血管活性腸肽對(duì)人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞表達(dá)TNF—α的影響

[摘要] 目的 觀察血管活性腸肽（VIP）對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)下人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞表達(dá)TNF-α的影響，進(jìn)一步探討VIP在口腔扁平苔蘚（OLP）發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。 方法 體外培養(yǎng)正常人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞，以LPS和/或不同濃度VIP刺激，收集其上清液，ELISA法測(cè)定TNF-α水平。 結(jié)果 10-8 mol/L VIP處理組TNF-α表達(dá)量明顯低于LPS致炎組（P < 0.05）。 結(jié)論 10-8 mol/L VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞TNF-α的表達(dá)有明顯抑制作用，VIP可能在OLP發(fā)生發(fā)展中起保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞] 血管活性腸肽；口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞；腫瘤壞死因子-α

[中圖分類號(hào)] R96 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）12-0062-02

口腔扁平苔蘚（oral lichen planus，OLP）是一種具有一定自身免疫性疾病特點(diǎn)的口腔黏膜慢性炎癥性常見疾病。據(jù)國(guó)內(nèi)外調(diào)查資料顯示，OLP的發(fā)病率為0.11%～4.0% ，癌變率為0.14%～3.17%[1]，病因目前還尚未明確，有大量研究表明OLP的發(fā)生發(fā)展與免疫異常及神經(jīng)精神因素有關(guān)。最近又有研究揭示血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）是免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)之間相互作用的一種信號(hào)分子，在機(jī)體免疫，尤其是在局部黏膜免疫中起著一定作用[2]。本研究通過體外培養(yǎng)正常人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞，以LPS和/或不同濃度VIP對(duì)其進(jìn)行刺激，用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中TNF-α的表達(dá)情況，探討VIP對(duì)OLP發(fā)生發(fā)展中的免疫及神經(jīng)調(diào)節(jié)作用，為OLP的防治提供新思路。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

血管活性腸肽（吉爾生化上海有限公司）；脂多糖（Sigma，USA）；DMEM培養(yǎng)基（Gibco，USA）；胎牛血清（杭州四季青生物制品廠）；胰蛋白酶（Gibco，USA）；人TNF-α ELISA試劑盒（北京四正柏生物科技有限公司）。

1.2 口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組

1.2.1 口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng) 口腔頰黏膜組織來源于山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院口腔頜面外科整形手術(shù)中多余的正常黏膜，黏膜均為無角化黏膜，取自翼下頜韌帶區(qū)或頰部（需征得患者同意）。新鮮切取的口腔頰黏膜組織立即投入含雙抗的DMEM培養(yǎng)基中，用3倍抗生素PBS溶液浸泡沖洗。將組織切成0.5 cm2大小，以均勻間距分散接種于25 mL培養(yǎng)瓶中，放于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每3天換液一次，待細(xì)胞鋪滿瓶底約80%，彼此匯合時(shí)用0.25%胰蛋白酶消化至細(xì)胞回縮，DMEM培養(yǎng)基終止消化，吹打至細(xì)胞分散后按1∶2比例傳代，采用多次差別消化法分離純化細(xì)胞，取第4～6代用于實(shí)驗(yàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

3 討論

OLP是一種具有一定自身免疫性疾病特點(diǎn)的口腔黏膜慢性炎癥性常見疾病。OLP的發(fā)病率為0.11%～4.0%，癌變率為0.14%～3.17%，屬于口腔癌前狀態(tài)[1]，其發(fā)病機(jī)制目前還尚未明確，有大量研究表明OLP的發(fā)生發(fā)展與免疫異常及神經(jīng)精神因素有關(guān)。OLP是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的慢性炎癥，表現(xiàn)為口腔黏膜基底細(xì)胞的免疫損傷，損傷過程中致炎細(xì)胞因子TNF-α起著重要作用。TNF-α促使淋巴細(xì)胞從血循環(huán)遷移到上皮下炎性浸潤(rùn)區(qū)，誘導(dǎo)粘附分子表達(dá)增加，并促使細(xì)胞因子和趨化因子的進(jìn)一步產(chǎn)生，引起以T淋巴細(xì)胞為主的選擇性聚集，促進(jìn)OLP的凋亡[3]。

VIP是由28個(gè)氨基酸組成的多肽，為一直鏈結(jié)構(gòu)的具有免疫活性的小分子神經(jīng)肽，目前認(rèn)為，VIP在消化系統(tǒng)作為胃腸激素，在神經(jīng)系統(tǒng)作為神經(jīng)遞質(zhì)，在免疫系統(tǒng)能同免疫細(xì)胞相應(yīng)受體結(jié)合產(chǎn)生免疫效應(yīng)[4]，在生物體內(nèi)具有多種生物學(xué)功能。禹輝[5]與周艷等[6]的研究結(jié)果一致，結(jié)果顯示在OLP皮損中VIP的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于正常皮膚組織，提示VIP可能在OLP的發(fā)生發(fā)展中起作用。VIP作為重要的神經(jīng)遞質(zhì)，與精神壓力有關(guān)，當(dāng)受到更多壓力時(shí)，人的唾液中VIP分泌增多[7]。由此可推測(cè)OLP組織中VIP的表達(dá)增高可能與精神因素有關(guān)，但其相關(guān)性還有待于進(jìn)一步的研究。張育才等[8]研究發(fā)現(xiàn)VIP可減輕內(nèi)毒素休克大鼠腸道病變，其保護(hù)機(jī)制與下調(diào)促炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和上調(diào)抑炎癥細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)有關(guān)。VIP是膿毒癥休克治療中有潛力的免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)。王紅等[9]研究揭示了VIP治療實(shí)驗(yàn)性類風(fēng)濕炎的作用是通過抑制致病性T細(xì)胞的增殖，使免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)向Th2型反應(yīng)，并在外周促使具有抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞活化、增殖功能的Treg細(xì)胞上升和功能增強(qiáng)。劉永平等[10]研究發(fā)現(xiàn)VIP能降低LPS誘導(dǎo)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá)及活性，提示VIP在肺內(nèi)炎癥時(shí)可能具有保護(hù)性作用?？傊?，VIP是體內(nèi)一種具有廣泛生物活性的分子，它在免疫調(diào)節(jié)、黏膜免疫、自身免疫性疾病、慢性炎癥治療方面的作用還有待進(jìn)一步研究，尤其與OLP相關(guān)的研究還很少。

本研究采用ELISA法檢測(cè)VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)下人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞表達(dá)TNF-α的影響情況，結(jié)果提示10-8 mol/L的VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞TNF-α的表達(dá)有明顯抑制作用，10-7、10-6 mol/L的VIP無明顯抑制作用。VIP可能在OLP黏膜細(xì)胞損傷過程中起保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與下調(diào)促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

VIP對(duì)OLP的保護(hù)機(jī)制可能為：①VIP作為信號(hào)分子可能通過啟動(dòng)精神免疫網(wǎng)絡(luò)參與OLP的發(fā)生發(fā)展過程，在網(wǎng)絡(luò)中起協(xié)調(diào)作用，維護(hù)機(jī)體的穩(wěn)態(tài)[8]。②VIP通過抑制樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子及共刺激分子的表達(dá)來影響抗原呈遞功能，促進(jìn)口腔黏膜急性炎癥的消退、防止慢性炎癥的發(fā)生[11]。③VIP支持Th2細(xì)胞的存活和增殖，并通過不同途徑影響一些特殊細(xì)胞因子的水平，產(chǎn)生以促進(jìn)Th2細(xì)胞應(yīng)答，抑制Th1細(xì)胞增殖為特點(diǎn)的免疫應(yīng)答。VIP的免疫特性有利于治療一些以Th1細(xì)胞為主的自身免疫性疾病[12]。

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（收稿日期：2013-03-05）