質(zhì)粒
- 大腸桿菌必需基因的CRISPR-Cas9敲除策略及高效質(zhì)粒置換方法
[5]報道了一種質(zhì)粒改組的酵母必需基因編輯方法。將待編輯的必需基因yfeg克隆至回補質(zhì)粒并使用URA3作為選擇標(biāo)記。在含有5-氟乳清酸的平板培養(yǎng)時,可篩選出無回補質(zhì)粒的基因編輯菌株。該方法可以實現(xiàn)對必需基因的功能表征,但是選擇標(biāo)記篩選方法也可能使細(xì)胞發(fā)生突變進(jìn)行逃逸。CRISPR/Cas9作為第三代基因編輯技術(shù),自問世以來就廣泛用于細(xì)胞基因組的編輯[6-7]。Cas9可在向?qū)NA(sgRNA)的靶向作用下被引導(dǎo)至目標(biāo)基因靶點位置進(jìn)行切割產(chǎn)生雙鏈斷裂,誘導(dǎo)
食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年18期2023-10-09
- 新疆牛羊源金黃色葡萄球菌D353質(zhì)粒pD353序列分析
言【研究意義】質(zhì)粒是染色體外的遺傳物質(zhì),攜帶遺傳信息,并能夠通過接合的方式有效進(jìn)行遺傳信息的水平轉(zhuǎn)移,進(jìn)而增強細(xì)菌對不同環(huán)境的適應(yīng)能力[1]。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)及耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(Vancomycin resistantStaphylococcusaureus,VRSA)的出現(xiàn)是有危害的。在當(dāng)前具有感染性的金黃色葡萄球菌菌株中,抗生素的耐藥性通常
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年7期2023-07-28
- 質(zhì)粒DNA實驗室規(guī)?；苽涔に?/a>
239000細(xì)菌質(zhì)粒DNA（plasmid DNA，pDNA）通常是小的（平均80 kb）環(huán)狀染色體外DNA元件，以游離形式持續(xù)穩(wěn)定地存在于染色體外，能夠通過招募宿主細(xì)胞機制進(jìn)行半自主復(fù)制，可攜帶有助于宿主適應(yīng)新環(huán)境的基因或編碼特異性功能的基因。質(zhì)粒作為載體應(yīng)用于基因治療領(lǐng)域具有兩大優(yōu)勢：（1）基因轉(zhuǎn)移過程中，質(zhì)粒載體具有低毒性、低免疫原性，可耐受核酸酶且轉(zhuǎn)移效率與遺傳物質(zhì)大小無關(guān)［1］；（2）在基因編輯時，質(zhì)粒可作為編輯工具CRISPR/Cas9系統(tǒng)表達(dá)
山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)學(xué)報 2023年3期2023-05-05
- 基因工程中載體概述
，克隆載體可分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體載體等。1 質(zhì)粒載體質(zhì)粒（Plasmid）是人們廣泛應(yīng)用的克隆載體。它是細(xì)菌和真菌等細(xì)胞內(nèi)獨立存在的一種環(huán)狀DNA分子。幾乎所有的質(zhì)粒都帶有一個或多個基因。質(zhì)粒不影響宿主細(xì)胞的生存，但其帶有特殊功能的基因可以賦予宿主細(xì)胞某些抵御外界不利環(huán)境因素的特性。1.1 質(zhì)粒的生物學(xué)特性1.1.1 質(zhì)粒的復(fù)制幾乎所有的質(zhì)粒都含有復(fù)制起點。質(zhì)粒侵染宿主細(xì)胞后，不同質(zhì)粒復(fù)制的方式不同。根據(jù)是否攜帶一套促進(jìn)DNA轉(zhuǎn)移
中學(xué)生物學(xué) 2022年8期2022-10-13
- 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的“Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)”的簡介
——一道江蘇高考題的奧秘解讀和拓展
用轉(zhuǎn)移法，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，再與Ti質(zhì)粒重組為共整合載體，然后轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。共整合載體是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化載體系統(tǒng)中的一種。這與高中教材介紹的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不一樣，人教版高中教材介紹的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T－DNA中構(gòu)成重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，將目的基因插入到植物細(xì)胞染色體DNA中，其過程如圖2所示。圖2 人教版教材中所示的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法高中教材介紹的僅是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的思路，并不是具體操作步
中學(xué)生物學(xué) 2022年7期2022-09-07
- 全基因組測序后質(zhì)粒的組裝與鑒定研究進(jìn)展*
的方法無法獲得的質(zhì)粒可由WGS數(shù)據(jù)進(jìn)行組裝，但組裝質(zhì)粒的正確性和完整性需要進(jìn)一步鑒定和分析。從WGS中準(zhǔn)確識別染色體序列和質(zhì)粒序列是質(zhì)粒鑒定分析的先決條件[6]。WGS可獲得高質(zhì)量的質(zhì)粒序列，但很多組裝質(zhì)粒并不一定真實存在，質(zhì)粒的組裝仍存在較多問題，且尚未被解決，需改良WGS后的組裝。本文對WGS技術(shù)的發(fā)展、WGS后質(zhì)粒的組裝、質(zhì)粒的鑒定及質(zhì)粒組裝中存在的問題進(jìn)行綜述。1 WGS的發(fā)展第一代測序技術(shù)以Sanger等[1]提出的鏈終止法及Maxam等[7]提
成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2022年4期2022-08-19
- 質(zhì)粒介導(dǎo)的印第安納沙門氏菌耐藥機制及分子溯源研究
也可以存在于細(xì)菌質(zhì)粒上。質(zhì)粒是在多數(shù)G-細(xì)菌中廣泛存在的一種染色體外的遺傳因子，質(zhì)粒特性使細(xì)菌更易獲得抗生素耐藥性、增強細(xì)菌的致病性、代謝能力等多種特性[4]，并具增強細(xì)菌耐藥基因傳播能力。耐藥I類整合子、轉(zhuǎn)座子Tn3、TnsA、插入序列IS26、IS91作為細(xì)菌中存在的重要可移動元件，可對外源基因進(jìn)行捕獲和表達(dá)(尤其是存在于質(zhì)粒上的整合子及移動元件)[5-6]。盛煥精等[7]通過質(zhì)粒接合的實驗說明菌株攜帶的質(zhì)粒類型和相應(yīng)的耐藥表型存在關(guān)聯(lián)，并且耐藥基因可
中國人獸共患病學(xué)報 2022年7期2022-08-11
- 糞腸球菌內(nèi)源性質(zhì)粒的序列分析及其穿梭載體的構(gòu)建
點[7?11]。質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞中染色體之外，能夠自主復(fù)制的共價閉合環(huán)狀雙螺旋的DNA分子或遺傳因子。已有研究表明，乳酸菌可攜帶數(shù)個質(zhì)粒，大小不一，其中多數(shù)質(zhì)粒為隱蔽性質(zhì)粒，少數(shù)質(zhì)粒則具有某些特殊功能[12]。乳酸菌的一些特性與其所攜帶的質(zhì)粒相關(guān)，并且這些特性可以通過質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)移至其他乳酸菌或其他細(xì)菌中[13]。目前已有許多研究對乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒進(jìn)行序列測定和功能分析，并利用乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒上重要元件構(gòu)建乳酸菌載體，其中獲得乳酸菌內(nèi)源性質(zhì)粒的復(fù)制子是構(gòu)建乳酸
食品工業(yè)科技 2021年23期2021-12-16
- 一種優(yōu)化的提高質(zhì)粒產(chǎn)量的提取方法
130021)質(zhì)粒(plasmid)是廣泛存在于生物界的環(huán)狀雙鏈DNA分子[1]。質(zhì)粒DNA作為最基本的基因載體工具，在分子生物學(xué)、生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)等學(xué)科中得到廣泛的應(yīng)用[2]。質(zhì)粒載體含有3個共同的結(jié)構(gòu)：復(fù)制子，選擇性標(biāo)志和克隆位點，它們在質(zhì)粒的表達(dá)與復(fù)制中發(fā)揮重要作用[3]。人們通過在質(zhì)粒中插入目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒，使目的基因在動物模型中表達(dá)，可以研究動物的生長發(fā)育、疾病發(fā)生等情況，如P53基因在犬乳腺惡性腫瘤中高表達(dá)[4]，VIPR-1基因在
畜牧與獸醫(yī) 2021年11期2021-11-11
- 轉(zhuǎn)錄因子E2F1 及其突變體真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的建立
建了真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pFlag-E2F1 及其DNA 結(jié)合功能域突變體質(zhì)粒pFlag-E2F1E132，并進(jìn)一步獲得了與之對應(yīng)的穩(wěn)篩細(xì)胞株。這些細(xì)胞株對E2F1 的關(guān)鍵下游靶基因的篩選具有重要意義。1 材料與方法1.1 材料HeLa 細(xì)胞和pFlag 真核細(xì)胞表達(dá)載體由天津師范大學(xué)分子細(xì)胞系統(tǒng)生物學(xué)重點實驗室提供；pCMV-E2F1 表達(dá)質(zhì)粒由中國科學(xué)院水生生物研究所生物多樣性與水生生物保護(hù)重點實驗室饋贈。1.2 試劑與儀器胎牛血清、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，B
生物化工 2021年3期2021-07-10
- 生殖道衣原體質(zhì)粒功能的研究進(jìn)展
要的毒力物質(zhì)——質(zhì)粒[5]。質(zhì)粒除了與衣原體的毒力和致病性有關(guān)外，還對衣原體自身生長代謝、誘導(dǎo)機體免疫應(yīng)答作用均具有影響。本文對生殖道衣原體質(zhì)粒的主要功能及其潛在應(yīng)用價值作一概述。1 衣原體質(zhì)粒的基本特征質(zhì)粒是細(xì)菌中除染色體DNA外能自主復(fù)制的DNA分子。衣原體的質(zhì)粒為環(huán)狀雙鏈DNA，大小約為7.5 kb，存在于染色體外，質(zhì)粒在衣原體RB二分裂階段能達(dá)到最多拷貝數(shù)，以便將質(zhì)粒有效分配于子代衣原體中[6]。生殖道衣原體為非接合性質(zhì)粒，不編碼衣原體抗生素耐藥性
中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志 2021年3期2021-06-02
- 單增李斯特菌質(zhì)粒研究進(jìn)展
力，單增李斯特菌質(zhì)粒與其抗逆性有關(guān)。質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外具有遺傳功能的DNA，非細(xì)菌生長代謝的必需元件，在輔助宿主菌的生存和適應(yīng)中發(fā)揮重要作用。質(zhì)粒可介導(dǎo)細(xì)菌間遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，使受體菌獲得供體菌的選擇性優(yōu)勢，如抗逆性、毒力、耐藥等。上世紀(jì)80年代，Perez-Diaz等[3]首次報道了單增李斯特菌質(zhì)粒，后來的研究發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒在單增李斯特菌中分布廣泛，并發(fā)揮一定的生物學(xué)功能。本文將對單增李斯特菌質(zhì)粒的分類、分布以及生物學(xué)特性等研究進(jìn)展進(jìn)行概述。1 單增李斯特菌質(zhì)粒
中國人獸共患病學(xué)報 2021年4期2021-05-06
- mcr-1陽性類噬菌體質(zhì)粒與F33∶A-∶B-質(zhì)粒共整合形成的融合質(zhì)粒的生物學(xué)特性分析
3∶A-∶B-型質(zhì)粒是多重耐藥質(zhì)粒IncF型質(zhì)粒中最為流行的亞型之一,它廣泛存在于腸桿菌科細(xì)菌,尤其是大腸桿菌中,是介導(dǎo)fosA3、blaCTX-Ms和rmtB等耐藥基因快速傳播的主要載體[1-3]。F33∶A-∶B-型質(zhì)粒除了能夠借助IS26和IS1294元件捕獲和傳播抗性基因外,還能夠獲得IncN1、IncI1、IncR和IncX1型質(zhì)粒的一些片段成為多復(fù)制子質(zhì)粒[3]。本課題組在研究豬源大腸桿菌中mcr-1的水平轉(zhuǎn)移能力時,首次發(fā)現(xiàn)在接合過程中,F3
江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2021年4期2021-04-20
- 多變魚腥藻ATCC 29413基因的一步插入失活
轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中的輔助質(zhì)粒pRL623上缺少甲基化酶M.AvrⅡ基因,可能與難以構(gòu)建多變魚腥藻突變株有關(guān)[12,13]。為了克服藻株的限制酶對外源DNA的破壞,本研究克隆了該藻株自身的兩個甲基化酶基因,構(gòu)建了新的輔助質(zhì)粒。利用該質(zhì)粒對多變魚腥藻ATCC 29413兩個基因進(jìn)行了插入失活,均實現(xiàn)了一步獲得同源雙交換子,比通常在絲狀藍(lán)藻敲除基因節(jié)省一半時間。1 材料與方法1.1 藻種、菌種及培養(yǎng)方法多變魚腥藻ATCC 29413高溫衍生株由美國南達(dá)科塔州州立大學(xué)周阮
水生生物學(xué)報 2021年1期2021-02-04
- 103個mcr質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與特征
檢測到一種新的由質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1[8]。攜帶mcr-1基因的質(zhì)粒具有接合轉(zhuǎn)移能力，有助于黏菌素耐藥性穩(wěn)定持久的傳播。隨后，許多國家陸續(xù)報道了攜帶mcr-1基因質(zhì)粒的革蘭氏陰性菌，這些菌對公眾健康造成了重大威脅[10-16]。目前質(zhì)粒的報道主要集中在質(zhì)粒草圖水平上，側(cè)重于mcr基因的基因環(huán)境分析，質(zhì)粒的完成圖報道占比相對較少[17]。近年來，黏菌素在畜禽養(yǎng)殖中作為促生長藥物被禁用[18]，動物源細(xì)菌對黏菌素的耐藥率隨之持續(xù)下降，但是耐藥率仍
浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報 2021年1期2021-01-28
- IncI1和IncN質(zhì)粒陽性沙門氏菌耐藥及質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移特征
危害[6-7]。質(zhì)粒是獨立于染色體外、可自主復(fù)制、通常攜帶多種抗性和毒力基因的閉合環(huán)狀雙鏈DNA，質(zhì)粒的存在可使宿主菌產(chǎn)生耐藥性和致病性等附加特性[8]。其中，接合質(zhì)粒是一種與耐藥基因水平傳遞和細(xì)菌耐藥性獲得的重要可移動元件[9]。在眾多質(zhì)粒中，IncI1型質(zhì)粒有助于blaCTX-M-1基因在禽類和人之間散播[10]，IncN型質(zhì)粒已被歐洲多個國家的研究者報道攜帶blaCTX-M-1基因[11-12]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)IncI1質(zhì)粒有時還可與IncN質(zhì)粒共
食品科學(xué) 2020年18期2020-09-17
- 優(yōu)化大腸桿菌CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)及應(yīng)用
不同之處前者是單質(zhì)粒編輯系統(tǒng)，后者是雙質(zhì)粒編輯系統(tǒng)。單質(zhì)粒編輯系統(tǒng)[10]將Cas9，gRNA和供體DNA構(gòu)建在同一個表達(dá)載體上，在遺傳操作過程中，只需一輪質(zhì)粒轉(zhuǎn)化就能實現(xiàn)對基因組的編輯。但單質(zhì)粒由于本身骨架片段較大，可插入的供體DNA大小受限，質(zhì)粒構(gòu)建會有一定的難度。雙質(zhì)粒編輯系統(tǒng)可以解決單質(zhì)粒構(gòu)建困難的問題，將Cas9，Red構(gòu)建在一個質(zhì)粒上，將目標(biāo)N20-gRNA, 供體DNA片段構(gòu)建在另一個質(zhì)粒上，利用這個雙質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)，大腸桿菌
生物學(xué)雜志 2020年4期2020-08-19
- 開發(fā)新方法追蹤植物病害的全球傳播（2020.6.7 iPlants）
質(zhì)粒是可自主復(fù)制的非必需DNA分子，可加速許多重要的細(xì)菌的進(jìn)化。例如，質(zhì)粒傳播抗生素抗性基因，這是人類和動物健康的緊迫問題。農(nóng)桿菌獲得致瘤的Ti質(zhì)粒或根誘導(dǎo)（Ri）質(zhì)粒后，將其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蜻z傳轉(zhuǎn)化并引起多種植物疾病的病原體。因此，對質(zhì)粒進(jìn)行進(jìn)化關(guān)系分類，準(zhǔn)確評估質(zhì)粒對疾病暴發(fā)的影響，制定緩解疾病的策略以及加快利用質(zhì)粒多樣性進(jìn)行生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)。但是，之前認(rèn)為質(zhì)粒過于多樣化且能平行轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致無法分類。2020年6月6日，Science雜志在線發(fā)表了美國俄勒岡
三農(nóng)資訊半月報 2020年11期2020-06-21
- 嗜水氣單胞菌穿梭質(zhì)粒載體p BKPU01的構(gòu)建、表達(dá)和鑒定
要原因是含有多種質(zhì)粒［4］。本實驗室從嗜水氣單胞菌中分離得到一種質(zhì)粒，命名為質(zhì)粒pBK760，該質(zhì)粒具有多種位點和抗性，具有良好的載體特征。pMD20是一種高效克隆PCR產(chǎn)物的專用載體［5］。該載體以pUC19載體為基礎(chǔ)，在其多克隆位點處的Xba I和BamH I位點之間增加了Spe I，Nde I，EcoRV3種酶切位點，經(jīng)EcoR V酶切后再在兩側(cè)的3’端添加“T”制備而成［6］。因大部分耐熱性DNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng)時都有在PCR產(chǎn)物的3’端添加一
江蘇科技信息 2020年1期2020-03-18
- 植物乳桿菌內(nèi)源性質(zhì)粒序列分析及其表達(dá)載體的構(gòu)建
酸桿菌攜帶有數(shù)個質(zhì)粒，大小不一，其中多數(shù)質(zhì)粒為隱蔽性質(zhì)粒，少數(shù)質(zhì)粒具有某些特殊功能[7]。目前，已有許多乳桿菌質(zhì)粒被測序，并用于構(gòu)建質(zhì)粒載體，如副干酪乳桿菌的質(zhì)粒pCD01和pCD02[8]、干酪乳桿菌的質(zhì)粒pLC494[9]和pMC11[10]、植物乳桿菌質(zhì)粒pD403[11]和pM4[12]等。乳酸桿菌質(zhì)粒復(fù)制方式為滾環(huán)復(fù)制和θ復(fù)制，通常較小的質(zhì)粒（＜12 kb）通過滾環(huán)方式進(jìn)行復(fù)制[13]。通過對乳酸菌質(zhì)粒的測序、分析，得到乳酸菌質(zhì)粒的復(fù)制子是構(gòu)建質(zhì)
食品科學(xué) 2020年4期2020-03-11
- 以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的同源重組技術(shù)在葡萄球菌基因敲除中的應(yīng)用
]，即選擇合適的質(zhì)粒，將靶基因兩側(cè)的同源序列克隆至載體上，轉(zhuǎn)入宿主菌后通過同源重組實現(xiàn)對靶基因的置換敲除。由于微生物的多樣性，將外源DNA導(dǎo)入宿主菌并完成同源重組的策略也千差萬別。目前，未見有適合于多種宿主菌基因敲除的通用重組系統(tǒng)的報道。因此，需要根據(jù)宿主菌的特點來構(gòu)建相對特異的基因敲除系統(tǒng)，用于基因功能研究。葡萄球菌屬(Staphylococcusspp.)是引起醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌[3-5]，由于其GC含量較低(mol%約28%～35%)，通過同源重
中國人獸共患病學(xué)報 2019年7期2019-08-07
- 微滴數(shù)字PCR檢測含有目的基因的PUC57質(zhì)粒問題分析
7]。PUC57質(zhì)粒是大腸桿菌載體含有2 710 bp。本實驗利用ddPCR檢測含有目的基因的PUC57質(zhì)粒，對檢測過程中出現(xiàn)的酶切、酶切孵育時間和酶切后放置天數(shù)的問題進(jìn)行了探討，為同行提供參考。1 材料與方法1.1材料 根據(jù)GenBank中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的序列，經(jīng)過序列比對分析，針對HBV DNA保守區(qū)設(shè)計引物和探針，用引物擴增的那段目的基因片段(95 bp)構(gòu)建PUC57質(zhì)粒，質(zhì)粒的構(gòu)建由上海生工生物工程有限公司完成。質(zhì)粒含有2 80
國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志 2019年6期2019-03-26
- 中草藥對細(xì)菌耐藥質(zhì)粒的消除作用研究
藥性能夠通過耐藥質(zhì)粒介導(dǎo)，由一種微生物轉(zhuǎn)移到另一種微生物［2-3］；此外，耐藥質(zhì)粒攜帶的多種耐藥標(biāo)記，也可經(jīng)由菌株間的接合而相互傳遞［4］，從而引起細(xì)菌對新的抗生素藥物產(chǎn)生耐藥性，最終導(dǎo)致菌株的多重耐藥性和多重耐藥菌株的出現(xiàn)［5］，這促使研究者加快研究耐藥性質(zhì)粒消除的步伐。大腸桿菌等耐藥菌株在臨床上有逐年增多的趨勢，且耐藥性變遷的速度極快，另外，該菌的生長、繁殖速度快，耐藥質(zhì)粒復(fù)制時能夠隨著遺傳物質(zhì)復(fù)制，使交叉耐藥菌株不斷出現(xiàn)，耐藥譜變寬。因此，要使細(xì)菌性
中國獸藥雜志 2018年11期2018-12-15
- 豬帶絳蟲TSOL18基因重組乳球菌疫苗的穩(wěn)定性分析
擬將豬帶絳蟲重組質(zhì)粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18電穿孔轉(zhuǎn)化入L.lactisMG1363，分別在無紅霉素抗性和含紅霉素抗性條件下連續(xù)人工傳代20次，通過測定質(zhì)粒穩(wěn)定率和SacI/HindIII雙酶切鑒定，測定質(zhì)粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的遺傳穩(wěn)定性。1 材料與方法1.1 材料1.1.1質(zhì)粒與菌種 重組質(zhì)粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18、由本
中國人獸共患病學(xué)報 2018年11期2018-12-13
- 植物乳桿菌野生質(zhì)粒分析及其提取方法的優(yōu)化
存在大量的野生型質(zhì)粒，能夠表達(dá)和遺傳如代謝、抗性相關(guān)的基因，因此，挖掘高拷貝、穩(wěn)定復(fù)制的野生型質(zhì)粒元件和無質(zhì)粒受體菌是構(gòu)建細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的關(guān)鍵［4］。由于乳酸菌為革蘭氏陽性菌，且部分野生型質(zhì)粒拷貝數(shù)低，因此使用傳統(tǒng)堿裂解法或普通質(zhì)粒提取試劑盒提取效果并不理想［4-5］。目前，乳酸菌質(zhì)粒提取方法已有多個報道，但操作均過于復(fù)雜、周期長、毒性大、質(zhì)粒產(chǎn)量低且多數(shù)只適合對數(shù)期乳酸球菌［6-9］，因此，該試驗對比研究已報道的兩種常規(guī)方法和優(yōu)化后的方法，最終得到可應(yīng)用于
畜牧與飼料科學(xué) 2018年11期2018-12-10
- 沉默結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因KPNA2對卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和順鉑敏感性的影響及其機制
gfp-s3重組質(zhì)粒以及空質(zhì)粒pSUPER-Egfp-neo購于上海北諾生物科技有限公司；兔抗人KPNA2單克隆抗體、兔抗人Erk1/2和p-Erk1/2多克隆抗體、兔抗人Caspase-3、活化后Caspase-3單克隆抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；ECL顯色試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒、Transwell小室購于北京科宇深藍(lán)科技有限公司。1.2 方法1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、分組與轉(zhuǎn)染 CAOV3細(xì)胞放入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，CO2孵箱
山東醫(yī)藥 2018年35期2018-10-26
- 大腸桿菌-鴨疫里默氏桿菌高效穿梭質(zhì)粒pFY02的構(gòu)建和應(yīng)用
失基因克隆至穿梭質(zhì)粒進(jìn)行功能回補驗證。在我們之前的研究中，構(gòu)建了能夠用于鴨疫里默氏桿菌基因回補的穿梭質(zhì)粒pLMF03[15]，然而該質(zhì)粒所包含酶切位點較少，接合轉(zhuǎn)移效率低下，不能滿足所有鴨疫里默氏桿菌基因的回補。為解決這一缺陷，本研究構(gòu)建了結(jié)合轉(zhuǎn)移效率高，能穩(wěn)定存在于鴨疫里默氏桿菌中且能用于鴨疫里默氏桿菌基因回補的穿梭質(zhì)粒pFY02。1 材料與方法1.1 菌株及試劑質(zhì)粒 pPM5由比利時那慕爾大學(xué) Guy R.Cornelis教授惠贈[16]。質(zhì)粒 pEX
生物工程學(xué)報 2018年10期2018-10-25
- 短乳桿菌天然質(zhì)粒分類
個短乳桿菌天然質(zhì)粒基因組序列，從質(zhì)粒大小、數(shù)量和復(fù)制類型而言，短乳桿菌是乳桿菌屬中攜帶天然質(zhì)粒最豐富的菌種之一[7]，這一現(xiàn)象表明，質(zhì)粒在短乳桿菌生長、代謝、遺傳和進(jìn)化等生物學(xué)過程中可能扮演著特殊且重要的角色，此外，眾多天然質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)和測定為短乳桿菌基因工程改造和生物技術(shù)應(yīng)用提供了必要的研究和材料基礎(chǔ)。然而，目前對短乳桿菌天然質(zhì)粒的了解和研究比較有限，現(xiàn)有研究主要集中于載體構(gòu)建[8-10]和特殊功能質(zhì)粒[11-12]。本研究以短乳桿菌天然質(zhì)粒為研究對象，
食品科學(xué) 2018年10期2018-05-23
- 一株食竇魏斯氏菌的分離鑒定及其質(zhì)粒的序列分析
功能都與其攜帶的質(zhì)粒相關(guān),如產(chǎn)胞外多糖、產(chǎn)細(xì)菌素、抗生素抗性等[9]。因此對質(zhì)粒生物學(xué)和遺傳學(xué)的研究受到了極大關(guān)注。許多魏斯氏菌擁有一個或多個天然質(zhì)粒,但是相對于乳桿菌屬、乳球菌屬、腸球菌屬等質(zhì)粒,對魏斯氏菌質(zhì)粒研究較少[9-10]。Park[11]、金紅星[12]、Kim[13]等分別從食竇魏斯氏菌(Weissellacibaria)分別分離出3、2、6個質(zhì)粒,王海娟等[14]從融合魏斯氏菌(Weissellaconfusa)中分離出了2個質(zhì)粒,并對部分
食品工業(yè)科技 2018年8期2018-05-01
- 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、提取及酶切分析
●黃靜質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、提取及酶切分析●黃靜目的：構(gòu)建人Bcl-2基因原核表達(dá)載體，并對其酶切鑒定。方法：將Bcl-2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入經(jīng)CaCl2法制備的大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，篩選培養(yǎng)充分克隆，然后用堿裂解法分離提取重組質(zhì)粒DNA，最后用限制性內(nèi)切酶酶切重組質(zhì)粒DNA，并跑電泳鑒定。人Bcl-2基因；質(zhì)粒轉(zhuǎn)化；CaCl2法；質(zhì)粒提??；堿裂解法；酶切分析本研究介紹人Bcl-2重組質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化、分離提取和內(nèi)切酶酶切鑒定。1 材料與方法1.1 試劑不含
保健文匯 2017年6期2017-11-02
- 基于模型建構(gòu)的“基因工程”一節(jié)的高三復(fù)習(xí)教學(xué)設(shè)計
步驟，形成正確的質(zhì)粒選擇策略、限制酶選擇策略、質(zhì)粒標(biāo)記基因的運用策略，理解3種受體細(xì)胞的產(chǎn)生。2.2 過程與方法目標(biāo) 經(jīng)歷模擬活動，理解基因工程中的一些操作策略；參與探究活動，體驗科學(xué)發(fā)現(xiàn)、形成結(jié)論的過程；提高自主學(xué)習(xí)和合作探究的能力。2.3 情感態(tài)度與價值觀目標(biāo) 感受合作探究的樂趣，培養(yǎng)實事求是的精神。3 教學(xué)過程3.1 課前活動——基因工程中的“剪”和“粘”的練習(xí)準(zhǔn)備小組活動材料：DNA分子3個(圖1，紙質(zhì)，長度為A4紙高)，陰影部分示限制酶識別序列，
生物學(xué)教學(xué) 2017年3期2017-08-20
- 細(xì)菌中獲得并轉(zhuǎn)移耐藥基因—質(zhì)粒概述
并轉(zhuǎn)移耐藥基因—質(zhì)粒概述高淑娟 （山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000）細(xì)菌已在地球上存在了30億年左右，變得擅于保護(hù)自己免受有毒化學(xué)物質(zhì)的侵害。而抗生素在臨床上使用已有70多年，目前耐藥性問題成為了世界上嚴(yán)峻的問題之一，同時這也證明了細(xì)菌適應(yīng)能力之強及傳播速度之快。細(xì)菌的耐藥性機制有多種方式，包括：靶點保護(hù)，靶點替代，抗生素降解以及阻斷胞內(nèi)抗生素積累。耐藥性的獲得是在多種基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)協(xié)助下完成的，耐藥基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(如細(xì)菌接合質(zhì)粒，轉(zhuǎn)座元件和整合子系
山東畜牧獸醫(yī) 2017年9期2017-04-05
- 一個融合魏斯氏菌隱蔽質(zhì)粒的序列分析
融合魏斯氏菌隱蔽質(zhì)粒的序列分析王海娟1戴雨珂2蘇森森1王英3潘渠1（1. 成都醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，成都 610500；2. 成都醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系，成都 610500；3. 成都軍區(qū)總醫(yī)院腎內(nèi)科，成都 610500）從融合魏斯氏菌（Weissella confusa QJ012）中發(fā)現(xiàn)一個隱蔽質(zhì)粒（pQJ012），測序結(jié)果顯示該質(zhì)粒大小為1 489 bp，堿基G+C含量為42.8%。BLAST結(jié)果顯示該質(zhì)粒的核苷酸序列同pJY33和pKLCA的同源性分別
生物技術(shù)通報 2016年4期2016-06-13
- 質(zhì)粒抽提策略對雙酶切鑒定的影響
2］，而很少報道質(zhì)粒抽提策略對彌散的影響。筆者在雙酶切鑒定葡萄糖6-磷酸脫氫酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD)重組質(zhì)粒pET-28a-G6PD時，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒抽提策略對雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳彌散有顯著影響，現(xiàn)報道如下，以供參考。1 材料與方法1.1 質(zhì)粒與菌株含空質(zhì)粒 pET-28a的大腸桿菌 Top10(pET-28a/Top10)由本教研室保存。重組質(zhì)粒pET-28a-G6PD為筆者構(gòu)建并轉(zhuǎn)化至Top10感受
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2015年6期2015-12-16
- 產(chǎn)丙酮酸氧化酶重組大腸桿菌的發(fā)酵過程質(zhì)粒穩(wěn)定性研究
菌的發(fā)酵過程中，質(zhì)粒不穩(wěn)定性（Plasmid instability）是一個比較嚴(yán)重的問題，會導(dǎo)致目的產(chǎn)物水平的下降.在工業(yè)發(fā)酵過程中，對重組細(xì)胞要求質(zhì)粒穩(wěn)定性保持在25代以上[11].因此，研究重組細(xì)胞質(zhì)粒的穩(wěn)定性對于提高發(fā)酵效率有著十分重要的意義[12].從目前已有報道來看，影響質(zhì)粒穩(wěn)定性的因素很多，比如生長培養(yǎng)基組分[13-14]、質(zhì)粒拷貝數(shù)[15]、宿主遺傳背景、培養(yǎng)條件、比生長速率[16]、培養(yǎng)溫度[17]、外源蛋白表達(dá)水平[18]以及所表達(dá)蛋白
常熟理工學(xué)院學(xué)報 2015年4期2015-06-15
- 攜帶SLC基因的Birc5－siRNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建及鑒定＊
c5－siRNA質(zhì)粒載體的構(gòu)建及鑒定＊舒 榕1，王 強2△，朱慧芬3，孫媛麗3，賀 琪3， 萬京華21湖北省中山醫(yī)院麻醉科，武漢 4300332武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物與免疫學(xué)系，武漢 4300653華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，武漢 430030目的 構(gòu)建攜帶SLC基因的Birc5－siRNA質(zhì)粒載體，為腫瘤靶向治療研究提供基礎(chǔ)。方法 使用Ambion公司siRNATarget Finder設(shè)計的Birc5mRNA干擾序列，將Bi
華中科技大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版） 2015年1期2015-06-05
- 乳桿菌屬天然質(zhì)粒研究進(jìn)展
曦*乳桿菌屬天然質(zhì)粒研究進(jìn)展孫大慶1,2，李洪飛1，宋大巍1，楊 健1,3，張東杰1,3，許曉曦2,*（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 國家雜糧工程技術(shù)研究中心，黑龍江 大慶 163319；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）天然質(zhì)粒在乳桿菌屬多個菌種中已被發(fā)現(xiàn)，它們攜帶了許多重要生理功能和脅迫因子抗性基因，對乳桿菌遺傳、代謝、進(jìn)化等生物學(xué)研究具有重要意義。本文概述乳桿菌屬天然質(zhì)粒的生
食品科學(xué) 2015年11期2015-04-09
- 抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化和菌種篩選的研究*
基礎(chǔ)研究抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化和菌種篩選的研究*翁閃凡，劉 娜，張曉林(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系，廣東佛山 528000)目的篩選攜帶抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY的穩(wěn)定高產(chǎn)菌株。方法以CaCl2法制備大腸桿菌JM109感受態(tài)，將抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)，對瓊脂平板上獲得的菌落進(jìn)行篩選，選出符合標(biāo)準(zhǔn)的單菌落為菌種，進(jìn)行菌種穩(wěn)定性實驗。用質(zhì)粒提取試劑盒檢測質(zhì)粒含量。將抗鼻咽癌質(zhì)粒pFY轉(zhuǎn)染到細(xì)胞CNE-2中，四氮唑藍(lán)(MTT)比色法觀察轉(zhuǎn)染試劑及質(zhì)
重慶醫(yī)學(xué) 2015年26期2015-01-06
- 乳制品乳酸菌遺傳學(xué)概述*
儲存于自主復(fù)制的質(zhì)粒中。乳酸菌遺傳學(xué)研究的主要是它們當(dāng)中的質(zhì)粒和噬菌體，這些質(zhì)粒和噬菌體在乳酸菌中起著比較重要的作用，對比染色體，采用分子遺傳分析方法來分析的質(zhì)粒和噬菌體更加容易獲取和研究。眾所周知，好的發(fā)酵劑菌株對于乳制品發(fā)酵來說至關(guān)重要，但是這些菌株的某些特性并不穩(wěn)定，而大部分原因歸咎于質(zhì)粒的缺失，質(zhì)粒的編碼消除等對菌株的特性至關(guān)重要。1.1 質(zhì)粒DNA的檢測及其豐度1972年，Mckay等人［4］推斷乳酸鏈球菌(Str.lactis)喪失利用乳糖的能
食品與發(fā)酵工業(yè) 2014年1期2014-12-16
- GM-CSF 與生長抑素共表達(dá)基因疫苗的構(gòu)建和鑒定
等以豬的真核表達(dá)質(zhì)粒pGM-CSF 為模板，構(gòu)建GM-CSF 與SS 融合表達(dá)質(zhì)粒(pGM-CSF/SS)，免疫小鼠后，可增強小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力，提高生長抑素抗體的P/N 值［2］，提高肌肉組織中GHR 和IGF-I mRNA 的表達(dá)［3］。本研究利用動物的生長軸的原理，采用生物工程的方法，應(yīng)用共表達(dá)載體pIRES 將GM-CSF 基因和SS 基因分別克隆到載體的多克隆位點A 和B，構(gòu)建共表達(dá)基因疫苗，旨在同時表達(dá)GM-CSF 和SS 兩種蛋白，研
江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 2014年5期2014-12-14
- 螢光素酶表達(dá)質(zhì)粒pEE14.1-luc的構(gòu)建及表達(dá)
探討[4]，其中質(zhì)粒的大小是影響遞送效率的重要因素之一?，F(xiàn)有含螢光素酶報告基因的質(zhì)粒pGL3-CMV，但分子較小僅為5 kb，不便于模擬分子較大的DNA 質(zhì)粒進(jìn)行電穿孔遞送條件的研究[5]。因此，我們構(gòu)建了螢光素酶表達(dá)質(zhì)粒pEE14.1-luc，其中pEE14.1 是一種高效表達(dá)載體[6]，分子較大約為11 kb，將螢光素酶報告基因luc克隆入該載體后的質(zhì)粒分子可達(dá)12.7 kb。以此質(zhì)粒作為大分子質(zhì)粒的代表，為進(jìn)一步摸索遞送10 kb 以上質(zhì)粒的電穿孔條
生物技術(shù)通訊 2014年6期2014-11-29
- 優(yōu)化的密度梯度離心法提取質(zhì)粒DNA
050024)質(zhì)粒DNA是一種基因運載工具，在分子生物學(xué)、基因工程中有著極為廣泛的應(yīng)用，作為質(zhì)粒載體有3個共同的特征：一個復(fù)制子、一個選擇性標(biāo)志和一個克隆位點.而質(zhì)粒 DNA 的分離提取是分子生物學(xué)實驗中最基本的工作.現(xiàn)在已經(jīng)建立了多種提取純化質(zhì)粒 DNA的方法[1]，這些方法都包括 3個步驟：培養(yǎng)細(xì)菌，收集和裂解細(xì)菌，純化質(zhì)粒DNA.由于質(zhì)粒的大小不同，收集質(zhì)粒的方法應(yīng)有所區(qū)別，大于15 kb的質(zhì)粒要用溫和的方法.小于15 kb的質(zhì)粒可以用較劇烈的方法
衡水學(xué)院學(xué)報 2014年4期2014-11-23
- Bach1克隆構(gòu)建及其對肝癌細(xì)胞藥物敏感性的影響
li.DH5α、質(zhì)粒pBI-EGFP、質(zhì)粒pTet-Off、人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721：本室保存；質(zhì)粒pQE30-Bach1：美國教授饋贈；限制性核酸內(nèi)切酶NheⅠ，MluⅠ，KpnⅠ，HindⅢ：Fermentas公司；PCR產(chǎn)物純化試劑盒：上海捷瑞生物工程股份有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基：Gibco公司； 無支原體胎牛血清：北京索來寶公司；脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑：Invitrogen公司；cDNA第一鏈合成試劑盒：華北制藥集團有限公司。1.2重
中國老年學(xué)雜志 2014年21期2014-09-13
- 細(xì)菌線性質(zhì)粒的復(fù)制研究
212013）質(zhì)粒是染色體外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，廣泛存在于許多生物中，習(xí)慣上用來專指細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA 分子，它們能為宿主提供一些額外的功能，如抗藥性和毒力等，絕大多數(shù)的細(xì)菌質(zhì)粒都是閉合環(huán)狀DNA 分子。1979 年，在產(chǎn)抗生素的土壤微生物——婁徹鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)了第一例原核生物線性質(zhì)粒［1］，到目前為止，已在數(shù)十種鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)了線性質(zhì)粒，其分子大小在12-640 kb 之間［2］。1985 年，在疏螺旋體中發(fā)現(xiàn)了另一大類
生物技術(shù)通報 2014年5期2014-04-10
- 大腸桿菌外源蛋白表達(dá)載體穩(wěn)定性的研究進(jìn)展
610041）質(zhì)粒穩(wěn)定性是影響基因工程菌外源蛋白表達(dá)的重要因素，同時外源蛋白的表達(dá)又影響質(zhì)粒的穩(wěn)定性。隨著DNA 重組技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)在科研工作和應(yīng)用生產(chǎn)中占據(jù)著越來越重要的位置。目前，關(guān)于質(zhì)粒穩(wěn)定性及其改良的論述仍比較少見，且不夠全面。自20 世紀(jì)70 年代以來，大腸桿菌一直是基因工程中應(yīng)用最為廣泛的表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌遺傳背景清楚，轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，成本低廉，生長繁殖快，結(jié)構(gòu)簡單，培養(yǎng)操作簡便，可以大規(guī)模地快速生產(chǎn)目的蛋白，加之其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水
生物技術(shù)通報 2014年5期2014-01-14
- Chelex－100法提取真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的應(yīng)用體會
0法提取真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的應(yīng)用體會楊海濤目的 探討Chelex－100法提取先天性長QT綜合征相關(guān)人類真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3－HERG的可行性。方法 分別用Chelex－100法和堿裂解法提取pcDNA3－HERG質(zhì)粒，將環(huán)狀質(zhì)性DNA酶切為線性，0.8%瓊脂糖凝膠電泳后紫外燈下檢測質(zhì)粒提取的有效性。結(jié)果 用Chelex－100法和堿裂解法提取的pcDNA3－HERG質(zhì)粒的OD(A260/A280)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義［分別為(1.8±
中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2012年6期2012-11-15
- 卡介苗穿梭表達(dá)質(zhì)粒p MS MCP－1的構(gòu)建與鑒定＊
，將構(gòu)建穿梭表達(dá)質(zhì)粒，欲將該質(zhì)粒導(dǎo)入BCG，使BCG表達(dá)分泌MCP－1，達(dá)到構(gòu)建重組BCG的目的。1 材料和方法1.1 材料 Taq DNA 聚合酶、Eco RⅠ、SaⅡ、Bam HⅠ、T4DNA連接酶、DNA Marker DL2000、Marker DL15000購于上海皓嘉科技發(fā)展有限公司。BCG上海丹麥株由上海市生物制品研究所惠贈。質(zhì)粒p M V261（Stover CK博士構(gòu)建）由四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院徐恒教授惠贈 。人MCP－1c DNA由上海交
醫(yī)學(xué)理論與實踐 2012年20期2012-09-11
- 結(jié)核分枝桿菌Rpf－DNA疫苗對Mtb感染小鼠免疫保護(hù)作用的研究
pf E－DNA質(zhì)粒疫苗的構(gòu)建和表達(dá)：具體方法參考文獻(xiàn)［4］。2．轉(zhuǎn)染質(zhì)粒制備：按照梭華Sofast基因轉(zhuǎn)染試劑盒操作說明書制備。3．免疫動物：180只SPF級4周齡BALB／c雌性小鼠，平均分為6組。即空質(zhì)粒組、Rpf D質(zhì)粒組、Rpf E質(zhì)粒組、BCG組、生理鹽水組、空白對照組。空質(zhì)粒組、Rpf D質(zhì)粒組、Rpf E質(zhì)粒組和生理鹽水組分別背部皮下接種空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、Rpf D－DNA轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、Rpf E－DNA轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、生理鹽水各200μl；而空白對照
中國防癆雜志 2012年8期2012-09-02
- 經(jīng)典堿裂解法質(zhì)粒大量提取方法的改良
高濃度及高純度的質(zhì)粒DNA，且要求DNA的A260/A280值應(yīng)控制在1.8～2.0之間。雖然近些年來質(zhì)粒大量提取試劑盒層出不窮，但大多費用較高，所以目前大多實驗室仍以傳統(tǒng)的手提方法為主，其中以薩姆布魯克[1]提出的經(jīng)典堿裂解法應(yīng)用的最為廣泛。但此方法卻仍存在諸多弊端，例如操作復(fù)雜、耗時、所得質(zhì)粒純度低等，尤其是多次使用有機溶劑容易造成質(zhì)粒DNA的污染，且易對實驗人員構(gòu)成危害，實驗廢液也會造成不同程度的環(huán)境污染[2]。因此本實驗室在經(jīng)典的堿裂解法基礎(chǔ)上，采
黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報 2012年2期2012-07-04
- 不同轉(zhuǎn)染條件影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的探討
不同轉(zhuǎn)染條件影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的探討王紅鋼1，林 波2，汪文利3（1.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，河南 開封 475004；2.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 病理生理學(xué)教研室，河南 開封 475004；3.開封市第二人民醫(yī)院 耳鼻喉科，河南 開封 475000）目的通過插入不同片段質(zhì)粒、不同劑量的轉(zhuǎn)染，研究GFP基因轉(zhuǎn)染效率的變化。方法構(gòu)建插入不同片段的載體，以不同條件轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，以Northern blot分別檢測轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中各個質(zhì)粒的表達(dá)水平。結(jié)
河南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版） 2012年2期2012-04-06
- 聚乙二醇修飾多壁碳納米管對質(zhì)粒DNA的影響
修飾MWNTs與質(zhì)粒DNA的作用情況，并從二者對質(zhì)粒DNA損傷的角度考察了MWNTs的生物相容性.1 實驗本實驗中使用的MWNTs直徑為10～30 nm，長度為5～50 μm，購自深圳市納米港公司.本實驗采用混酸氧化法純化MWNTs，用V(濃硝酸)∶V(濃硫酸)=1∶3的混合酸超聲處理MWNTs，通過離心分離和真空干燥，得到的黑色固體為純化MWNTs.PEG修飾MWNTs的合成方法為如下：取干燥的50 mg純化MWNTs，加入15 mL pH=7.0的磷酸
上海大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版） 2011年3期2011-01-31
- 大腸桿菌hCG核酸疫苗質(zhì)粒擴增營養(yǎng)條件研究
基因構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒直接導(dǎo)入動物體細(xì)胞內(nèi)，使外源基因通過機體內(nèi)源性表達(dá)系統(tǒng)并提呈給免疫系統(tǒng)，誘發(fā)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。由于質(zhì)粒DNA傳遞系統(tǒng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率比較低，估計提供給細(xì)胞的每1000個質(zhì)粒分子只有1個能到達(dá)細(xì)胞核并被表達(dá)，導(dǎo)致徹底治愈疾病需要大量的質(zhì)粒DNA,因此，隨著核酸疫苗進(jìn)入臨床研究，必須開發(fā)質(zhì)粒DNA的大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)。質(zhì)粒DNA生產(chǎn)的工藝流程包括質(zhì)粒DNA的構(gòu)建、工程菌發(fā)酵、菌體收集、細(xì)菌裂解、純化濃縮、質(zhì)量檢驗與包
化學(xué)與生物工程 2010年1期2010-06-04