慢性HBV感染患者血清自身抗體的檢測(cè)與臨床意義

2014-03-20 01:47:23樊啟艷楊京

中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2014年7期

樊啟艷　楊京

【摘要】目的：檢測(cè)慢性HBV感染患者血清自身抗體，探討其臨床意義。方法：收集2009年4月-2011年3月貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院感染科住院部慢性HBV感染患者190例，其中45例慢性乙型肝炎（CHB），18例慢性重型肝炎（CLF），102例乙肝后肝硬化（LC），25例原發(fā)性肝癌（HCC），以30例健康體檢者為正常對(duì)照組。采用間接免疫熒光法、免疫印跡法、速率散射比濁法分別檢測(cè)血清ANA、ENA譜、RF。時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物（HBV-M），熒光定量PCR法檢測(cè)HBVDNA，并常規(guī)測(cè)定ALT、AST、TBIL、ALB。結(jié)果：慢性HBV感染者自身抗體的總檢出率32.1%明顯高于正常對(duì)照組的3.3%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）；CHB、CLF、LC、HCC組的自身抗體檢出率分別為24.4%、27.8%、33.3%、44.0%，與正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PO.05）；HBV DNA陽(yáng)性與陰性組自身抗體檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；慢性HBV感染者自身抗體陽(yáng)性與性別無(wú)明顯關(guān)系，與年齡、肝功能損害程度有密切關(guān)系（t年齡=2.37，P=0.019；tALT=4.33，P=0.000；tAST=2.60，P=0.01；tTBIL=3.53，P=0.001；tALB=-2.47，P=0.014）。結(jié)論：慢性HBV感染可誘發(fā)自身免疫性反應(yīng)，導(dǎo)致多種自身抗體的產(chǎn)生。這種自身免疫性反應(yīng)與感染者的性別、病毒復(fù)制無(wú)關(guān)，與年齡、肝功能損害程度有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】慢性乙型肝炎；自身抗體；自身免疫反應(yīng)

目前乙肝病毒感染呈世界流行趨勢(shì)，其中我國(guó)為高流行高發(fā)病區(qū)，大約有1.2億人攜帶乙肝病毒。乙肝病毒感染可導(dǎo)致病毒性肝炎，易慢性化并逐漸發(fā)展為肝硬化甚至肝衰竭、肝癌，嚴(yán)重危害人們的健康。慢性HBV感染后，臨床上按病程可分為：慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化、慢性重型肝炎、肝癌等。目前認(rèn)為，乙肝病毒感染后作用于宿主，通過宿主的免疫應(yīng)答，尤其是細(xì)胞免疫應(yīng)答清除乙肝病毒。在急性感染過程中，通過免疫反應(yīng)清除病毒，炎癥迅速康復(fù)。但在慢性感染過程中，往往由于免疫調(diào)節(jié)紊亂，可以產(chǎn)生免疫耐受、免疫損傷和自身免疫反應(yīng)，導(dǎo)致病情遷延不愈[1-2]。近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染者體內(nèi)存在多種自身抗體[3-7]，表明自身免疫反應(yīng)可能參與慢性HBV感染者的發(fā)病機(jī)制中。慢性乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展可能涉及對(duì)自身抗原的免疫應(yīng)答，包括自身抗體應(yīng)答和自身反應(yīng)性T細(xì)胞應(yīng)答[2]。自身免疫在病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制、病情轉(zhuǎn)歸及癌變中的作用正日趨受到人們的重視。為進(jìn)一步探討慢性HBV感染后引發(fā)自身免疫反應(yīng)的機(jī)制及自身抗體對(duì)肝臟功能損害的病理意義，筆者分析了190例慢性HBV感染患者的血清自身抗體（ANA、ENA譜、RF）特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009年4月-2011年3月貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院感染科住院部收治的190例慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）組45例，男40例，女5例，年齡19～67歲，平均（37.71±13.07）歲；慢性重型肝炎組（CLF）18例，男17例，女1例，年齡21～68歲，平均（41.17±12.99）歲；肝硬化（LC）組102例，男77例，女25例，年齡20～80歲，平均（50.77±13.41）歲；原發(fā)性肝癌（HCC）組25例，男20例，女5例，年齡31～74歲，平均（48.72±12.23）歲。慢性重型肝炎診斷符合2000年9月西安會(huì)議《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)，慢性乙型病毒性肝炎、乙肝后肝硬化診斷符合2005年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)制定的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，原發(fā)性肝癌診斷按全國(guó)統(tǒng)一教材內(nèi)科學(xué)第7版診斷標(biāo)準(zhǔn)。另選取30例健康體檢者作為正常對(duì)照組，其中男25例，女5例，年齡20～50歲，平均（32.82±9.52）歲。所有患者均排除其他病毒性肝炎（甲、丙、丁、戊型肝炎病毒）、自身免疫性疾病、艾滋病，近3個(gè)月未用免疫制劑（包括干擾素）。且所有患者入院后第2天空腹抽血查肝功能、自身抗體（ANA、ENA譜、RF、免疫球蛋白、C3）、HBV-M、HBVDNA，血清標(biāo)本分別送貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院生化科、免疫實(shí)驗(yàn)室、感染科實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。四組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清乙肝病毒標(biāo)志物（HBV-M）、HBVDNA的檢測(cè) 采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb，試劑購(gòu)自廣州達(dá)安公司，全自動(dòng)時(shí)間分辨免疫熒光儀測(cè)定。采用熒光定量PCR法檢測(cè)HBVDNA，試劑購(gòu)自深圳匹基公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定儀測(cè)定，下限值為103拷貝/mL。

1.2.2 血清自身抗體和免疫指標(biāo)的檢測(cè) 采用間接免疫熒光法檢測(cè)血清抗核抗體（ANA），免疫印跡法檢測(cè)抗可提取核抗原抗體（ENA）譜，速率散射比濁法檢測(cè)類風(fēng)濕因子（RF）和IgG、IgA、IgM、C3。試劑購(gòu)自歐蒙醫(yī)學(xué)診斷試驗(yàn)有限公司。

1.2.3 血清肝臟生化指標(biāo)的檢測(cè) 采用OLMPUS全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)，包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、血清白蛋白（ALB），質(zhì)量控制由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心負(fù)責(zé)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 慢性HBV感染者和正常對(duì)照組自身抗體的檢出率比

較 190例慢性HBV感染者中，61例至少有一項(xiàng)自身抗體陽(yáng)性，總檢出率達(dá)32.1%（61/190），明顯高于正常對(duì)照組的3.3%（1/30），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=10.597，P=0.001）。其中ANA、ENA、RF檢出率分別為23.2%（44/190）、5.3%（10/190）、14.7%（28/190），見表1。

2.4 慢性HBV感染者自身抗體與臨床特點(diǎn) 自身抗體陽(yáng)性和自身抗體陰性組性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與自身抗體陰性組相比，陽(yáng)性組的年齡、ALT、AST、TBIL明顯增高，ALB明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)

學(xué)意義（t年齡=2.37，P=0.019；tALT=4.33，P=0.000；tAST=2.60，P=0.01；tTBIL=3.53，P=0.001；tALB=-2.47，P=0.014），見表4。

3 討論

HBV感染的致病機(jī)制尚不十分清楚?，F(xiàn)有大量研究表明HBV感染后的肝組織損傷并非HBV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制繁殖直接作用的結(jié)果，而是機(jī)體一系列免疫反應(yīng)造成肝細(xì)胞的病理性免疫損害。這種乙肝免疫損傷包括細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷、免疫復(fù)合物引起的免疫損傷及自身免疫反應(yīng)引起的免疫損傷。自身免疫是針對(duì)自身成分的抗體或細(xì)胞性免疫效應(yīng)的現(xiàn)象，是機(jī)體對(duì)自身組織成分的免疫應(yīng)答過于亢進(jìn)的表現(xiàn)[3-4]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者近年來(lái)發(fā)現(xiàn)慢性HBV感染后存在各種自身免疫現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為血清中檢測(cè)出各種自身抗體。HBV感染產(chǎn)生自身免疫的可能機(jī)制為：（1）乙型肝炎病毒感染誘導(dǎo)自身抗原修飾，從而激發(fā)自身免疫；（2）乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致控制自身免疫的機(jī)制紊亂；（3）乙型肝炎病毒抗原與機(jī)體自身抗原之間的分子模擬[5]。

慢性HBV感染患者體內(nèi)自身抗體檢出率國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料報(bào)道不一，多為非器官特異性自身抗體，且滴度較低[3-4]。筆者在190例慢性HBV感染者血清中發(fā)現(xiàn)自身抗體：ANA、ENA、RF的總檢出率為32.1%，其中ANA檢出率達(dá)23.2%，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001），與文獻(xiàn)[3-7]報(bào)道基本一致。而慢性乙型肝炎組、慢性重型肝炎組、乙肝后肝硬化組、原發(fā)性肝癌組自身抗體檢出率分別為24.4%（11/45）、27.8%（5/18）、33.3%（34/102）、44.0%（11/25），與正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2CHB較=4.501，P=0.034；字2CLF較=4.114，P=0.043；字2LC=10.708，P=0.001；字2HCC=13.221，P=0.000；）。表明慢性HBV感染患者體內(nèi)存在著自身免疫現(xiàn)象，HBV感染可能引發(fā)自身免疫性反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體自身免疫紊亂。同時(shí)發(fā)現(xiàn)抗HBV DNA（+）組和HBV DNA（-）組自身抗體檢出率未見明顯差異（P=0.128），HBV DNA陽(yáng)性常提示患者處于病毒復(fù)制活躍期，這一結(jié)果提示HBV復(fù)制活躍期和靜止期時(shí)患者出現(xiàn)自身抗體幾率沒有顯著差異。

本文結(jié)果提示不同性別患者自身抗體陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明它們的產(chǎn)生直接與感染HBV相關(guān)，而與男女性別間的免疫差異無(wú)關(guān)。自身抗體陽(yáng)性與年齡明顯相關(guān)，表明自身抗體的出現(xiàn)不僅與HBV感染有關(guān)，而且與HBV感染病程長(zhǎng)短，病情遷延加重有關(guān)。此外，本研究顯示：自身抗體陽(yáng)性的慢性HBV感染患者的ALT、AST、TBIL明顯高于自身抗體陰性者，ALB明顯低于自身抗體陰性者，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示自身抗體陽(yáng)性者其肝損害較重，可能是自身抗體與肝細(xì)胞相互作用發(fā)生超敏反應(yīng)損傷肝細(xì)胞、釋放轉(zhuǎn)氨酶所致[8]。上述結(jié)果表明慢性HBV感染者體內(nèi)出現(xiàn)自身抗體是慢乙肝病變發(fā)展過程中的一種特征性表現(xiàn)，并可能是肝炎病毒造成肝組織損傷的機(jī)制之一[9]。HBV可通過多種途徑損害免疫系統(tǒng)，破壞機(jī)體的免疫耐受性，誘發(fā)產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)，從而加重肝損傷，使病情遷延不愈。

總之，慢性HBV感染患者體內(nèi)存在著多種自身抗體，說明自身免疫性反應(yīng)可能參與慢性HBV感染的發(fā)病機(jī)制[10-11]。機(jī)體的免疫系統(tǒng)根據(jù)病毒和細(xì)胞相互作用的不同過程與結(jié)果導(dǎo)致免疫保護(hù)和免疫損傷，機(jī)體將可能通過分子模擬機(jī)制或超抗原等激活免疫反應(yīng)，導(dǎo)致T細(xì)胞過度激活或破壞，產(chǎn)生自身抗體，其程度可能與感染者病程、肝功能損害有密切關(guān)系[12]。提示自身抗體的出現(xiàn)可能是對(duì)肝損傷釋放自身抗原的應(yīng)答，自身抗體的產(chǎn)生可能加劇肝臟的病理?yè)p害，自身免疫在乙型肝炎肝細(xì)胞損傷中起一定的作用，可在保肝、抗病毒治療的基礎(chǔ)上加用免疫調(diào)節(jié)劑治療。故慢性乙型肝炎患者檢測(cè)自身抗體，不僅對(duì)認(rèn)識(shí)疾病有意義，而且對(duì)治療也有一定的指導(dǎo)作用。

參考文獻(xiàn)

[1] Rehermann B，Nascimbeni M.Immunology of hepatitis B virus and hepatitis C virus infection[J].Nat Rev Immunol，2005，5（3）：215-229.

[2]趙英杰，熊良仲，高志文.對(duì)慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制的再認(rèn)識(shí)[J].華西醫(yī)學(xué)，2004，19（2）：345.

[3] Michalska Z，Stalke P，Witczak-Malinowska K，et al.Autoimmune reactions in HBV and HCV[J].Med Sci Moint，2001（7）：175.

[4]董振芳，李鈿，趙萬(wàn)輝，等.HBV感染患者自身抗體特征的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2010，21（1）：66.

[5]周明歡，歐強(qiáng)，譚德明.乙型肝炎病毒感染與血清自身抗體的相關(guān)性[J].世界華人消化雜志，2004，12（3）：607-609.

[6]蘇文芳，陳梅英.乙型肝炎患者血清自身抗體的檢測(cè)[J].中國(guó)醫(yī)藥研究，2005，3（4）：292-293.

[7]王蓉，耿秀蓉，洪華，等.乙型肝炎患者自身抗體的特點(diǎn)分析[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2010，7（6）：85-87.

[8]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)，肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志，2000，8（6）：324-329.

[9]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志，2005，13（13）：881-891.

[10]夏毅，徐敬軒.不同方法學(xué)檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物結(jié)果的評(píng)價(jià)探討[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（24）：112-113.

[11]楊蘭艷，劉海，鄭盛.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（14）：45-46.

[12]林曉梅，潘欽石，張文輝，等.慢性乙型肝炎患者產(chǎn)生自身免疫的研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2009，19（8）：889-891.

（收稿日期：2013-11-04）（本文編輯：歐麗）endprint