2021—2022年豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查

摘要：為了解豬偽狂犬病在不同地區(qū)、不同季節(jié)和不同生長(zhǎng)階段等條件下的感染情況。本次調(diào)查利用ELISA方法，對(duì)全國(guó)15個(gè)省、市、自治區(qū)的4 285份樣品進(jìn)行豬偽狂犬病病毒PRV gE和gB抗體檢測(cè)，其中包括2021年于30個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采集2655份和2022年于35個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采集1630份。結(jié)果顯示，2021年和2022年gE樣品陽(yáng)性率分別為21.4%和21.2%，gE場(chǎng)陽(yáng)性率分別為36.7%和34.3% ，gB樣品陽(yáng)性率分別為82.3%和84.5%，gB場(chǎng)陽(yáng)性率分別為100%和97.1%；按照不同地區(qū)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，gE陽(yáng)性率分別為安徽55.2%、福建24.3%、湖南59.0%、江西49.3%、山西90.0%、新疆62.0%（較高），北京、貴州、內(nèi)蒙古、陜西均為0%；按照不同季節(jié)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， gE陽(yáng)性率在春季最低，為16.7%，在秋季最高，為34.3%；按照不同生長(zhǎng)階段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，母豬gE陽(yáng)性率為38.3%，高于其他生長(zhǎng)階段的豬群，哺乳仔豬陽(yáng)性率最低，為9.5%。結(jié)果表明，在上述地區(qū)豬群中PRV gB抗體陽(yáng)性率較高，豬偽狂犬病感染率處于較低水平，但不同條件下存在較大差異并且分布廣泛，依舊存在流行風(fēng)險(xiǎn)。因此，確保疫苗接種率和有效率，加強(qiáng)豬群衛(wèi)生防疫，提高飼養(yǎng)管理水平，對(duì)防控此病有積極意義。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬?。籔RV ；gE抗體；血清學(xué)調(diào)查

豬偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）屬于皰疹病毒科、甲型皰疹病毒亞科的成員，豬皰疹病毒 I 型，病毒粒子呈球形，直徑為150～180 nm，其核衣殼直徑為105～110 nm，形態(tài)由芯髓、衣殼、中間質(zhì)層和囊膜組成，囊膜表面有放射狀纖突，線狀雙鏈DNA 病毒[1]。感染后可能導(dǎo)致懷孕母豬的流產(chǎn)以及死胎，對(duì)于新生仔豬可能會(huì)引發(fā)腹瀉性死亡，育肥豬則可能出現(xiàn)呼吸道癥狀[2] ，該病是危害整個(gè)養(yǎng)豬行業(yè)的重要疫病之一[3] 。偽狂犬病毒不僅可以感染豬、牛、山羊、綿羊等家養(yǎng)動(dòng)物，還可感染貓、犬等伴侶動(dòng)物以及野豬等野生動(dòng)物[4]。本病的傳播途徑有3條，分別是直接接觸傳播、經(jīng)空氣傳播和經(jīng)生殖接觸進(jìn)行傳播[5]。由于多種動(dòng)物均可以感染本病，導(dǎo)致發(fā)病動(dòng)物及隱性感染者為主要傳染源，但在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)以帶毒豬和發(fā)病豬為主要的傳染源。PRV gB基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白非常保守且具有良好的免疫原性，使用PRV gE基因缺失疫苗進(jìn)行免疫后，可通過(guò)檢測(cè)PRV gB抗體和PRV gE抗體掌握免疫效果和野毒感染情況。因此為了解豬偽狂犬病野毒的感染情況以及疫苗接種情況，對(duì)未來(lái)可能的流行趨勢(shì)判斷提供數(shù)據(jù)支持，利用ELISA方法對(duì)2021至2022年不同地區(qū)、季節(jié)和生長(zhǎng)階段的豬群，開(kāi)展本次豬偽狂犬病流行性病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1）檢測(cè)樣品。來(lái)自全國(guó)15個(gè)省、市、自治區(qū)（以下簡(jiǎn)稱(chēng)省）的4 285份樣品，其中包括2021年于30個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采集的2 655份和2022年于35個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采集的1 630份，受檢豬群包括仔豬、母豬、后備豬、育肥豬等。無(wú)菌采集血液樣本2～3 mL ，靜置2～4 h，3 000 r/min離心5 min，取上清液至無(wú)菌離心管中，置負(fù)20 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2）主要試劑。豬偽狂犬病病毒g1抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)愛(ài)德士生物科技有限公司（批號(hào)：JS807、JS840、JT387）；偽狂犬病病毒 gB（PRVgB）抗體 ELISA 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自鄭州中農(nóng)快檢科技有限公司（批號(hào)：FS8250、FS8767）。

3）主要儀器。臺(tái)式冷凍離心機(jī)，德國(guó)sigma公司產(chǎn)品（型號(hào)：3K15）；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品（型號(hào)：DRP-9082）；酶標(biāo)儀，TECAN公司產(chǎn)品（型號(hào)：F50）。

1.2 檢測(cè)方法

PRV gE使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)，其操作步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)均嚴(yán)格按照豬偽狂犬病病毒 g1抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；PRV gB使用間接法ELISA檢測(cè)，其操作步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)均嚴(yán)格按照偽狂犬病病毒 gB（PRVgB）抗體 ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每次檢測(cè)均設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

利用 Microsoft Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 PRV抗體檢測(cè)結(jié)果

2021年和2022年樣品經(jīng)PRV gB抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，gB場(chǎng)陽(yáng)性率分別為100%（30/30）和97.1%（34/35）合計(jì)98.5%（64/65），gB樣本陽(yáng)性率分別為82.3%（2 186/2 655）和84.5%（1 378/1 630）合計(jì)83.2%（3 564/4 285）。

2021年和2022年樣品經(jīng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2，gE場(chǎng)陽(yáng)性率分別為36.7%（11/30）和34.3%（12/35）合計(jì)35.4%（23/65），gE樣本陽(yáng)性率分別為21.4%（569/2 655）和21.2%（346/1 630）合計(jì)21.4%（915/4 285）。

2.2 不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)PRV gE抗體結(jié)果

對(duì)2021至2022年不同地區(qū)樣品PRV gE抗體結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3，不同地區(qū)的PRV gE抗體陽(yáng)性率不盡相同，其中安徽55.2%（16/29）、福建24.3%（101/416）、湖南59.0%（112/190）、山西90.0%（18/20）、江西49.3%（182/369）、新疆62.0%（70/113），高于本次調(diào)查PRV gE總樣品陽(yáng)性率21.4%（915/4 285）；北京（0/361）、貴州（0/162）、內(nèi)蒙古（0/138）、陜西（0/10）樣本陽(yáng)性率最低均為0%。

2.3 不同季節(jié)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同季節(jié)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表4，春季（3—5月）gE抗體陽(yáng)性率最低為16.7%（318/1 903）；夏季（6—8月）gE抗體陽(yáng)性率為24.9%（237/951）；秋季（9—11月）gE抗體陽(yáng)性率最高為34.3%（217/633）；冬季（12—次年2月）gE抗體陽(yáng)性率為17.9%（143/798）。

2.4 不同生長(zhǎng)階段PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同生長(zhǎng)階段PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表5，母豬的gE抗體陽(yáng)性率高于其他生長(zhǎng)階段的豬群，為38.3%（448/1 169），哺乳仔豬gE抗體陽(yáng)性率最低，為9.5%（76/801）。

3 討論

本次調(diào)查利用PRV gE基因缺失疫苗免疫與野毒感染產(chǎn)生抗體差異的特點(diǎn)通過(guò)gE和gB抗體ELISA檢測(cè)方法，對(duì)15個(gè)省的部分規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查。監(jiān)測(cè)了豬群整體的PRV抗體陽(yáng)性率，并對(duì)不同地區(qū)、季節(jié)和生長(zhǎng)階段豬群的豬偽狂犬野毒感染率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)分析其原因、制定防控建議，以期達(dá)到降低該病感染率、提高經(jīng)濟(jì)效益的目的[6，8]。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，2021至2022年15省豬群的PRV gE 樣本陽(yáng)性率為21.4%，PRV gB抗體樣品陽(yáng)性率為83.2%。這與康篤利[9]報(bào)道，2015至2017年19省豬群的PRV gE 樣本陽(yáng)性率60.33%相差較大，可能是因?yàn)橛行У慕臃N疫苗使得總體gB抗體陽(yáng)性率較高，降低了野毒感染率。初步認(rèn)為近年來(lái)豬偽狂犬野毒感染總體情況較為穩(wěn)定并處于較低水平。但目前尚未出現(xiàn)針對(duì)豬偽狂犬病的特效藥物[10]，因此選擇恰當(dāng)?shù)囊呙缃臃N是降低感染率和提高生產(chǎn)性能的最有效手段[11]。

在對(duì)不同地區(qū)PRV gE抗體結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)發(fā)現(xiàn)，安徽、福建、湖南、山西、新疆，均高于總樣品陽(yáng)性率，而北京、貴州、內(nèi)蒙古、陜西未檢出陽(yáng)性樣本。由此可以看出野毒感染水平地區(qū)間分布不均，部分地區(qū)存在較高的野毒感染率。這可能是疫苗接種滯后或疫苗保護(hù)力不佳引起，依然存在大規(guī)模傳播風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)加強(qiáng)日常疫病監(jiān)測(cè)，選擇專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)或正規(guī)公司生產(chǎn)的試劑產(chǎn)品定期進(jìn)行抗體檢測(cè)，主動(dòng)掌握疫情數(shù)據(jù)。若確實(shí)出現(xiàn)的野毒感染率升高，需結(jié)合場(chǎng)區(qū)實(shí)際情況及時(shí)調(diào)整免疫程序和防疫手段。同時(shí)部分地區(qū)之間的野毒感染率差異較大也可能受到樣品數(shù)量少的影響，為更準(zhǔn)確地掌握野毒感染情況，還應(yīng)對(duì)具體地區(qū)進(jìn)行針對(duì)性調(diào)查研究。

對(duì)不同季節(jié)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，夏秋兩季gE抗體陽(yáng)性率較高。春秋防疫是每年開(kāi)展防疫的工作重心，春防秋防工作的有效開(kāi)展也關(guān)系到全年的防疫成果。因此開(kāi)展春防秋防要及時(shí)，接近尾聲時(shí)不松懈確保全年疫病防控工作的高效有序進(jìn)行。

呂遠(yuǎn)蓉等[12]調(diào)查顯示，南充地區(qū)豬場(chǎng)中仔豬的PRV gE 樣本陽(yáng)性率為15%處于較低水平；佘志成等[13]報(bào)道，江蘇部分地區(qū)公豬、母豬和仔豬PRV gE抗體陽(yáng)性率分別50%、42%、33%。本次調(diào)查對(duì)不同生長(zhǎng)階段PRV gE抗體結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，母豬的gE抗體陽(yáng)性率高于其他生長(zhǎng)階段的豬群，有可能是養(yǎng)殖場(chǎng)擔(dān)心因疫苗接種對(duì)母豬的生產(chǎn)性能造成影響，免疫接種比較保守。哺乳仔豬gE抗體陽(yáng)性率最低，則可能是母豬自然感染或接種疫苗后產(chǎn)生母源抗體對(duì)仔豬產(chǎn)生了保護(hù)。

本次調(diào)查結(jié)果表明，豬偽狂犬病野毒感染率較低，總體gB抗體陽(yáng)性率較高，不同地區(qū)、不同季節(jié)和不同生長(zhǎng)階段野毒感染情況存在差異。說(shuō)明相關(guān)防疫程序可能存在制定不適合、實(shí)施不及時(shí)、落實(shí)不到位等情況，而這將導(dǎo)致投入增加和產(chǎn)能下降最終影響?zhàn)B殖收益。同時(shí)應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況制定適當(dāng)防疫程序，及時(shí)有效開(kāi)展免疫工作，做好疫病監(jiān)測(cè)；提高自繁自養(yǎng)比例，提高各生長(zhǎng)段飼養(yǎng)管理水平；盡量做到全進(jìn)全出，為全面消殺創(chuàng)造條件；做好環(huán)境消毒、滅蟲(chóng)滅鼠和飼料防潮防霉措施；做好控溫控濕和通風(fēng)換氣，避成豬群免疫力低下增加感染風(fēng)險(xiǎn)。

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