正交試驗優(yōu)選逐痰消痹方涂膜劑提取工藝研究*

冀愛云 劉建峰 魏香蘭 師延峰 張 鑫 朱昌生

西安市結(jié)核病胸部腫瘤醫(yī)院 (西安710061)

正交試驗優(yōu)選逐痰消痹方涂膜劑提取工藝研究*

冀愛云 劉建峰△魏香蘭 師延峰 張 鑫 朱昌生▲

西安市結(jié)核病胸部腫瘤醫(yī)院 (西安710061)

目的：逐痰消痹方涂膜劑的優(yōu)選提取工藝。方法：采用正交試驗設(shè)計提取方式，以高效液相色譜法測定提取液中芫花素的含量并與芫花素對照品進行對比從而判定最佳提取工藝。對確定的最佳工藝進行驗證性試驗。結(jié)果：60%的乙醇10倍量回流提取3次每次1h為最佳提取工藝，在驗證試驗中證實工藝穩(wěn)定。結(jié)論：優(yōu)選的工藝合理、穩(wěn)定、可行。

逐痰消痹方涂膜劑由甘遂、木香、大戟、白芥子、川芎、芫花等16味中藥組成，具有逐水祛痰，化瘀通絡(luò)，通陽利肺之功效，用于包裹性胸膜炎、胸腔積液、胸膜黏連、胸膜肥厚等癥的治療[1]。本課題采用先進的技術(shù)和工藝，將其制成涂膜劑，改型后藥物更易吸收，療效更加穩(wěn)定，且減小藥物對患者皮膚的刺激，適于臨床應(yīng)用。成熟的提取工藝是涂膜劑療效的關(guān)鍵因素之一，本研究采用正交試驗法對該方提取工藝進行了優(yōu)選，保證前期提取過程穩(wěn)定可行。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器 高效液相色譜儀(島津LC-2010ATH)；紫外可見檢測器(UV-VIS)；Shim-pack VP-ODS柱(250mm×4.6mm，0.45μm)色譜柱；賽多利斯BP211D型電子分析天平；KQ3200DE型超聲波清洗器。

1.2 試 藥 逐痰消痹方涂膜劑；芫花素對照品(批號：111899-201001)由中國藥品生物制品檢定所測定；甲醇為色譜純；超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 因素水平的設(shè)計 根據(jù)處方中各味藥的主要成分和理化性質(zhì)，將白芷、甘遂、川芎和丹參等粉碎備用，與芫花、木香、枳實、甘遂等混合，用乙醇提取。為了確保療效，本方提取工藝的確定是以君藥芫花的有效成分芫花素的提取程度以及出膏率為考核指標，對逐痰消痹方涂膜劑的乙醇提取工藝進行優(yōu)選。

本實驗擬定的影響因素包括乙醇的濃度(A)、乙醇的用量(B)、提取的時間(C)、提取的次數(shù)(D)[4]。根據(jù)預(yù)實驗，每個因素選3個水平，A選取60、80、95，B選取6、8、10倍，C選取1h、1.5h、2h，D選取1、2、3次。

2.2 樣品中芫花素的含量測定 色譜條件: 色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱(250mm×4.6mm，0.45μm)；甲醇-水-冰乙酸流動相(65︰35︰0.8)；檢測波長：338nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；進樣量：10μL。

溶液的制備:標準品：精密稱取芫花素對照品0.00091g，加甲醇定容至10mL,制成每1mL含0.091mg的溶液，即得。供試品：根據(jù)處方投藥，每個試驗組取藥總量相等。按照正交設(shè)計表中所列條件進行試驗，濾過，取續(xù)濾液，即得。 陰性供試品：按處方比例取處方中缺芫花的陰性樣品，提取，濾過，方法同供試品。

線性關(guān)系考察:芫花素對照品溶液精密吸取(91μg/mL)量分別為1μL、2μL、3μL、4μL、5μL并注入液相色譜儀分別測定，將縱坐標設(shè)定為峰面積積分值(y)，將橫坐標設(shè)定為芫花素對照品進樣量(μg)，繪制標準曲線，計算得回歸方程y=4.00×106x-2.41×105，r=0.9999，線性范圍為0.091～0.455μg。

測定: 對各供試品溶液、對照品溶液、陰性供試品溶液進行提取，提取量均為10μl，注入高效液相色譜儀，按色譜條件測定峰面積，計算芫花素含量，色譜圖見圖1，結(jié)果見表1。

A.對照品 B.供試品 C.陰性對照品

2.3 出膏率的測定 用移液管吸取各工藝提取液5mL，置于105℃干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于減壓干燥箱中干燥至恒質(zhì)量，計算出膏率。

表1 L9(34)正交試驗設(shè)計與結(jié)果

2.4 正交試驗分析 以干浸膏的率和芫花素含量為指標，對乙醇濃度(A)、乙醇用量(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)4個因素進行考察。按L9(34)正交表分別進行提取，實驗設(shè)計及結(jié)果見表1。不考慮交互作用，由R值可知，各因素對測定結(jié)果的影響次序為D> B> C > A。通過方差分析可知，4個因素中，A、B、C、D的F值分別為1.00、16.565、12.612、122.684，D具有顯著影響(P0.01)，其他因素均不具顯著影響?？紤]到大生產(chǎn)時生產(chǎn)周期及操作成本的問題，確定最佳提取工藝為A1B3C1D3。即60%的乙醇、10倍量、每次1h、提取3次。

2.5 驗證試驗 按處方量稱取同一批藥材(組成方劑)3份，按最佳提取工藝進行驗證試驗，結(jié)果3批芫花素含量分別是83.78%、85.47%、80.65%，出膏率分別是16.32%、15.87%、15.22%表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 討 論 研究中我們主要選用乙醇作為提取溶劑，主要是考慮逐痰消痹方中芫花、枳實、甘遂等藥物的主要成分為醇溶性成分[2-4]。本研究采用正交試驗方案設(shè)計，考慮到有效成分的提取受提取溶劑的濃度，用量，提取時間，提取次數(shù)的影響，將芫花素含量作為主要測定指標，得出提取次數(shù)是主要影響因素。通過反復(fù)試驗，得出穩(wěn)定可靠、易于提取的工藝，且經(jīng)驗證該法優(yōu)越、可行。為保證臨床藥效，更好地控制涂膜劑生產(chǎn)質(zhì)量提供參考。本研究在注重涂膜劑質(zhì)量的同時，優(yōu)選出適合工業(yè)化生產(chǎn)的提取方法，為涂膜劑的進一步開發(fā)提供科學(xué)的依據(jù)。

在此基礎(chǔ)上，我們將對涂膜劑的具體工業(yè)化生產(chǎn)進行實踐，借鑒其他成熟的工業(yè)技術(shù)，力圖為逐痰消痹方涂膜劑的批量生產(chǎn)探求合理、高效的模式，以適應(yīng)臨床需求特點，為此類藥品的生產(chǎn)提供參考。

[1] 弓顯鳳, 董榮秀, 趙 琳, 等. 中西醫(yī)結(jié)合加磁熱治療結(jié)核性胸膜炎[J]. 浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2007, 17 (10): 597-598.

[2] 葛 莉, 馮一凡，王衛(wèi)峰，等. 正交試驗優(yōu)選丹川膠囊的醇提工藝[J]. 陜西中醫(yī), 2012, 33(8): 1072-1073.

[3] 曹雨誕, 張 麗, 李 媛，等. 甘遂的毒性成分、炮制方法及炮制減毒機制的研究進展[J]. 中國藥房, 2011, 22 (19): 1817-1819.

[4] 張永勇, 倪 麗, 范春林，等. 枳實中一個新的酚苷成分[J]. 中草藥, 2006, 37(9): 1295-1297.

(收稿2014- 08-02；修回2014-09-17)

Study on the extraction technology of Zhutan Xiaobi plastics

Xi'an TB and Thoracic Tumor Hospital (Xi’an 710061)

Ji Aiyun Liu Jianfeng Wei Xianglan et al

Objective:To potimize the optimum extraction process of Zhutan Xiaobi plastics. Methods:HPLC analysis on contect of genkwanin in Zhutan Xiaobi extract. Selected the best extraction process by orthogonal test. Results:Indicate 60% ethanol quantity of 10 times, reflux extraction 2 hours, 3 times was the optimum craft of extraction. Conclusion: The extraction technology is reasonable, stable and feasible.

Orthogonal experiment @ Zhutan Xiaobi plastics

*陜西省中醫(yī)管理局中醫(yī)藥科研課題(lc81)

正交試驗 @逐痰消痹方涂膜劑

R283

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.02.052

△陜西省中醫(yī)藥研究院(西安710003)

▲通訊作者