茵陳蒿湯對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的逆轉(zhuǎn)作用

王永宏+趙晨曦+陳本美+賀敏+劉琳琪+李春艷+陳新

[摘要] 目的：探討茵陳蒿湯抗二甲基亞硝胺（DMN）誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化作用。方法：采用1%DMN按照1 mL給予大鼠腹腔注射制備肝纖維化模型，每周前3 d每天1次，連續(xù)造模3周；造模當(dāng)天開始灌胃給藥水飛薊素（陽性對照組，50 mg·kg^-1·d^-1）、茵陳蒿湯（高、中、低劑量治療組，20.0，8.0，3.2 g·kg^-1·d^-1），模型組和正常對照組大鼠灌胃生理鹽水，連續(xù)干預(yù)5周；采用HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化；測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST） 、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GGT）、透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（CⅣ）和Ⅲ型前膠原氨端肽（PⅢNP）水平；測定肝組織氨基酸代謝譜及羥脯氨酸含量。結(jié)果：與模型組比較，茵陳蒿湯高、中劑量能顯著逆轉(zhuǎn)大鼠肝組織病理學(xué)變化；茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠血清中ALT，AST，γ-GGT，HA，LN，CⅣ及PⅢNP水平；茵陳蒿湯能劑量依賴性降低肝組織羥脯氨酸含量，并能改變大鼠肝組織中氨基酸代謝譜。結(jié)論：茵陳蒿湯具有明顯逆轉(zhuǎn)二甲基亞硝胺誘導(dǎo)所致大鼠肝纖維化的作用。

[關(guān)鍵詞] 茵陳蒿湯； 肝纖維化； 二甲基亞硝胺； 羥脯氨酸

[收稿日期] 2013-08-13

[基金項目] 國家自然科學(xué)基金項目（81173533）；湖南省教育廳科學(xué)研究重點項目（11A017）；長沙市科技計劃重點項目（K110703-11）

[通信作者] 趙晨曦，Tel：（0731）84261424，E-mail： cxzh003@163.com

[作者簡介] 王永宏，教授，Tel：（0731）84261277，E-mail： 13873107052@163.com

肝纖維化（hepatic fibrosis）是諸多慢性肝病所共同的病理特征，其包括肝內(nèi)纖維生成與降解失衡、肝內(nèi)過多膠原沉積、肝纖維結(jié)締組織異常增生等。逆轉(zhuǎn)肝纖維化是防治肝硬化和肝癌的有效途徑，但由于其形成與發(fā)展過程頗為復(fù)雜，這使得目前尚無特效的化學(xué)藥或生物藥對肝纖維化進(jìn)行有效治療[1]。近年來中藥復(fù)方在干預(yù)肝纖維化方面已顯示越來越明顯的優(yōu)勢，據(jù)國內(nèi)外臨床及實驗研究表明，扶正化瘀319方、復(fù)方861合劑、復(fù)方鱉甲軟肝片等中藥復(fù)方均具有顯著的抗肝纖維化治療作用[2-4]。茵陳蒿湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，由茵陳、梔子和大黃組成，具有清熱利濕、利膽退黃的功效，是臨床上治療各種肝病的重要方劑[5-7]。本文擬采用DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型，探討茵陳蒿湯抗實驗性肝纖維化作用，為其臨床用藥及該類新藥開發(fā)提供一定的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 水飛薊素膠囊（利加隆，Legalon，德國馬博士大藥廠，批號81002184）。茵陳蒿湯：藥材一次性購自中南大學(xué)湘雅醫(yī)院中藥房，依據(jù)《傷寒論》按照茵陳蒿18 g、生梔子9 g和大黃6 g的比例，取3.6 kg茵陳蒿（產(chǎn)地河北，批號111102）、1.8 kg生梔子（產(chǎn)地江西，批號1112009）和1.2 kg大黃（產(chǎn)地甘肅，批號2011090810）委托湖南中醫(yī)藥大學(xué)湖南中醫(yī)藥研究院中藥研究所制備茵陳蒿湯干粉。先將茵陳蒿加10倍量水，浸泡1 h，煎煮30 min，再加入搗碎的生梔子和大黃煎煮15 min，過濾后取濾液。藥渣再加入8倍量的水煎煮20 min，過濾，合并2次濾液，濃縮成浸膏，干燥后得1.2 kg干粉，避光冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑 二甲基亞硝胺（DMN，美國Sigma公司產(chǎn)品，1 g·mL^-1）由中南大學(xué)湘雅醫(yī)院友好提供；羥脯氨酸（Hyp）等17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma公司（批號48H9800）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT，批號25120746）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，批號25120786）和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶（γ-GGT，批號25120784）檢測試劑盒購自桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子集團(tuán)公司；透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（CⅣ）和Ⅲ型前膠原氨端肽（PⅢNP）放免試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所（批號120720）；9-芴基甲氧基碳酰氯（Sigma公司，批號48H3771，F(xiàn)MOC，AR）；硼酸（長沙湘科精細(xì)化工廠，AR，批號20090705）。

1.3 儀器 LC-2010AHT型HPLC（四元梯度泵，紫外檢測器，Labsolution色譜工作站，島津，日本）；D1810C型電子分析天平（上海申生科技有限公司）；5430R型高速離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）；URIT-8000型全自動生化分析儀（桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子集團(tuán)公司）；GC-300型γ-放射免疫計數(shù)器（中國科大中佳公司）。

1.4 動物 SPF級雄性SD大鼠96只，體重（200±20） g，購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，動物生產(chǎn)許可證號SCXK（湘）2009-0004，動物使用許可證號SYXK（湘）2010-0008。

2 方法

2.1 分組 設(shè)正常對照組、模型對照組、陽性對照水飛薊素組（50 mg · kg^-1）、茵陳蒿湯高、中、低劑量組（湯劑干粉3.125，1.25，0.50 g·kg^-1·d^-1，折算生藥20.0，8.0，3.2 g·kg^-1·d^-1），共6組，其中模型組大鼠21只，其他各組為15只。

2.2 造模及給藥 以無菌生理鹽水配制1%的DMN溶液，實驗大鼠稱重后按照1 mL·kg^-1劑量腹腔注射DMN，對照組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水，每周前3 d每日造模1次，第3周末處死大鼠并觀察其纖維化形成情況，依據(jù)造模程度以確定是否需繼續(xù)注射DMN。大鼠每周稱體重1次，并按體重增長而相應(yīng)增加藥物劑量。給藥組大鼠（水飛薊素、茵陳蒿湯高、中、低劑量）自第1次注射DMN便開始按照10 mL·kg^-1體積灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物，對照組和模型組大鼠則灌胃給予等體積的生理鹽水，每天1次，共5周。大鼠每周稱體重1次，并按體重增長而相應(yīng)增加藥物劑量。endprint

2.3 樣品采集 給藥第5周末腹腔注射5%異戊巴比妥麻醉大鼠，于腹腔靜脈取血，收集血液，離心分離出血清，留取部分血清用于血清指標(biāo)測定，其余血清于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?；取肝組織左葉下段組織（10 mm×10 mm×10 mm），用4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下作病理學(xué)檢查，肝纖維化分級采用Scheuer法。分裝余下肝組織，迅速放入液氮中，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 肝組織前處理及HPLC分析條件 參照文獻(xiàn)報道的方法[8]，經(jīng)適當(dāng)?shù)馗倪M(jìn)后建立了如下的肝組織消化處理方法，取冷凍的肝臟樣本0.150 0～0.200 0 g，置于水解玻璃瓶中，加入6 mol·L^-1的HCl 10 mL，然后用酒精噴燈燒結(jié)瓶口，再放入烘箱中，于110 ℃溫度下持續(xù)24 h進(jìn)行消化處理，待樣本冷卻后，用鑷子敲碎水解玻璃瓶，將沉淀搖勻并取其中的100 μL放入2 mL塑料錐形管中，然后于15 000 r·min^-1離心5 min，取上清液10 μL放入錐形塑料瓶中，氮氣吹干，然后用10 μL蒸餾水溶解。

柱前衍生：溶解以后的樣品用10 μL的9-芴基甲氧基碳酰氯（FMOC）和20 μL硼酸進(jìn)行衍生并在35 ℃的溫度下恒溫衍生10 min[9]，然后用500 μL乙醚萃取，移去上層乙醚液，用下層液立即進(jìn)行HPLC分析。XDB-C₁₈色譜柱（4.6 mm×250 mm，2.0 μm，安捷倫）；流動相A（5%乙腈，95%醋酸鈉）及B（95%乙腈，5%醋酸鈉），流速1.0 mL·min^-1；進(jìn)樣體積20 μL；柱溫35 ℃；紫外波長檢測器：檢測波長265 nm。在以上色譜基本條件下對梯度洗提程序進(jìn)行優(yōu)化，得到的梯度洗提程序為0～10 min，23%～29%A；10～15 min，29%～38%A；15～20 min，38%～55%A；20～25 min，55%～75%A；25～27 min，75%～92%A；27～30 min，92%A；30～32 min，92%～23%A。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

第5周末處死大鼠，對照組沒有大鼠死亡，解剖7只；模型組在第3周末解剖3只觀察發(fā)現(xiàn)纖維化已經(jīng)形成，死亡4只；水飛薊素組死亡5只；茵陳蒿湯高劑量組死亡3只，中劑量組死亡7只，低劑量組死亡3只。

3.1 大鼠肝組織病理學(xué) 對照組（圖1中A） 肝細(xì)胞正常，未見明顯纖維化，為肝纖維化S0級；模型組（圖1中B）肝細(xì)胞纖維化程度明顯，表現(xiàn)為肝纖維化S4級；水飛薊素組（圖1中C）和茵陳蒿湯高劑量組（圖1中D）有輕度纖維化（匯管區(qū)有輕微纖維化及少量炎癥細(xì)胞浸潤），表現(xiàn)為肝纖維化S1級；茵陳蒿湯中劑量組（圖1中E）有輕微纖維化（為匯管區(qū)周圍纖維化或纖維隔形成，小葉結(jié)構(gòu)保留），表現(xiàn)為肝纖維化S2級；茵陳蒿湯低劑量組（圖1中F）有明顯纖維化（匯管區(qū)有較明顯纖維化及炎癥細(xì)胞浸潤），表現(xiàn)為肝纖維化S3。上述結(jié)果提示，與對照組比較，模型組大鼠肝細(xì)胞纖維化程度明顯，表明造模成功；與模型組比較，茵陳蒿湯高劑量組、中劑量組均能顯著逆轉(zhuǎn)大鼠肝纖維化，且高劑量組與陽性藥水飛薊素效果相當(dāng)，但茵陳蒿湯低劑量組未能減輕大鼠肝纖維化程度。

3.2 大鼠血清學(xué)指標(biāo) 肝功能指標(biāo)：與對照組比較，模型組肝功能指標(biāo)均明顯升高，表明造模成功；與模型組比較，水飛薊素組和茵陳蒿湯高劑量組血清中ALT水平顯著降低（P<0.05），而中劑量組和低劑量組ALT水平降低不明顯；與模型組比較，水飛薊素、茵陳蒿湯高、中劑量組血清中AST水平顯著降低（P<0.05），而低劑量組ALT水平降低不明顯；與模型組比較，僅有茵陳蒿湯高劑量組大鼠血清中γ-GGT水平顯著降低（P<0.05），而其他各組γ-GGT水平降低均未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果提示，茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠血清中ALT，AST，γ-GGT含量，其中降低AST水平最顯著（表1）。

肝纖維化4項指標(biāo)：與對照組比較，模型組HA，LN，CⅣ和PⅢNP含量均明顯升高，表明造模成功，同時提示HA，LN，CⅣ和PⅢNP水平與肝纖維化程度密切相關(guān)；與模型組比較，茵陳蒿湯高、中劑量組和水飛薊素組均能顯著降低大鼠血清肝纖維化4項指標(biāo)含量（P<0.01或P<0.05），而低劑量組各項指標(biāo)含量降低沒有顯著變化。上述結(jié)果提示茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠血清中HA，LN，CⅣ和PⅢNP含量，其中降低PⅢNP水平最顯著，各劑量組大鼠血清中PⅢNP含量已接近正常對照組（表2）。

3.3 大鼠肝組織氨基酸譜及羥脯氨酸含量 氨基酸譜：各組大鼠肝組織經(jīng)消化處理、柱前衍生后，采用高效液相色譜法分離測定氨基酸，圖示為肝組織中典型的氨基酸譜（圖2），不同處理組氨基酸譜有明顯的差異，這提示茵陳蒿湯干預(yù)后大鼠代謝譜發(fā)生了明顯變化，但其變化規(guī)律有待于進(jìn)一步研究。

羥脯氨酸含量：采用外標(biāo)法定量分析各組大鼠體內(nèi)羥脯氨酸含量，與對照組比較，模型組羥脯氨酸含量明顯增加（P<0.05）；與模型組比較，茵陳蒿湯高、中劑量組和水飛薊素組均能顯著降低大鼠肝組織羥脯氨酸含量（P<0.05），而低劑量組降低不明顯，無顯著性差異（表3）。提示茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠肝組織羥脯氨酸水平。

4 討論

茵陳蒿湯源自漢張仲景《傷寒論》，由茵陳、梔子和大黃組成，三藥相合，清熱泄?jié)?，疏肝利膽，常用于治療陽明濕熱蘊結(jié)的發(fā)黃。近年來國內(nèi)外相關(guān)研究表明茵陳蒿湯具有潛在的抗肝纖維化作用，其對四氯化碳（CCl₄）[10-11]，DMN，硫代乙酰胺（TAA）[12]以及膽管結(jié)扎[7，13]誘導(dǎo)的肝纖維化動物模型均有較好的治療作用，而且劉平課題組發(fā)現(xiàn)DMN誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型與茵陳蒿湯的濕熱內(nèi)蘊方證存在高度的相關(guān)性[14-15]，因此本文采用DMN制備肝纖維化模型，經(jīng)造模后發(fā)現(xiàn)模型組大鼠體內(nèi)ALT，AST，γ-GGT，HA，LN，CⅣ和PⅢNP水平均明顯升高，組織病理學(xué)檢測結(jié)果表明模型組大鼠的肝細(xì)胞纖維化程度明顯，這提示造模成功，而且該模型在病理學(xué)及生化指標(biāo)等方面與人的肝纖維化進(jìn)展相似，可用于探討茵陳蒿湯抗實驗性肝纖維化作用。endprint

ALT，AST和γ-GGT是臨床上常見的肝功能指標(biāo)，它們與肝功能及肝損傷程度密切相關(guān)。本實驗結(jié)果表明茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠血清中ALT，AST和γ-GGT水平，這提示其具有保肝護(hù)肝作用。此外肝組織病理學(xué)HE染色結(jié)果表明茵陳蒿湯能減少炎癥細(xì)胞浸潤和膠原沉積，從而保護(hù)肝細(xì)胞，這進(jìn)一步提示其具有很好的保肝作用。由于肝細(xì)胞損傷是肝纖維化形成的啟動因素，因此茵陳蒿湯的保肝作用可能是其抗實驗性肝纖維化的作用機(jī)制之一。

肝纖維化是發(fā)展為肝硬化及肝癌的必經(jīng)階段，其主要表現(xiàn)為肝結(jié)締組織異常增生、肝竇毛細(xì)血管化、炎癥細(xì)胞浸潤增加、細(xì)胞外間質(zhì)（ECM）合成與分泌增加、調(diào)控ECM分泌的細(xì)胞肝星狀細(xì)胞（HSC）表達(dá)增加等[16]。HA，LN，CⅣ和PⅢNP這4種血清標(biāo)志物與肝纖維化程度密切相關(guān)[17]，相關(guān)研究[18]發(fā)現(xiàn)肝纖維化過程中的ECM成分包括膠原蛋白、非膠原性糖蛋白和蛋白多糖3類，而HA是構(gòu)成ECM中蛋白多糖的主要成分， LN亦是其重要的結(jié)構(gòu)糖蛋白，血清中HA 和LN水平與肝纖維化程度密切相關(guān)。本實驗結(jié)果表明茵陳蒿湯能劑量依賴性降低大鼠血清中HA，LN，CⅣ和PⅢNP含量，這提示其能明顯減少膠原纖維的合成與沉積，從而逆轉(zhuǎn)大鼠肝纖維化，故抑制肝組織內(nèi)HA，LN，CⅣ和PⅢNP水平增高很可能是茵陳蒿湯抗實驗性肝纖維化的主要作用機(jī)制。

本研究還發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯高、中劑量組均能顯著降低大鼠肝組織內(nèi)羥脯氨酸含量，由于膠原纖維主要由膠原蛋白構(gòu)成，而羥脯氨酸常被認(rèn)為是膠原蛋白的特有成分，肝組織羥脯氨酸含量可間接反映肝纖維化的程度，因此抑制羥脯氨酸含量亦可能是茵陳蒿湯抗肝纖維化作用的潛在作用機(jī)制之一。 此外茵陳蒿湯還能改變大鼠肝組織內(nèi)的氨基酸代謝譜，但具體的作用機(jī)制及變化規(guī)律仍有待進(jìn)一步研究?？傊?，本文結(jié)果提示茵陳蒿湯具有明顯逆轉(zhuǎn)二甲基亞硝胺誘導(dǎo)所致大鼠肝纖維化的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Friedman S L. Evolving challenges in hepatic fibrosis[J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol， 2010， 7（8）：425.

[2] 高鵬飛，李鳳賢，李輝，等. 近期國內(nèi)外應(yīng)用天然藥物防治肝纖維化的研究進(jìn)展[J]. 中國中藥雜志， 2012，37（2）：158.

[3] Cheng Q， Li N， Chen M Q， et al. Fuzheng Huayu inhibits carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in mice through activating hepatic NK cells[J]. J Ethnopharmacol， 2013， 145：175.

[4] Cheung K F， Yea D W， Yang Z F， et al. Therapeutic efficacy of traditional Chinese medicine 319 recipe on hepaticfibrosis induced by carbon tetrachloride in rats[J]. J Ethnopharmacol， 2009， 124（1）：142.

[5] 張保國，劉慶芳. 茵陳蒿湯近年臨床運用[J]. 中成藥， 2011，33（3）：502.

[6] Cai H， Song Y H， Xia W J， et al. Aqueous extract of Yin-Chen-Hao decoction， a traditional Chinese prescription， exerts protective effects on concanavalin A-induced hepatitis in mice through inhibition of NF-kappa B[J]. J Pharm Pharmaco1， 2006， 58（5）： 677.

[7] Lee T Y， Chang H H， Wu M Y， et al. Yin-Chen-Hao-Tang ameliorates obstruction-induced hepatic apoptosis in rats[J]. J Pharm Pharmacol， 2007， 59（4）：583.

[8] 應(yīng)奇才，周承. 小鼠血吸蟲感染后肝臟羥脯氨酸含量的測定方法的實驗研究[J]. 寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲報， 2000，7（1）：60.

[9] 劉二剛，付旭春，錢鶯，等. 柱前衍生HPLC法測定大鼠腎組織中羥脯氨酸的含量[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報， 2012，41（2）：188.

[10] Inao M， Mochida S， Matsui A， et al. Japanese herbal medicine lnchin-Ko-to as a therapeutic drug for liver fibrosis[J]. J Hepatol， 2004， 41（4）：584.

[11] 陳廷玉，盧春風(fēng)，扈清云，等. 茵陳蒿湯對實驗性肝纖維化大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用及超微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2004，27（1）：11.

[12] Imanishi Y， Maeda N， Otogawa K， et al. Herb medicine inchin-ko-to （TJ-135） regulates PDGF-BB-dependent signaling pathways of hepatic stellate cells inprimary culture and attenuates development of liver fibrosis induced by thioacetamide administration in rats[J]. J Hepatol， 2004， 41（2）：242.endprint

[13] Lee T Y， Chang H H， Chen J H， et al. Herb medicine Yin-Chen-Hao-Tang ameliorates hepatic fibrosis in bile duct ligation rats[J]. J Ethnopharmacol， 2007，109：318.

[14] 王磊，劉平，慕永平，等. 二甲基亞硝胺大鼠肝纖維化中醫(yī)方證研究[J]. 中醫(yī)雜志， 2006， 47 （12）：929.

[15] 邊艷琴，曹紅燕，董姝，等. 茵陳蒿湯與甘露消毒丹對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)肝纖維化大鼠模型的方證比較研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2013，28（5）：1396.

[16] 蔡衛(wèi)民. 抗肝纖維化藥物研究新進(jìn)展[J]. 中國藥學(xué)雜志， 2008，43（3）：161.

[17] Bonacini M， Hadi G， Govindarajan S， et a1. Utility of a discriminant score for diagnosing advanced fibrosis or cirrhosis in patients with chronic hepatitis C virus infection[J]. Am J Gastroenterol， 1997， 92：1302.

[18] Plebai M， Burlina A. Biochemical marker of hepatic fibrosis [J]. Clin Biochem， 1991， 24（3）：219.

Reverse effect of Yinchenhao decoction in dimethyl

nitrosamine-induced hepatic fibrosis in rats

WANG Yong-hong， ZHAO Chen-xi， CHEN Ben-mei， HE Min， LIU Lin-qi， LI Chun-yan， CHEN Xin

（1.Department of Bioengineering and Environmental Science， Changsha University， Changsha 410022， China；

2.Modern Analysis and Testing Center， Central South University， Changsha 410008， China；

3.Department of Pharmaceutical Engineering， School of Chemical Engineering， Xiangtan University， Xiangtan 411105， China）

[Abstract] Objective： To discuss the reverse effect of Yinchenhao decoction（YCHD） in dimethyl nitrosamine（DMN）-induced hepatic fibrosis in rats. Method： The rat hepatic fibrosis model was established through the intraperitoneal injection with 1% dimethyl nitrosamine （DMN） with a dose of 1.0 mL·kg^-1·d^-1for consecutively three weeks， once for the first three days of each. The rats were randomly divided into six groups： the silymarin positive control group （50.0 mg·kg^-1·d^-1）， YCHD high （20.0 g·kg^-1·d^-1）， middle （8.0 g·kg^-1·d^-1） and low （3.2 g·kg^-1·d^-1） dose groups， the model group and the normal control group. The model group and the normal control group were orally administered with normal saline for consecutively five weeks. The pathologic changes in liver tissues were observed by HE staining. The levels of alanine aminotransferase（ALT）， aspartate aminotransferase（AST）， γ-glutamyltransferase（γ-GGT）， hyaluronic acid（HA）， laminin（LN）， collagen type Ⅳ（CⅣ） and type Ⅲ procollagen amino terminal peptide （PⅢNP） in serum were determined. The metabolite profiling of amino acid and the content of hydroxyproline in liver tissues were also measured. Result： Compared with the model group， YCHD high and middle dose groups could significantly reverse the pathologic changes in liver tissues of rats. YCHD could reduce the levels of ALT， AST， γ-GGT， HA， LN， CⅣ， PⅢNP in serum and the content of hydroxyproline in liver tissues in a dose-dependent manner， and altered the metabolite profiling of amino acid in rat liver tissues. Conclusion： YCHD has the effect in reversing dimethyl nitrosamine induced hepatic fibrosis in rats.

[Key words] Yinchenhao decoction； hepatic fibrosis； dimethyl nitrosamine； hydroxyproline

doi：10.4268/cjcmm20140822

[責(zé)任編輯 張寧寧]endprint