當歸煮散臨床應(yīng)用最佳粒度的研究

秦素紅，何瑤，羅妮妮，傅超美

中藥煮散是藥材粉碎為顆粒與水共煮，去渣取汁制成的液體劑型[1]。煮散的歷史悠久，漢代到宋代中藥煮散已在臨床上得到廣泛應(yīng)用[2~3]，《金匱要略》記載煮散用藥量僅為原湯方的1/3。正如沈括在《夢溪筆談》中所說：“古方用湯最多，用丸散者殊少，近代用湯者殊少，應(yīng)湯皆用煮散?！敝兴幹笊⒕哂杏盟幜可?、療效高、體積小、簡便易行等諸多優(yōu)點。

中藥煮散與傳統(tǒng)飲片的區(qū)別主要在于原料藥大小的不同。單從擴散定律看，藥材顆粒越小煎出物質(zhì)就越多；但藥材過細，相互吸附強，影響擴散速度；含淀粉、黏液質(zhì)較多的藥材，入煎易糊化，影響成分溶出，且難過濾，難服用[4]。本文對當歸煮散臨床應(yīng)用的最佳粒度進行研究，以當歸的主要藥效成分阿魏酸[5]和總煎出物為指標；對比研究不同粒度煮散不同時間點指標成分煎出量，根據(jù)多樣本兩兩對比H檢驗[6]，判斷顯著性差異，確定當歸煮散的適宜入煎粒徑范圍。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20A型液相色譜儀； Diamonsil TM C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm，美國迪馬公司）；Sartorius-BS110S分析天平（德國賽多利斯公司）；DFY-300搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；BSY-1-4電熱恒溫水浴鍋（浙江余姚工業(yè)儀表二廠）。

1.2 試藥

阿魏酸對照品（批號：111022），純度≥98%，由四川省維克奇生物有限公司提供。

當歸飲片（批號：1109094）由四川新荷花中藥飲片股份有限公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學盧先明教授鑒定為傘形科植物當歸(Angelica sinensis (Oliv.)Diels)的干燥根，符合《中國藥典》2010年版當歸項下各項規(guī)定。

乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同粒度當歸煮散的制備

根據(jù)當歸藥材的質(zhì)地與粉碎性質(zhì)，采用標準篩5目、10目、18目、35目、60目將當歸粉碎成4.0毫米、2.0毫米、1.0毫米、0.5毫米、0.25毫米以下，依次定為第二、三、四、五、六組，以原飲片為第一組。對五種規(guī)格粉末粒度進行考察。

2.2 供試品溶液制備

當歸原飲片：平行稱取當歸原飲片10 g置于錐形瓶，共6份；取3份樣品分別加9倍量水，不浸泡，大火煮沸小火微沸，分別煎煮10 min, 20 min, 30 min,濾過，減壓濃縮，定容至200 mL。另3份樣品，首煎5倍量水（50 mL），煎煮30 min，濾過；二煎濾渣加水4倍量水（40 mL），分別煎煮10 min, 20 min,30 min，濾過；合并2次濾液，減壓濃縮，定容至200 mL。即得當歸原飲片不同時間點水煎樣品溶液。搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作含量測定供試液。

當歸第二、第三、第四、第五、第六組不同時間供試品溶液制備同上。

2.3 不同粒度當歸煮散不同時間點阿魏酸煎出率

2.3.1 色譜條件 流動相：乙腈-0.085%磷酸水（30︰70）；流速：1.0 mL﹒min-1；檢測波長：316 nm，柱溫：35 ℃；進樣量：15 μL。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于5000。

2.3.2 對照品溶液制備 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含0.0478 mg的溶液。

2.3.3 方法學考察 ① 專屬性考察 分別取空白溶劑、對照品溶液、當歸原飲片樣品，按上述HPLC分析條件測定，進樣15 μL，如圖1，結(jié)果表明樣品專屬性良好。

② 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液2 μL，5 μL，8 μL，10 μL，12 μL，15 μL，分別進樣分析。以峰面積為縱坐標，對照品含量為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為：Y=6268067.57X+8088.29 (R=1.00，n=6)。線性范圍為0.0956 μg～0.717 μg。

③ 精密度考察 取阿魏酸對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL，依法測定記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.14%，表明儀器精密度良好。

④ 重復(fù)性考察 按照“2.2”項供試品制備方法，平行制備當歸原飲片30 min時間點供試液樣品6份，進樣15 μL，分別按含量測定項下方法測定，記錄峰面積，結(jié)果RSD值為1.03%，表明儀器重復(fù)性良好。

圖1 專屬性考察

表1 阿魏酸加樣回收率試驗結(jié)果(n=3)

結(jié)果表明，加樣回收率在95%～105%之間，平均回收率為98.46%，RSD為1.15%，表明該方法可靠，符合含量測定的要求。

2.3.4 樣品測定結(jié)果 參照《中國藥典》2010年版一部正文當歸項下“阿魏酸”方法測定，不同粒度當歸煮散顆粒阿魏酸含量隨煎煮時間變化結(jié)果見表2。

表2 阿魏酸含量對比(n=3)

30 0.2971 0.5216 0.5637 0.5839 0.5965 0.5972 30+10 0.3547 0.5780 0.5978 0.6147 0.6178 0.6213 30+20 0.4221 0.6836 0.6974 0.6998 0.7120 0.7324 30+30 0.4716 0.7183 0.7365 0.7387 0.7379 0.7396

結(jié)果可知，同一粒度煮散顆粒水煎液中阿魏酸含量隨煎煮時間延長而增加；同一時間點，煮散藥材入煎阿魏酸煎出率較原飲片高；其中，第六組最細規(guī)格粉在六個時間點阿魏酸的煎出率均最高。

2.3.5 結(jié)果分析比較[7~9]以原飲片阿魏酸含量為1，余樣品與之比較，結(jié)果見表3。用秩和檢驗(H檢驗)進行多個樣本比較及多個樣本間兩兩比較，結(jié)果見表4。

表3 粉碎度與阿魏酸測定值比較

表4 兩兩對比（H檢驗）結(jié)果

由表3可知，當藥物顆粒為最細粉時有最佳煎出率，有效成分阿魏酸的煎出量為原藥的1.5683～2.0101倍；由表4結(jié)果表明：五個規(guī)格粒度的當歸煮散在不同時間點的阿魏酸煎出率顯著高于原飲片，P值均小于0.01；各粒度規(guī)格間無顯著差異，P值均大于0.05。

2.4 不同粒度當歸煮散顆粒不同時間點總煎出物量

精密量取“2.2”項下當歸煮散水煎樣品溶液50 mL，分別置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣于105 ℃烘箱中干燥3 h，得干浸膏，稱定，按下式公式計算：總煎出物=(VW1/20W)×100%。式中，V為每份藥材提取液總體積；W1為50 mL提取液中干浸膏重量；W為每份藥材的重量。結(jié)果見表5，表6，表7。

表5 總煎出物量對比(n=3)

20 24.11% 41.28% 42.74% 43.38% 44.74% 44.77%30 25.42% 43.68% 45.58% 46.80% 48.05% 48.69%30+10 27.14% 47.68% 47.36% 47.95% 49.33% 49.46%30+20 30.32% 47.98% 50.51% 51.22% 52.05% 52.14%30+30 32.06% 48.40% 51.29% 51.99% 52.19% 52.27%

表6 粉碎度與總煎出物測定值比較

表7 兩兩對比（H檢驗）結(jié)果

由表5結(jié)果可知，同一粒度煮散總煎出物煎出率隨煎煮時間延長而增加；不同粒度煮散顆粒其粒度越小，總煎出物煎出率越高。由表6可知，當藥物顆粒為最細粉時有最佳煎出率，總煎出物的煎出量為原藥的1.6304～1.9154倍；由表7結(jié)果表明，當歸煮散在不同時間點的總煎出物顯著高于原飲片，P值均小于0.01；各規(guī)格粒度的煮散間無顯著差異，P值均大于0.05。

3 結(jié)論與討論

本文對當歸煮散臨床應(yīng)用的最佳粒度進行研究，結(jié)果表明：當歸煮散在不同時間點阿魏酸煎出量和總煎出物均顯著高于原飲片，P值均小于0.01，煮散的煎出量為原飲片的1.5倍左右。當藥物顆粒為最細粉即小于0.25毫米時，總煎出物、阿魏酸在各個時間點煎出量均最高。兩兩對比H檢驗結(jié)果可知，五個規(guī)格粒度的煮散間總煎出物、阿魏酸煎出量無顯著差異，P值均大于0.05。較細級別煮散煎出量并未顯著高于粒徑范圍規(guī)格較大煮散。

將藥材粉碎過細，需要較大的能耗及人力設(shè)備，藥材損失量大；且經(jīng)實驗證明粒度小于0.25毫米的當歸煮散在煎煮過程中易糊化，濾過性差。綜合考慮上述因素，確定當歸煮散粒徑范圍為0.25~4.0毫米。

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