坎地沙坦酯片溶出度考察

孫 璇 ，王婧斯 ，龔 莉 ，郭金娟 ，劉照勝

（1.天津醫(yī)科大學藥學院，天津300070；2.天津泛博生物科技有限公司，天津300384）

坎地沙坦酯為選擇性血管緊張素…型受體拮抗劑類抗高血壓藥，是由瑞典阿斯特拉公司和日本武田公司一起開發(fā)，于1997年12月在瑞典首次上市，臨床上用于治療輕中度原發(fā)性高血壓，效果顯著，安全有效，不良反應(yīng)一般較輕微。本品對患者的腎功能有一定的維護和改善作用，且能減少糖尿病患者和輕度蛋白尿患者的尿蛋白排泄，是一種具有良好前景的抗高血壓藥物[1-3]。由于《中國藥典》沒有收載坎地沙坦酯片溶出度測定方法，所以本文根據(jù)美國FDA溶出方法數(shù)據(jù)庫中的“candesartan cilex

etil tablets”溶出方法（簡稱“FDA 法”)、《日本藥局方》第16版收錄的“坎地沙坦酯片”溶出方法[4]（簡稱“JP16法”)、《國家藥典委員會》坎地沙坦酯片征求意見稿溶出方法（簡稱“ChP法”）[5]對坎地沙坦酯的溶出度測定進行考察，以確立一種準確、可靠、適用性強的溶出度測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Lab Alliance SSISeries 1500高效液相色譜儀；CSChrom Plus色譜工作站；柱溫箱（Model100，天津科貝爾光電技術(shù)有限公司）；智能溶出試驗儀（ZRS-8G，天津市天大天發(fā)科技有限公司）；坎地沙坦酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100685-200401）；坎地沙坦西酯片（必洛斯，天津武田藥品有限公司，批號：025A）；坎地沙坦西酯片（自制片，批號：01）；吐溫20（西隴化工股份有限公司）；吐溫20（日本和光純藥工業(yè)株式會社）；十二烷基硫酸鈉（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；十二烷基硫酸鈉（天津市江天化工技術(shù)有限公司）；十二烷基硫酸鈉（天津大學科威公司）；甲醇、乙腈（天津康科德科技有限公司，色譜純）；其它試劑均為市售分析純，重蒸水（自制）。

1.2 溶出方法的建立

1.2.1 溶出度測定方法 本試驗參考FDA法、JP16法、ChP法3種溶出度方法及其測定方法的比較，詳細見表1、表2。

1.2.2 溶出介質(zhì)的考察 取坎地沙坦酯片，照溶出度測定法[6]（中國藥典2010年版二部附錄ⅩC第二法）測定，轉(zhuǎn)速為 50 r·min-1，溫度（37±0.5）℃，依法操作，經(jīng) 5、10、20、30、45 和 60min 時取樣 5mL，濾過，同時補加相應(yīng)的溶出介質(zhì)5mL，取續(xù)濾液20 μL注入液相色譜儀，根據(jù)相應(yīng)的測定方法檢測，記錄色譜圖；另取坎地沙坦酯對照品適量，制成每1 mL中約含坎地沙坦酯10μg的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算坎地沙坦酯片的累積溶出百分率。

表1 坎地沙坦酯溶出度方法對比Tab1 Com parison on dissolutionm ethod by candesartan cilexetil

表2 坎地沙坦酯溶出度測定方法的比較Tab2 Comparison on threeHPLCmethodsby candesartan cilexetil

1.2.3 自擬方法的建立 本試驗在ChP法基礎(chǔ)上考察不同濃度的SDS為溶出介質(zhì)的溶出度。根據(jù)溶出度試驗指導(dǎo)原則，溶出介質(zhì)中表面活性劑濃度大于0.5%時，體內(nèi)外相關(guān)性差；同時通過對坎地沙坦酯在不同濃度SDS的溶解度考察，確立以0.5%SDS為溶出介質(zhì)測定坎地沙坦酯的體外溶出情況，測得其累積溶出百分率。

1.2.4 相似因子法 固體制劑的體外溶出度數(shù)據(jù)是評價一種藥物制劑不同品種、不同廠家、不同批次間質(zhì)量的重要數(shù)據(jù)[7]。采用美國FDA的藥物評估和研究中心（CDER）和歐洲藥品管理局（EMEA）收載并推薦使用的溶出曲線相似性f2因子法[8]對體外釋藥數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。美國FDA規(guī)定f2值在50～100之間可以認為兩種處方制劑在同一釋藥條件中或同一處方制劑在不同釋藥條件中釋藥無差別。被廣泛應(yīng)用于比較溶出曲線、篩選處方、評價藥物穩(wěn)定性、優(yōu)化劑型、評價批間重現(xiàn)性等。

式中，Rt為t時間對照藥品的溶出度，Tt為t時間試驗藥品的溶出度，W為適宜的權(quán)重因子。

相似因子

1.2.5 轉(zhuǎn)速考察 照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅩC第二法），轉(zhuǎn)速分別為50、75和100 r·min-1，其余照溶出度測定方法，計算累積溶出度百分率。

1.3 測定坎地沙坦酯全溶出曲線 依據(jù)自選0.5%SDS法建立坎地沙坦酯溶出度測定方法，以含0.5%SDS為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，溫度為（37±0.5）℃采用槳法進行試驗，經(jīng)45min取樣，過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取上述供試品溶液與對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算出每片的溶出量，限度為標示量的75%，應(yīng)符合規(guī)定。

1.4 HPLC測定方法

1.4.1 方法學驗證

1.4.1.1 色譜條件為：色譜柱：Inertsil誖ODS-3色譜柱（150mm×4.6mm,5μm），根據(jù)自擬法流動相條件為乙腈-水-冰醋酸（75∶25∶1），檢測波長為 254 nm，進樣量：20μL，柱溫：35℃。

1.4.1.2 樣品溶液的制備：⑴對照品溶液：稱取坎地沙坦酯原料約25mg，精密稱定，置25mL的量瓶中，加乙腈適量，超聲溶解，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL于100mL量瓶中，加0.5%SDS溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；⑵供試品溶液：取本品適量（約相當于坎地沙坦酯8mg），精密稱定，加0.5%SDS超聲溶解制成濃度約為10μg/mL的溶液，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；⑶空白輔料溶液：稱取相應(yīng)處方比例混合輔料約384mg，精密稱定，置25mL的量瓶中，加乙腈適量，超聲溶解，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL于100mL量瓶中，加0.5%SDS溶液稀釋至刻度，搖勻，作為空白輔料溶液。

1.4.1.3 系統(tǒng)適用性試驗：分別取“1.4.1.2項下”3種溶液，按照“1.4.1.1項下”色譜條件，取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.4.1.4 線性關(guān)系考察：精密稱取坎地沙坦酯對照品適量，用乙腈溶解制成濃度為0.1mg/mL的溶液作為對照品溶液貯備液。分別精密量取上述貯備液加 0.5%SDS 稀釋并配制成 1、4、8、10、12 和 16 μg/mL一系列濃度溶液。按照“1.4.1.1項下”色譜條件，取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.4.1.5 精密度試驗:按“1.4.1.2項下”方法配制供試品溶液，按照“1.4.1.1項下”色譜條件，同一供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，同日內(nèi)連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，計算日內(nèi)精密度；連續(xù)3 d測定6次，計算日間精密度。

1.4.1.6 重復(fù)性試驗：按照“1.4.1.2項下”方法配制供試品溶液6份，按照“1.4.1.1項下”色譜條件，精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.4.1.7 穩(wěn)定性試驗：按“1.4.1.2項下”方法配制供試品溶液，按照“1.4.1.1項下”色譜條件，精密量取供試品溶液 20 μL 分別于 0、1、2、4、7、8 和 24 h 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.4.1.8 回收率試驗：按“1.4.1.2項下”方法配制對照品貯備液，精密稱取對照品貯備液適量，按處方比例加入輔料，用溶出介質(zhì)配制成測定濃度的50%、80%和100%的溶液，按照“1.4.1.1項下”色譜條件，取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2 結(jié)果

2.1 方法學驗證結(jié)果

2.1.1 系統(tǒng)適用性試驗 結(jié)果表明，供試品溶液與對照品溶液出峰時間一致，空白輔料不干擾測定。理論塔板數(shù)以坎地沙坦酯峰計算為8 748，坎地沙坦酯峰與溶劑峰的分離度為15.808，坎地沙坦酯峰的拖尾因子為1.017，結(jié)果見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性譜圖Fig 1 HPLCChromatography of dissolution of system suitability

2.1.2 線性關(guān)系考察結(jié)果 坎地沙坦酯的回歸方程為A=17 938C+2 809.4，r=0.999 8?？驳厣程辊ピ?～16μg/mL范圍內(nèi)線性較好。

2.1.3 精密度試驗結(jié)果 讀取供試品溶液的主峰面積，計算日內(nèi)精密度 RSD=0.19%（n＝6），日間精密度RSD=0.43%（n＝6），試驗結(jié)果表明，精密度良好，符合測定要求。

2.1.4 重復(fù)性試驗結(jié)果 讀取主峰峰面積，計算RSD=0.50%（n＝6）。試驗結(jié)果表明，重復(fù)配制供試液進行測定的結(jié)果具有很好的重復(fù)性。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果 計算RSD為0.12%（n＝7），表明坎地沙坦酯樣品溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 回收率試驗結(jié)果 計算回收率，結(jié)果9份樣品平均回收率為 101.0%，RSD 為 0.76%（n＝9），回收率的測定結(jié)果符合要求，該方法準確度良好，見表3。

表3 回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab3 Recovery of dissolution determ ination（n＝9）

2.2 不同溶出介質(zhì)考察結(jié)果

2.2.1 FDA法、JP16法、ChP法的考察 不同溶出介質(zhì)測得的累積溶出曲線，結(jié)果見圖2。對其進行相似因子（f2）值比較，選定1%吐溫20（日本和光）的溶出介質(zhì)作為參比，結(jié)果如表4。

圖2 不同溶出介質(zhì)條件的累積溶出百分率考察Fig 2 Curvesof cumulative dissolution percentwith different medium

表4 不同溶出介質(zhì)測定坎地沙坦酯片累積溶出曲線的f2值比較Tab4 Comparison on cum ulative dissolution curve sim ilarity factor by candesartan cilexetil

由圖2、表4可知，只有使用日本進口的吐溫20采用FAD和JP16法測得的累積溶出曲線才符合標準，但是日本進口的吐溫20不易購買。

2.2.2 自擬方法的建立 以自擬方法0.5%SDS為溶出介質(zhì)測定坎地沙坦酯的累積溶出百分率如圖3。對其溶出數(shù)據(jù)，進行相似因子（f2）比較，選定1%吐溫20（日本和光）的溶出介質(zhì)作為參比，結(jié)果見表5。

圖3 不同溶出介質(zhì)條件的累積溶出百分率考察Fig 3 Curvesof cumu lative dissolution percentwith different m edium

表5 不同溶出介質(zhì)測定坎地沙坦酯片累積溶出曲線的f2值比較Tab5 Comparison on cum ulative dissolution curve sim ilarity factor by candesartan cilexetil

從圖3、表5可知，⑴以0.5%SDS為溶出介質(zhì)時，測得的累積溶出曲線與FDA、JP方法測得的累積溶出曲線一致。⑵使用不同廠家來源的SDS為溶出介質(zhì)時，累積溶出百分率無明顯差異。

2.2.3 轉(zhuǎn)速考察結(jié)果 溶出結(jié)果見圖4。由圖4可知，轉(zhuǎn)速為 50 r·min-1與 75 r·min-1的累積溶出百分率無顯著性差異，100 r·min-1在20min時已達到完全溶出，溶出速度過快，考慮50 r·min-1與體內(nèi)胃腸蠕動相近且不同處方之間溶出行為差別不明顯。因此試驗最終選擇溶出轉(zhuǎn)速為50 r·min-1。

圖4 不同轉(zhuǎn)速條件累積溶出百分率考察(n=6)Fig 4 Curvesof Cumulative dissolution percentwith different rotatespeed(n=6)

2.3 自制片劑與市售制劑的相似性比較 對上市品和自制片的坎地沙坦酯用已建立的溶出方法進行累積溶出百分率測定，其累積溶出曲線見圖5，計算f2因子，以上市品作為參比制劑，結(jié)果見表6。由圖5可知自制片與上市品的溶出行為相似，均符合要求。由表6可見，自制片和市售片比較所得的f2值均大于50。表明自制片與上市片的體外溶出行為一致，在45min的累積溶出度都符合限度要求。

圖5 上市品和自制片的坎地沙坦酯累積溶出度曲線Fig 5 Cumulativedissolution curveof candesartan cilexetiland self-made tablets

表6 上市品和自制片的f2值比較Tab6 Sim ilarity analysisof candesartan cilexetiland self-m ade tablets

3 討論

溶出介質(zhì)的篩選中首先采用FDA及《日本藥局方》所提供的溶出介質(zhì)，F(xiàn)DA推薦的溶出介質(zhì)為0.35%吐溫20-pH6.5磷酸鹽緩沖液，《日本藥局方》16版坎地沙坦酯片溶出度檢查的溶出介質(zhì)為1%吐溫20溶液，試驗過程中發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的吐溫20所測得的累積溶出百分率差異較大，不能準確衡量坎地沙坦酯片的溶出情況，《國家藥典委員會》0.25%SDS溶出方法不能全溶出，而以0.5%SDS為溶出介質(zhì)時所測得的累積溶出百分率與采用日本進口吐溫20按照JP16及FDA方法所得結(jié)果相似。故經(jīng)過多次試驗考察，最終選擇0.5%SDS溶液為坎地沙坦酯片的溶出介質(zhì)，此方法簡便易行、適用性強、應(yīng)用范圍廣，可為坎地沙坦酯片的質(zhì)量控制提供參考。此外本試驗僅對一批上市品進行測定，不同批次上市品仍待繼續(xù)考察。

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[4]日本藥局方[S].第16版.2011:545

[5]國家藥典委員會.(http://www.chp.org.cn/cms/home/)

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010版.北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄ⅩC:附錄85

[7]謝沐風.溶出曲線相似性的評價方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2009,40(4):308

[8]Center for Drug Evaluation and Research.Guidance for industry bio-availability and bioequiralences studies for orally administered drugproducts:General considerations[S].1999.10