逍遙散及其功效拆方對應激抑郁模型小鼠的影響

楊靖，龔錫平，劉蓉，王哲，武志強，于柳，史玉榮，曾南

抑郁癥作為一種常見且發(fā)病率不斷上升的精神障礙性疾病，受到全球精神衛(wèi)生部門的密切關(guān)注，現(xiàn)今其病因、發(fā)病機制和治療的基礎與臨床研究亦日益深入。逍遙散是體現(xiàn)“疏肝解郁”功效的經(jīng)典方劑，臨床已廣泛應用于精神疾病的治療，且療效肯定。課題組前期通過“君臣佐使”拆方研究方法，以小鼠行為絕望抑郁模型為載體，發(fā)現(xiàn)逍遙散、柴胡、當歸-白芍藥對及逍遙散去歸芍組均能顯著縮短模型小鼠的不動時間[1]。本研究立足于“功效拆方”方法，探討逍遙散及其方中體現(xiàn)不同治法的功效藥組對應激抑郁模型小鼠行為學的影響，以期進一步為逍遙散組方原理的闡釋提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 藥物及藥液制備

柴胡、當歸、白芍、茯苓、白術(shù)、薄荷、生姜、炙甘草等藥材均購自成都太極大藥房，經(jīng)本校嚴鑄云教授鑒定符合《中國藥典》2010版要求。逍遙散組成參考《方劑學》[2]所載（60 kg成人日用量）：柴胡9 g，當歸9 g，白芍9 g，白術(shù)9 g，茯苓9 g、薄荷1.5 g，生姜9 g，炙甘草4.5 g。受試藥物共分6個組：逍遙散組、疏肝藥組（柴胡、薄荷）、養(yǎng)血藥組（當歸、白芍）、健脾藥組（白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草）、疏肝藥+健脾藥組（柴胡、薄荷、白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草）、養(yǎng)血藥+健脾藥組（當歸、白芍、白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草）。各組劑量均按上述所載成人（60 kg）一日用量的30倍計算，即逍遙散30 g﹒kg-1、疏肝藥5.25 g﹒kg-1、養(yǎng)血藥 9 g﹒kg-1、健脾藥15.75 g﹒kg-1、疏肝藥+健脾藥21 g﹒kg-1、養(yǎng)血藥+健脾藥24.75 g﹒kg-1。每組藥物水煎液制備方法如下：按藥物組成要求分別取相應適量藥材，加8倍量水浸泡30 min，加熱煮沸，文火煎煮 1 h，趁熱濾過；再加6倍量水，同法分別煎煮40 min及30 min；合并三次濾液，60℃條件下減壓濃縮至所需濃度，藥液4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

鹽酸阿米替林（amitriptyline hydrochloride），批號039K1600，SIGMA公司，給藥劑量10 mg﹒kg-1。

1.2 實驗動物

ICR小鼠，雄性，體重18~22g，四川省醫(yī)學科學院實驗動物中心提供，合格證號為scxk（川）2008-24。

1.3 主要儀器

小鼠懸尾試驗箱（40 cm×30 cm×40 cm，自制）；小鼠強迫游泳試驗箱（42.5 cm×30.8 cm×18.8 cm，自制）；ZZ-6小鼠自主活動測試儀（成都泰盟科技有限公司）；LT501E 500 g/0.1g電子天平（常熟市天量儀器有限責任公司）；RE-5203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予平儀器有限公司）；BS323S 320g/0.001g電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

2 實驗方法

2.1 逍遙散及其功效拆方對小鼠懸尾試驗的影響

取健康雄性ICR小鼠，按體重分層隨機分為8組：逍遙散組、疏肝藥組、養(yǎng)血藥組、健脾藥組、疏肝藥+健脾藥組、養(yǎng)血藥+健脾藥組、空白對照組、阿米替林組。各組小鼠分別灌胃給予相應藥物或蒸餾水，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，將小鼠尾端（距尾尖1.5 cm處）用透明膠帶固定于懸尾箱中水平金屬棒上，使其呈倒懸狀態(tài)，頭部離箱底約30 cm，適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內(nèi)小鼠累計保持不動狀態(tài)的時間。

2.2 逍遙散及其功效拆方對小鼠強迫游泳試驗的影響

參照Elzbieta N[3]等試驗方法加以改進，分組及給藥方法同“2.1”。各組小鼠于實驗前24 h進行15 min游泳適應訓練。末次給藥1 h后，將小鼠頭部朝下放入自制游泳盒中（水溫23～25℃，水深10 cm），適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內(nèi)小鼠累計不動時間（小鼠在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，僅有細小的肢體運動以保持平衡）。

2.3 逍遙散及其功效拆方對小鼠自主活動的影響

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥后1 h 將小鼠放入ZZ-6小鼠自主活動測定儀中，適應2 min，觀察并記錄隨后4 min內(nèi)小鼠的平行活動次數(shù)和站立次數(shù)。

2.4 統(tǒng)計方法

各組數(shù)據(jù)均用x±S表示，計量資料符合正態(tài)分布且滿足方差齊性者采用SPSS13.0單因素方差分析（One-Way ANOVA），不符合者采用非參數(shù)檢驗秩和法分析。

3 實驗結(jié)果

無論小鼠懸尾試驗還是小鼠強迫游泳試驗均顯示，逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、疏肝藥+健脾藥、養(yǎng)血藥+健脾藥組能明顯縮短4 min內(nèi)小鼠的不動時間（P＜0.01），健脾藥組則對小鼠不動時間無顯著影響（P＞0.05）。所有藥物組在所試劑量下對小鼠自主活動無明顯影響（P＞0.05）。實驗結(jié)果見表1、表2、表3。

表1 逍遙散及其功效拆方對小鼠懸尾試驗的影響（ x±S）

表2 逍遙散及其功效拆方對小鼠強迫游泳試驗的影響（ x±S）

表3 逍遙散及其功效拆方對小鼠自主活動的影響（ x±S）

4 討論

復方分解研究（即拆方研究）一直是傳統(tǒng)復方藥理研究的重要內(nèi)容?；趶头秸w藥理研究的結(jié)果，按特定組方規(guī)律對全方進行分解研究，可利于揭示復方中各組藥物的配伍關(guān)系，為闡釋中藥復方作用原理的科學實質(zhì)提供實驗依據(jù)。目前常見的中藥復方拆方研究方法主要有以下5類：①單味藥或小藥組研究[4～5]；②君臣佐使拆方[6]；③正交設計拆方[7～8]；④功效拆方[9~11]；⑤復方化學組分拆方[12]。

基于“君臣佐使”組方原則對經(jīng)典方劑逍遙散抗抑郁作用的拆方研究表明，君藥——柴胡在全方抗抑郁作用的發(fā)揮中具有重要地位，是體現(xiàn)逍遙散抗抑郁效應的重要組分[1]；進一步將逍遙散全方分解為君藥、臣藥、君臣藥、全方去君藥、全方去君臣藥等小藥組，發(fā)現(xiàn)君臣配伍（柴胡+當歸、白芍）是逍遙散發(fā)揮抗抑郁作用的重要配伍形式[13]。上述研究方法均以“君臣佐使”組方理論為指導，是從中藥復方的基本構(gòu)成框架入手分析逍遙散抗抑郁效應的組成合理性，但并不能完全解釋逍遙散抗抑郁作用的組方特點。本研究引入“功效拆方”（或稱為“功效藥隊”）的研究模式[14]，意在確定逍遙散“疏肝解郁、養(yǎng)血健脾”治法與全方抗抑郁效應之間的對應關(guān)系。

中醫(yī)基礎理論認為，肝的生理特性為“體陰而用陽”，即肝主藏血又主疏泄，只有肝藏血功能正常，肝氣條達舒暢，人體才能具有正常的生理功能。且五行之中，肝屬木，脾屬土，木本克土，加之病變肝木之亢，故極易引起脾土失司，正所謂“見肝之病，知肝傳脾，當先實脾”。因此在治療中醫(yī)肝系統(tǒng)病變時常以疏肝養(yǎng)肝為要，兼以顧護脾胃。針對肝生理情況的特殊性，逍遙散組方的基本思路立足于“肝郁”這一中心病理環(huán)節(jié)，以柴胡、薄荷疏發(fā)郁遏之肝氣，加之當歸、白芍養(yǎng)血涵陰以補肝體助肝用，輔以白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草健脾除濕防止傳變。疏肝、養(yǎng)血、健脾三種治法相輔相成，由主證到次證，由局部到全身，層次清晰，最終達到調(diào)暢情志、改善周身的作用，并因此形成疏肝、養(yǎng)血、健脾三組功效藥組。因此，本研究所設立的拆方組別為：逍遙散（全方八味藥）、疏肝藥（柴胡、薄荷）、養(yǎng)血藥（當歸、白芍）、健脾藥（白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遙散去養(yǎng)血藥（即疏肝藥+健脾藥，柴胡、薄荷、白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遙散去疏肝藥（即養(yǎng)血藥+健脾藥，當歸、白芍、白術(shù)、茯苓、生姜、炙甘草），以期從中醫(yī)治法的角度探討逍遙散抗抑郁作用的科學內(nèi)涵和功效搭配的合理性。

結(jié)果顯示，逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、逍遙散去養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥組均能顯著改善應激抑郁模型小鼠的行為學指標，且在有效劑量下不影響小鼠的自主活動，而健脾藥組作用不明顯，由此提示疏肝藥組和養(yǎng)血藥組在逍遙散全方中扮演重要的角色，初步表明柴胡-薄荷藥組所體現(xiàn)的疏肝治法和當歸-白芍藥組所體現(xiàn)的養(yǎng)血治法是逍遙散治療抑郁癥的重要治法，實驗結(jié)果與“君臣佐使”拆方研究結(jié)果基本吻合。然而關(guān)于“疏肝”治法和“養(yǎng)血”治法抗抑郁效應的關(guān)聯(lián)性、差異性及選擇性等問題，有待今后更深入的研究。

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