百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)；柱子可反復(fù)使用的特點(diǎn)，用一根柱子可分離不同化合物；樣品量少、容易回收的特點(diǎn)。樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備[12]。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。

2在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

高效液相色譜技術(shù)與很多先進(jìn)的檢測(cè)儀器融合在一起，在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。目前采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方式去檢驗(yàn)藥品的主成分含量及相關(guān)雜質(zhì)等，大大提高了藥品檢驗(yàn)的效率和準(zhǔn)確性。

2.1 藥品主成分含量的測(cè)定

藥品的主成分含量可以通過(guò)高效液相色譜法得到高效準(zhǔn)確的檢測(cè)。原理為該物質(zhì)（的官能團(tuán)）在某一特定波長(zhǎng)下有吸收，并且，該物質(zhì)濃度和峰面積成正比。利用高效液相色譜法可以避免藥品輔料對(duì)主成分檢測(cè)的干擾，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

例如：使用高效液相色譜技術(shù)對(duì)米諾磷酸片中主成分米諾膦酸含量進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定方法簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。主要方法為將片劑研碎，取一定量用相應(yīng)試劑進(jìn)行溶解、過(guò)濾、上樣檢測(cè)。使用流動(dòng)相為焦磷酸鈉-四丁基溴化銨-甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm，結(jié)果顯示在0.104～31.283μg/ml范圍內(nèi)線性良好，樣品檢測(cè)中重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

2.2 藥品中雜質(zhì)的測(cè)定

高效液相色譜法要求要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關(guān)性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點(diǎn)及其應(yīng)用范圍[13]。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對(duì)分子質(zhì)量的大小，在水中和有機(jī)溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學(xué)結(jié)構(gòu)等物理、化學(xué)性質(zhì)。

利用高效液相色譜技術(shù)對(duì)藥品中的雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，由于靈敏度高，相對(duì)比較小的可能一般檢測(cè)方法難以檢測(cè)出的雜質(zhì)，高效液相色譜可以定性及定量的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確，更接近真實(shí)值，簡(jiǎn)便、可靠、重復(fù)性高、線性關(guān)系良好、回收率理想，對(duì)藥品中的雜質(zhì)可以更好的反饋，對(duì)藥品的藥代及藥效動(dòng)力學(xué)的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。進(jìn)而更好的保證藥品的使用安全，保證人民的生命安全[14]。

3結(jié)束語(yǔ)

高效液相色譜技術(shù)具有很大的應(yīng)用空間及發(fā)展前景，在藥品檢驗(yàn)的領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，它以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，大大提高了檢測(cè)的時(shí)效性及準(zhǔn)確性。高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中起著越來(lái)越重要的作用，尤其是在藥品主成分含量檢測(cè)、及藥品雜質(zhì)檢測(cè)[15，16]。高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，具有很大的發(fā)展?jié)摿?，隨著該技術(shù)的不斷改進(jìn)與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來(lái)越重要。

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