豆瓣綠組織培養(yǎng)配方篩選研究

湯楷+鄭運(yùn)歡+黃茜莉+郭英鐸

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術(shù)，研究了6-BA及各種添加物對(duì)豆瓣綠的植株誘導(dǎo)、不定芽分化及生根培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：豆瓣綠的組織培養(yǎng)應(yīng)選取葉柄基部為宜，誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關(guān)鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)Q813.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產(chǎn)于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內(nèi)觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風(fēng)除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進(jìn)行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數(shù)低，無(wú)法滿足規(guī)模化生產(chǎn)的需要。國(guó)內(nèi)目前正開始逐步重視對(duì)胡椒科植物的組織培養(yǎng)工作并取得了一定的成績(jī)，但大部分還處于初步探索的階段，有關(guān)胡椒科植物組織培養(yǎng)的報(bào)道不多[5-7]。筆者于2010年開始對(duì)胡椒科豆瓣綠屬進(jìn)行初步研究，本試驗(yàn)以葉柄基部、葉片為外植體，對(duì)豆瓣綠的組培快繁技術(shù)進(jìn)行初步研究，以滿足生產(chǎn)需要。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料：生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養(yǎng)基：以MS（誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）和花寶1號(hào)（繼代培養(yǎng)）作為基本培養(yǎng)基，試驗(yàn)使用的培養(yǎng)基成分見表1。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數(shù)遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基15瓶，每瓶接1個(gè)外植體。接種1周后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為 12 h/d、光照強(qiáng)度為800～1 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。分別在接種后15、30、45 d觀察生長(zhǎng)狀況并進(jìn)行記錄。

1.2.3繼代培養(yǎng)。在無(wú)菌條件下，將誘導(dǎo)出來(lái)的細(xì)小芽點(diǎn)分切成小塊，分別接入2#、3#培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基接3～4團(tuán)并均勻擺放。培養(yǎng)環(huán)境條件同上。

1.2.4生根培養(yǎng)。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉(zhuǎn)入4#、5#中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每瓶接種20株。接種后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為12 h/d、光照強(qiáng)度為2 000～3 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強(qiáng)度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶[8-9]。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結(jié)果與分析

2.1不定芽的誘導(dǎo)

將不同外植體分別接入1#、2#培養(yǎng)基，結(jié)果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中均無(wú)明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均已出現(xiàn)細(xì)小芽點(diǎn)，而以葉片為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均還未出芽且褐化較為嚴(yán)重；接種45 d后，培養(yǎng)基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長(zhǎng)出細(xì)小芽點(diǎn)，其中以2#培養(yǎng)基的芽點(diǎn)較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養(yǎng)較好的外植體。

2.2繼代培養(yǎng)

接種35 d后觀察，2#、3#培養(yǎng)基中的細(xì)小芽點(diǎn)均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能是由于增殖過(guò)于旺盛，經(jīng)過(guò)多次分瓶后植株可以復(fù)壯。有時(shí)在經(jīng)過(guò)多次繼代增殖后，少部分幼苗會(huì)有根系長(zhǎng)出，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能與品種特性有關(guān)（圖1a）。

2.3生根培養(yǎng)

將無(wú)根苗打散接種于3#、4#培養(yǎng)基中，接種60 d后進(jìn)行調(diào)查，其生根及生長(zhǎng)狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養(yǎng)基都是適宜的生根壯苗培養(yǎng)基。但5#培養(yǎng)基中只使用的天然營(yíng)養(yǎng)添加物而無(wú)需使用植物激素，成本較低，且植株生長(zhǎng)狀況都比4#培養(yǎng)基好，因此5#培養(yǎng)基為適宜的生根培養(yǎng)基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經(jīng)過(guò)此方法，可使試管苗成活率達(dá)到100%。

3結(jié)論

試驗(yàn)選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)豆瓣綠的組織培養(yǎng)材料應(yīng)選取葉柄基部為宜，且芽誘導(dǎo)階段適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗(yàn)結(jié)果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營(yíng)養(yǎng)添加物而不添加植物激素，既節(jié)約了生產(chǎn)成本，又縮短了成苗時(shí)間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

4參考文獻(xiàn)

[1] 蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，24（4）：43.

[2] 蘇平.豆瓣綠無(wú)病毒苗的培育及無(wú)土栽培[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，2002，14（1）：46.

[3] 徐蘇，王明偉，李娜.草胡椒屬藥用植物研究進(jìn)展[J].中草藥，2005，36（12）：1893-1896.

[4] 李文安，王玲.雙色豆瓣綠的快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，1988，25（6）：43.

[5] 蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖[J].江蘇林業(yè)科技，1990，15（1）：14-15.

[6] 蔣雄輝，陳春滿，何蜜麗，等.荷葉椒草的組織培養(yǎng)和再生[J].植物生理學(xué)通訊，2008，44（3）：518.

[7] 李鳳蘭，劉榮梅，胡國(guó)富，等.五彩椒（Capsicumannuum L.）的組織培養(yǎng)研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（11）：62-65.

[8] 馬燕，程金水.豆瓣綠組織培養(yǎng)輻射誘變效果的初步研究[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，16（3）：325-331.

[9] 張瑞麟，范敏.西瓜皮椒草的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（1）：45.

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術(shù)，研究了6-BA及各種添加物對(duì)豆瓣綠的植株誘導(dǎo)、不定芽分化及生根培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：豆瓣綠的組織培養(yǎng)應(yīng)選取葉柄基部為宜，誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關(guān)鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)Q813.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產(chǎn)于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內(nèi)觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風(fēng)除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進(jìn)行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數(shù)低，無(wú)法滿足規(guī)模化生產(chǎn)的需要。國(guó)內(nèi)目前正開始逐步重視對(duì)胡椒科植物的組織培養(yǎng)工作并取得了一定的成績(jī)，但大部分還處于初步探索的階段，有關(guān)胡椒科植物組織培養(yǎng)的報(bào)道不多[5-7]。筆者于2010年開始對(duì)胡椒科豆瓣綠屬進(jìn)行初步研究，本試驗(yàn)以葉柄基部、葉片為外植體，對(duì)豆瓣綠的組培快繁技術(shù)進(jìn)行初步研究，以滿足生產(chǎn)需要。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料：生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養(yǎng)基：以MS（誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）和花寶1號(hào)（繼代培養(yǎng)）作為基本培養(yǎng)基，試驗(yàn)使用的培養(yǎng)基成分見表1。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數(shù)遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基15瓶，每瓶接1個(gè)外植體。接種1周后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為 12 h/d、光照強(qiáng)度為800～1 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。分別在接種后15、30、45 d觀察生長(zhǎng)狀況并進(jìn)行記錄。

1.2.3繼代培養(yǎng)。在無(wú)菌條件下，將誘導(dǎo)出來(lái)的細(xì)小芽點(diǎn)分切成小塊，分別接入2#、3#培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基接3～4團(tuán)并均勻擺放。培養(yǎng)環(huán)境條件同上。

1.2.4生根培養(yǎng)。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉(zhuǎn)入4#、5#中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每瓶接種20株。接種后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為12 h/d、光照強(qiáng)度為2 000～3 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強(qiáng)度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶[8-9]。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結(jié)果與分析

2.1不定芽的誘導(dǎo)

將不同外植體分別接入1#、2#培養(yǎng)基，結(jié)果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中均無(wú)明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均已出現(xiàn)細(xì)小芽點(diǎn)，而以葉片為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均還未出芽且褐化較為嚴(yán)重；接種45 d后，培養(yǎng)基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長(zhǎng)出細(xì)小芽點(diǎn)，其中以2#培養(yǎng)基的芽點(diǎn)較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養(yǎng)較好的外植體。

2.2繼代培養(yǎng)

接種35 d后觀察，2#、3#培養(yǎng)基中的細(xì)小芽點(diǎn)均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能是由于增殖過(guò)于旺盛，經(jīng)過(guò)多次分瓶后植株可以復(fù)壯。有時(shí)在經(jīng)過(guò)多次繼代增殖后，少部分幼苗會(huì)有根系長(zhǎng)出，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能與品種特性有關(guān)（圖1a）。

2.3生根培養(yǎng)

將無(wú)根苗打散接種于3#、4#培養(yǎng)基中，接種60 d后進(jìn)行調(diào)查，其生根及生長(zhǎng)狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養(yǎng)基都是適宜的生根壯苗培養(yǎng)基。但5#培養(yǎng)基中只使用的天然營(yíng)養(yǎng)添加物而無(wú)需使用植物激素，成本較低，且植株生長(zhǎng)狀況都比4#培養(yǎng)基好，因此5#培養(yǎng)基為適宜的生根培養(yǎng)基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經(jīng)過(guò)此方法，可使試管苗成活率達(dá)到100%。

3結(jié)論

試驗(yàn)選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)豆瓣綠的組織培養(yǎng)材料應(yīng)選取葉柄基部為宜，且芽誘導(dǎo)階段適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗(yàn)結(jié)果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營(yíng)養(yǎng)添加物而不添加植物激素，既節(jié)約了生產(chǎn)成本，又縮短了成苗時(shí)間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

4參考文獻(xiàn)

[1] 蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，24（4）：43.

[2] 蘇平.豆瓣綠無(wú)病毒苗的培育及無(wú)土栽培[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，2002，14（1）：46.

[3] 徐蘇，王明偉，李娜.草胡椒屬藥用植物研究進(jìn)展[J].中草藥，2005，36（12）：1893-1896.

[4] 李文安，王玲.雙色豆瓣綠的快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，1988，25（6）：43.

[5] 蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖[J].江蘇林業(yè)科技，1990，15（1）：14-15.

[6] 蔣雄輝，陳春滿，何蜜麗，等.荷葉椒草的組織培養(yǎng)和再生[J].植物生理學(xué)通訊，2008，44（3）：518.

[7] 李鳳蘭，劉榮梅，胡國(guó)富，等.五彩椒（Capsicumannuum L.）的組織培養(yǎng)研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（11）：62-65.

[8] 馬燕，程金水.豆瓣綠組織培養(yǎng)輻射誘變效果的初步研究[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，16（3）：325-331.

[9] 張瑞麟，范敏.西瓜皮椒草的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（1）：45.

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術(shù)，研究了6-BA及各種添加物對(duì)豆瓣綠的植株誘導(dǎo)、不定芽分化及生根培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：豆瓣綠的組織培養(yǎng)應(yīng)選取葉柄基部為宜，誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關(guān)鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)Q813.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產(chǎn)于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內(nèi)觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風(fēng)除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進(jìn)行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數(shù)低，無(wú)法滿足規(guī)?；a(chǎn)的需要。國(guó)內(nèi)目前正開始逐步重視對(duì)胡椒科植物的組織培養(yǎng)工作并取得了一定的成績(jī)，但大部分還處于初步探索的階段，有關(guān)胡椒科植物組織培養(yǎng)的報(bào)道不多[5-7]。筆者于2010年開始對(duì)胡椒科豆瓣綠屬進(jìn)行初步研究，本試驗(yàn)以葉柄基部、葉片為外植體，對(duì)豆瓣綠的組培快繁技術(shù)進(jìn)行初步研究，以滿足生產(chǎn)需要。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料：生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養(yǎng)基：以MS（誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）和花寶1號(hào)（繼代培養(yǎng)）作為基本培養(yǎng)基，試驗(yàn)使用的培養(yǎng)基成分見表1。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數(shù)遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基15瓶，每瓶接1個(gè)外植體。接種1周后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為 12 h/d、光照強(qiáng)度為800～1 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。分別在接種后15、30、45 d觀察生長(zhǎng)狀況并進(jìn)行記錄。

1.2.3繼代培養(yǎng)。在無(wú)菌條件下，將誘導(dǎo)出來(lái)的細(xì)小芽點(diǎn)分切成小塊，分別接入2#、3#培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基接3～4團(tuán)并均勻擺放。培養(yǎng)環(huán)境條件同上。

1.2.4生根培養(yǎng)。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉(zhuǎn)入4#、5#中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每瓶接種20株。接種后置于培養(yǎng)溫度為（25±2）℃、光照時(shí)間為12 h/d、光照強(qiáng)度為2 000～3 000 lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強(qiáng)度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶[8-9]。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結(jié)果與分析

2.1不定芽的誘導(dǎo)

將不同外植體分別接入1#、2#培養(yǎng)基，結(jié)果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養(yǎng)基中均無(wú)明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均已出現(xiàn)細(xì)小芽點(diǎn)，而以葉片為外植體1#、2#培養(yǎng)基中均還未出芽且褐化較為嚴(yán)重；接種45 d后，培養(yǎng)基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長(zhǎng)出細(xì)小芽點(diǎn)，其中以2#培養(yǎng)基的芽點(diǎn)較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養(yǎng)較好的外植體。

2.2繼代培養(yǎng)

接種35 d后觀察，2#、3#培養(yǎng)基中的細(xì)小芽點(diǎn)均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能是由于增殖過(guò)于旺盛，經(jīng)過(guò)多次分瓶后植株可以復(fù)壯。有時(shí)在經(jīng)過(guò)多次繼代增殖后，少部分幼苗會(huì)有根系長(zhǎng)出，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能與品種特性有關(guān)（圖1a）。

2.3生根培養(yǎng)

將無(wú)根苗打散接種于3#、4#培養(yǎng)基中，接種60 d后進(jìn)行調(diào)查，其生根及生長(zhǎng)狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養(yǎng)基都是適宜的生根壯苗培養(yǎng)基。但5#培養(yǎng)基中只使用的天然營(yíng)養(yǎng)添加物而無(wú)需使用植物激素，成本較低，且植株生長(zhǎng)狀況都比4#培養(yǎng)基好，因此5#培養(yǎng)基為適宜的生根培養(yǎng)基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經(jīng)過(guò)煉苗，當(dāng)根數(shù)達(dá)到4~5條、植株健壯時(shí)即可出瓶。出瓶時(shí)，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經(jīng)過(guò)此方法，可使試管苗成活率達(dá)到100%。

3結(jié)論

試驗(yàn)選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)豆瓣綠的組織培養(yǎng)材料應(yīng)選取葉柄基部為宜，且芽誘導(dǎo)階段適宜培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養(yǎng)基配方為：花寶1號(hào)30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗(yàn)結(jié)果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營(yíng)養(yǎng)添加物而不添加植物激素，既節(jié)約了生產(chǎn)成本，又縮短了成苗時(shí)間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

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