紫外分光光度法測定纈草中總纈草素類成分的含量

羅喜榮 苑天紅 楊軍 余德順

摘要：采用紫外分光光度法測定纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）中總纈草素的含量。結(jié)果表明，纈草素在５～２５ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)，其濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系（ｒ＝０．９９９ ８），該方法回收率為９８．９４％～１０１．０７％，準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于纈草中總纈草素含量的測定。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）；總纈草素

中圖分類號：Ｒ２８４．１文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）18－4111-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ oｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｂｙ ＵＶ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＬＵＯ Ｘｉ－ｒｏｎｇ１，ＹＵＡＮ Ｔｉａｎ－ｈｏｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｊｕｎ２，ＹＵ Ｄｅ－ｓｈｕｎ２

（１．Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ University， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ sｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ revealed a ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５～２５ μｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ８）． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ rate ｗａｓ ９８．９４％～１０１．０７％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ waｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Vａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ

纈草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）為敗醬科纈草屬，多生于海拔８００～２ ５００ ｍ的山坡草地和林下，是一種多年生耐寒開花植物，分布于中國西南及東北地區(qū)，具有鎮(zhèn)靜催眠、神經(jīng)保護(hù)、保護(hù)腎臟、調(diào)節(jié)循環(huán)系統(tǒng)、抗抑郁和抗腫瘤等藥理活性［１］。纈草素類成分（Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ）是纈草的主要活性成分，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗焦慮、抗病毒、抗胃癌、解痙和舒張血管等藥理作用［２－７］。纈草化學(xué)成分復(fù)雜，不同來源纈草有效成分組成和含量均有差異，目前纈草中纈草素類成分含量的測定方法有ＨＰＬＣ法和電位滴定法［８，９］，這類方法通常操作復(fù)雜，分析成本高。本試驗采用紫外分光光度法測定纈草藥材中總纈草素含量，旨在為建立纈草素快速分析方法提供參考。

１材料與方法

１．１材料

纈草采自貴州某地，粉碎后過６０目篩，待用。

纈草素標(biāo)準(zhǔn)品（四川維克奇生物科技公司）；分析純甲醇和乙酸乙酯。

１．２儀器

Ｔ６新世紀(jì)紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、ＫＱ５２００超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

１．３方法

１．３．１標(biāo)準(zhǔn)品制備稱取適量纈草素，用甲醇配制成１００ μｇ／ｍＬ的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別取不同體積（０．２５～１．２５ ｍＬ）的纈草素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于５ ｍＬ比色管中，用甲醇定容至刻度，搖勻，配制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

１．３．２樣品制備準(zhǔn)確稱取纈草粉０．５ ｇ于具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯５０ ｍＬ，浸泡２４ ｈ后，超聲提取４０ ｍｉｎ，過濾，用乙酸乙酯定容至５０ ｍＬ，取濾液０．２ ｍＬ揮干，用甲醇溶解后定容于５ ｍＬ比色管中。

１．３．３測定以甲醇作空白試劑，在最大吸收波長處測定標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度，繪制工作曲線，以相同條件測定樣品液吸光度，計算樣品中的含量。

２結(jié)果與分析

２．１測定波長的選擇

在２００～４００ ｎｍ范圍內(nèi)分別掃描纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液，由圖１可知纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液在２５６ ｎｍ處有最大吸收，故選擇測定波長為２５６ ｎｍ。

２．２工作曲線

按試驗方法繪制纈草素的工作曲線，結(jié)果表明吸光度Ａ與纈草素濃度Ｃ在５～２５ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為Ａ＝０．０３８ ３ Ｃ＋０．００４ ２，ｒ＝０．９９９ ８。

２．３精密度

取樣品溶液按試驗方法重復(fù)測定６次，結(jié)果吸光度的ＲＳＤ為０．０８％，表明儀器精密度良好。

２．４穩(wěn)定性

取樣品溶液按試驗方法在５ ｈ內(nèi)每隔１ ｈ測定１次，結(jié)果吸光度的ＲＳＤ為１．９３％，表明樣品溶液在５ ｈ內(nèi)穩(wěn)定性良好。

２．５重復(fù)性

取同一樣品溶液按試驗方法平行測定６次，結(jié)果其總纈草素含量的ＲＳＤ為１．９６％，表明方法重現(xiàn)性良好。

２．６回收率

為驗證試驗的準(zhǔn)確性，在樣品溶液中加入纈草素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收試驗并計算回收率，由表１可知加樣回收率為９８．９４％～１０１．０７％，試驗結(jié)果準(zhǔn)確度高，符合分析要求。

２．７樣品測定結(jié)果

取貴州不同產(chǎn)地纈草藥材按試驗方法測定樣品中總纈草素含量，結(jié)果見表２。

３討論

纈草素是構(gòu)成纈草療效的有效成分，也是各種纈草共有的特征化合物［８］，纈草素、乙酰纈草素和異纈草素均在２５６ ｎｍ處有最大吸收。以纈草素為對照品，應(yīng)用紫外分光光度法測定纈草中總纈草素的含量，方法學(xué)的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率結(jié)果都較滿意，具有簡便易行、結(jié)果穩(wěn)定可靠、分析費用低等優(yōu)點，可作為測定纈草中總纈草素含量的一種方法。

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（責(zé)任編輯周有祥）

收稿日期：２０１２－０７－０２

基金項目：貴州省科技基金項目［黔科合Ｊ字（２０１１）２２８８號］，貴州省中藥現(xiàn)代專項項目［黔科合ＺＹ字（２０１２）３０１０號］

作者簡介：羅喜榮（１９７３－），女，貴州松桃人，副教授，碩士，主要從事天然藥物化學(xué)研究，（電話）０８５１－６９０８５６８（電子信箱）ｌｕｏｘｉｒｏｎｇｙｊ＠１２６．ｃｏｍ；

通訊作者，楊軍（１９７２－），男，副研究員，主要從事天然藥物化學(xué)研究，（電話）１３９８４０１０１９２（電子信箱）ｙｊｓｆｅ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。