細(xì)胞色素P4502D6及多巴胺D2受體基因多態(tài)性與利培酮療效的關(guān)聯(lián)☆

楊鴿 李文強(qiáng) 張紅星 呂路線

利培酮是目前應(yīng)用最廣泛的非典型精神病藥物之一，屬于苯并異惡唑衍生物類化合物。細(xì)胞色素P4502D6(CYP2D6)是利培酮在體內(nèi)的主要代謝酶[1]，多巴胺 D2受體(DRD2)是利培酮的重要靶受體[2]。代謝酶和受體的功能狀態(tài)均是影響藥物療效的重要因素，且存在協(xié)同作用，有關(guān)利培酮療效與這兩類基因協(xié)同作用的研究尚未見報(bào)道。本研究在首發(fā)精神分裂癥患者中檢測(cè)CYP2D6基因、DRD2基因多態(tài)性，分析這些多態(tài)性位點(diǎn)以及性別與利培酮療效的關(guān)聯(lián)，為尋找影響利培酮療效造成的因素進(jìn)行前瞻性研究。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 按整群抽樣方法抽取2007年7月至2008年10月于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院的精神分裂癥患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第4版(DSM-Ⅳ)關(guān)于精神分裂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②漢族；③首發(fā)患者；④陽性與陰性精 神 癥 狀 量 表(Positive and Negative Syndrome Scale，PANSS)評(píng)分 ＞60分；⑤監(jiān)護(hù)人和患者均知情同意并簽署書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有各種免疫性感染性疾病以及嚴(yán)重心膽肝腎疾??；②癲癇、多發(fā)性硬化等神經(jīng)系統(tǒng)疾??；③精神發(fā)育遲滯或全面發(fā)育障礙。共收集到符合上述條件的精神分裂癥患者199例，男81例，女118例，病程0.64～7.71年，平均(3.89±3.12)年，年齡在 16～40歲，平均(27.30±8.58)歲，PANSS總分 62.60～109.70，平均(85.96 ± 22.79)分。

正常對(duì)照組來自新鄉(xiāng)市及周圍縣市的健康獻(xiàn)血者和新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院的工作人員及新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)生。入組標(biāo)準(zhǔn)：①漢族；②均知情同意并簽署書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有重大軀體疾病、內(nèi)分泌疾病、煙、酒精依賴及藥物濫用史；②本人有精神疾病或精神疾病家族史。共198名，男98名，女 100名，年齡l8～53歲，平均(26.30±7.10)歲。

1.2 方法

1.2.1 治療及療效評(píng)定 單一使用利培酮治療8周，起始劑量1 mg／d，根據(jù)患者耐受量在半個(gè)月內(nèi)藥物加至治療量(2～6 mg／d)，必要時(shí)可用苯二氮類藥物，但不預(yù)防性使用苯海索。出現(xiàn)嚴(yán)重副反應(yīng)或病情迅速惡化者予停藥或換藥。

兩名評(píng)分者不參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。在利培酮治療前對(duì)評(píng)分者進(jìn)行統(tǒng)一量表培訓(xùn)及一致性檢驗(yàn)，Kappa值為0.89。分別于治療前及治療8周后進(jìn)行PANSS量表評(píng)定，包括陽性癥狀分、陰性癥狀分、一般病理分和總分，以PANSS減分率 [(治療前評(píng)分-治療后評(píng)分)／(治療前評(píng)分-基線30分)×100%]作為療效評(píng)定指標(biāo)，減分率≥50%為有效，減分率 ＜ 50%為無效[3]。

1.2.2 基因分型 抽取肘靜脈血5 mL，使用外周血白細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒(北京天根生物科技有限公司，MD109)提取DNA，產(chǎn)物-20℃保存?zhèn)溆?。針?duì)CYP2D6／C188T基因多態(tài)性檢測(cè)，設(shè)計(jì)上游引物 5′-TCAACACAGCAGGTTCA-3′，下游引物 5′-CTGTGGTTTCACCCA CC-3′。 對(duì) DRD2 受體TaqIA基因多態(tài)性檢測(cè)，設(shè)計(jì)上游引物5′-CCGTCGACGGCTGGCCAAGTTTCTA-3′，下 游 引 物 5′-CGTCGACCCTTCC TG AGTGTCATCA-3′。PCR 總反應(yīng)體積均為25 μL，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，循環(huán)參數(shù)：95℃變性 30 s，56℃退火 45 s，72℃延伸1.5 min，共 35個(gè)循環(huán)，最后 72℃延伸 5 min，4℃終止。CYP2D6／C188T基因 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用10 UHphⅠ內(nèi)切酶酶切，DRD2TaqIA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用10UTaqⅠ內(nèi)切酶酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)照相，讀取基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。Hardy-Weinberg平衡法則對(duì)基因型頻率和等位基因頻率進(jìn)行吻合度檢驗(yàn)；組間頻率比較采用列聯(lián)表分析。應(yīng)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差與多因素方差分析分別比較臨床變量、PANSS分值和減分率在男女患者組間和基因型組間差異。所有方法均用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：α＝0.05。

表1 CYP2D6／C188T與DRD2 TaqIA在患者組和對(duì)照組的基因多態(tài)性分布及二者與利培酮療效(頻數(shù)／頻率)

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡法則的吻合度檢驗(yàn)正常對(duì)照組CYP2D6／C188T基因型和DRD2TaqIA基因型的觀察值和期望值吻合均良好(χ2＝0.45，df＝1，P ＞ 0.05)，符合 Hardy-Weinberg平衡法則。

2.2 患者組和對(duì)照組 CYP2D6／C188T和 DRD2 TaqIA基因多態(tài)性分布的比較 患者組和對(duì)照組CYP2D6／C188T的基因型和等位基因頻率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝23.16，df＝2，P＜0.05；χ2＝7.29，df＝1，P＜0.05)；DRD2TaqIA 的基因型和等位基因頻率的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝14.44，df＝2，P ＜ 0.05；χ2＝ 10.76，df＝ 1，P ＜ 0.05)(見表1)。

2.3 利培酮療效與CYP2D6／C188T基因多態(tài)性分布，DRD2TaqIA基因多態(tài)性分布 用 2×3列表χ2檢驗(yàn)分析精神分裂癥患者 CYP2D6／C188T多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布與利培酮療效，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝ 1.11，df＝ 2，P ＞ 0.05；χ2＝ 0.77，df＝ 1，P ＞ 0.05)(P ＞ 0.05)；DRD2TaqIA多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布與利培酮療效，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝0.63，df＝ 2，P ＞ 0.05；χ2＝ 0.43，df＝ 1，P ＞ 0.05)。

2.4 PANSS 減 分 率 與 CYP2D6／C188T、DRD2 TaqI及性別的關(guān)系 用多因素方差分析，發(fā)現(xiàn)：CYP2D6／C188T和DRD2 TaqI的交互作用對(duì)PANSS減分率的影響差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F＝0.735，P ＞ 0.05)，而 CYP2D6／C188T、DRD2TaqIA，性別三者的交互作用對(duì)PANSS減分率的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F＝3.214，P＜0.05)(見表2)。

3 討論

CYP2D6是一種重要的P450系氧化代謝酶，位于第22號(hào)染色體(22q13.1)?；蛐蜎Q定表型，表型決定酶的代謝活性。CYP2D6／C188T是日本人、中國人、韓國人常見的突變型等位基因，即使同一種族的不同民族CYP2D6的活性也存在顯著差異。代謝酶活性的改變能夠直接通過影響藥物代謝速度改變藥物體內(nèi)濃度，從而影響藥物療效。利培酮的在人體內(nèi)的主要活性成分是9-羥利培酮，很多研究表明影響CYP2D6活性的遺傳多態(tài)性與9-羥利培酮的血藥濃度相關(guān)[4]，但是這些多態(tài)性在利培酮療效中的作用研究結(jié)果并不一致。本文對(duì)漢族首發(fā)精神分裂癥患者的研究顯示，對(duì)于利培酮療效，CYP2D6／C188T多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不支持該位點(diǎn)的基因多態(tài)性與利培酮的臨床療效存在相關(guān)性，這也印證了代謝酶不是影響影響藥物療效唯一因素。但黃頤[5]等人對(duì)52例精神分裂癥患者的研究顯示CYP2D6／C188T不同基因型患者PANSS 8周減分率存在顯著性差異。造成這些研究不一致的原因可能有以下幾點(diǎn)。首先是人群的不同，不同種族之間甚至同一種族不同亞群之間存在一定的遺傳異質(zhì)性，比如中國漢族南方人群和北方人群即存在著較大的遺傳差異，黃頤即是采用南方人群，與本研究不同；其次是與精神分裂癥的異質(zhì)性有關(guān)，精神分裂癥在DSM-IV中被分為5個(gè)亞型，不同的亞型很可能存在各自的生物學(xué)機(jī)制，本研究限定在偏執(zhí)型精神分裂癥，一定程度上避免了表型異質(zhì)性，提高了發(fā)現(xiàn)基因與疾病關(guān)聯(lián)的效率，但同時(shí)也是造成與其它研究不一致的原因之一；第三種可能性就是樣本量的問題，早期的研究由于種種原因樣本量較少，統(tǒng)計(jì)學(xué)效率不夠。

表2 不同影響因素對(duì)PANSS減分率影響的分析

抗精神病藥物對(duì)DRD2的阻斷被認(rèn)為是治療精神病的主要機(jī)制，一些研究表明DRD2基因突變可能影響到抗精神病藥的療效[6，7]。 本研究結(jié)果顯示DRD2 TaqIA多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布在利培酮療效上得差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不支持DRD2 TaqIA的基因多態(tài)性與利培酮的臨床療效存在相關(guān)性，與仲照希等[8]的研究結(jié)果相一致，Vehof等[9]對(duì)329例高加索患者的分析也沒有發(fā)現(xiàn)TaqIA多態(tài)性與奧氮平和利培酮的相關(guān)。而Zhang等[10]對(duì)100例男性患者為期6個(gè)月的觀察顯示DRD2-141C Del多態(tài)性是性激素紊亂的保護(hù)因素。 Kapur等[11]人的研究顯示DRD2 TaqIA不同基因型與利培酮臨床療效之間存在關(guān)聯(lián)，這可能是由于種族不同造成的，更大樣本量的研究也可能提供更充足統(tǒng)計(jì)資料的以檢出微小遺傳效應(yīng)，在本研究基礎(chǔ)上擴(kuò)大樣本量增加觀測(cè)隨訪時(shí)間可能會(huì)帶來新的信息。

研究發(fā)現(xiàn) CYP2D6／C188T與 DRD2 TaqI基因多態(tài)性及性別三者作為單一影響因素時(shí)與利培酮的臨床效應(yīng)不存在相關(guān)性，但性別作為協(xié)變量時(shí)，CYP2D6／C188T與 DRD2 TaqIA的交互作用對(duì)PANSS減分率的影響差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明三者的共同作用對(duì)利培酮臨床療效存在影響。在試驗(yàn)初始階段我們對(duì)性別之間的差異進(jìn)行了檢驗(yàn)，雖然結(jié)果為無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在實(shí)驗(yàn)過程中，男女對(duì)藥物產(chǎn)生的生理反應(yīng)卻無法避免。這種非遺傳因素導(dǎo)致藥物反應(yīng)的個(gè)體差異，可能對(duì)大多數(shù)關(guān)聯(lián)研究產(chǎn)生干擾。同時(shí)，藥物基因組學(xué)認(rèn)為影響藥物療效的因素包括遺傳因素和非遺傳因素，二者的關(guān)系可能不是獨(dú)立的兩個(gè)方面，而是相互作用，相互影響。

雖然本實(shí)驗(yàn)結(jié)論是CPY2D6與DRD2的基因多態(tài)性及二者之間的交互作用對(duì)利培酮療效的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是精神分裂癥本身的復(fù)雜性和異質(zhì)性，以及研究樣本量偏小等因素的存在，仍不能排除CPY2D6與DRD2的基因多態(tài)性對(duì)利培酮的臨床療效是存在影響的。因此結(jié)果需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。

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