不同海拔藏綿羊肉品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分及肉質(zhì)相關(guān)基因表達(dá)特征分析

姚亮偉 沙玉柱 郭新羽 蒲小寧 徐英 王繼卿 李少斌 郝志云 劉秀

摘要：為探究不同海拔藏綿羊肉品質(zhì)差異及肉質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)特征，以來(lái)自海拔2 500、3 500和4 500 m藏綿羊?yàn)檠芯繉?duì)象，對(duì)其背最長(zhǎng)肌、臂三頭肌和股二頭肌的肉品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)背最長(zhǎng)肌和股二頭肌肉質(zhì)相關(guān)基因（H-FABP、LPL、MC4R 和CAST）的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定及相關(guān)性分析。結(jié)果表明，在肉品質(zhì)方面，低海拔藏綿羊肉的剪切力小、失水率低、嫩度高、口感更好，尤其背最長(zhǎng)肌要優(yōu)于其他2個(gè)部位，而高海拔藏綿羊的熟肉率和出肉率更高；在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)方面，高海拔藏綿羊肉的無(wú)機(jī)鹽、粗蛋白含量較高，更具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但低海拔藏綿羊肉的多汁性好，且背最長(zhǎng)肌的口感、營(yíng)養(yǎng)成分均好于腿肌。肉質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)量在不同海拔間存在差異，其中，H-FABP 在中海拔藏綿羊各部位肌肉中的表達(dá)量均最高；LPL、MC4R、CAST 在低海拔藏綿羊股二頭肌中的表達(dá)量均最高，在中、高海拔藏綿羊背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)量較高。相關(guān)分析表明，H-FABP、LPL、MC4R、CAST 基因的表達(dá)量與藏綿羊的熟肉率、剪切力、失水率及灰分、粗脂肪、粗蛋白、干物質(zhì)含量顯著相關(guān)。由此可見(jiàn)，不同海拔藏綿羊的肉質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分均存在較大差異，且不同部位中肉質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)量也存在差異，從而影響藏綿羊的肉質(zhì)。以上結(jié)果為不同海拔藏綿羊的肉品選擇及遺傳改良提供基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：藏綿羊；不同海拔；肉品質(zhì)；營(yíng)養(yǎng)成分；基因表達(dá)

doi：10.13304/j.nykjdb.2022.0385

中圖分類(lèi)號(hào)：S826.8+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008‐0864（2024）03‐0066‐10

藏綿羊是中國(guó)三大粗毛綿羊品種之一，生活在海拔2 000～5 000 m 的青藏高原地區(qū)，存欄量3 000多萬(wàn)只，是我國(guó)存欄量最大的綿羊品種，也是青藏高原重要的種質(zhì)資源[1]。藏綿羊?qū)η嗖馗咴膼毫迎h(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)性。由于青藏高原地理環(huán)境復(fù)雜，不同海拔藏綿羊在體型、外貌、生產(chǎn)性能、適應(yīng)性等都存在差異[2]；且其常年在天然草場(chǎng)自然放牧，因此肉質(zhì)鮮嫩，富含微量元素、蛋白質(zhì)，且脂肪含量適中，膽固醇含量低，膻味小，非常有益于人類(lèi)健康[3-5]。

研究表明，不同海拔的牦牛和藏豬肉質(zhì)性能存在差異。王琳琳等[6]對(duì)不同海拔麥洼牦牛和高山牦牛的肉品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)高海拔麥洼牦牛肉的水分、蛋白質(zhì)及灰分含量均高于高山牦牛，但高山牦牛肉的肉質(zhì)更嫩，且2種肉的品質(zhì)也存在較大差異。邱丙姍等[7]對(duì)不同海拔地區(qū)藏豬的肉質(zhì)性能分析發(fā)現(xiàn)，西藏昌都藏豬宰后24 h豬肉大理石紋評(píng)分和風(fēng)味顯著優(yōu)于云南香格里拉藏豬，而香格里拉藏豬具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，肉質(zhì)不能僅從表型性狀和一些簡(jiǎn)單的性狀來(lái)研究，而需要基于肉質(zhì)相關(guān)的基因進(jìn)行更加深入的研究[8]。研究發(fā)現(xiàn)，心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart fatty acid-bindingprotein，H-FABP）在多種組織中合成，并存在于3種細(xì)胞中，β氧化速度高的細(xì)胞，脂肪代謝強(qiáng)度高，尤其是類(lèi)固醇合成旺盛的細(xì)胞以及內(nèi)胚層起源的細(xì)胞[9]。Samulin等[10]研究指出，H-FABP 基因在細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制、信號(hào)傳導(dǎo)、脂肪細(xì)胞的分化方面有著很大的作用。脂蛋白脂酶（lipoproteinlipase）基因LPL 對(duì)肌內(nèi)脂肪沉積起重要作用[11‐12]。黑素皮質(zhì)素受體-4（melanocortin-4receptor，MC4R）是調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物攝食和體重的重要信號(hào)分子，主要由動(dòng)物下丘腦分泌，MC4R 基因在能量平衡、生殖機(jī)能和維持機(jī)體能量穩(wěn)態(tài)和采食量的調(diào)控中發(fā)揮重要作用，可以作為動(dòng)物生長(zhǎng)性狀選擇的遺傳標(biāo)記[13]。鈣蛋白酶抑制蛋白（calpastatin，CAST）可通過(guò)抑制鈣蛋白酶活性影響肌肉的嫩度[14]。

目前，不同海拔藏綿羊肉品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分比較的研究鮮見(jiàn)報(bào)道，因此，本研究在比較不同海拔藏綿羊肉質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上，對(duì)3個(gè)組織肌肉發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定和相關(guān)性分析，以期獲得不同海拔藏綿羊肉質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分變化特征，并篩選出與藏綿羊肉質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分相關(guān)的基因，進(jìn)而為藏綿羊的遺傳改良和種質(zhì)創(chuàng)新提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及其樣品采集

在甘肅省甘南藏族自治州卓尼縣（海拔2 500 m，低海拔）、青海省海北藏族自治州海晏縣（海拔3 500 m，中海拔）、青海省玉樹(shù)藏族自治州玉樹(shù)縣（海拔4 500 m，高海拔）3個(gè)地區(qū)的牧民羊群中選取3歲，發(fā)育正常、體質(zhì)健康、體重相近，且均在當(dāng)?shù)靥烊荒翀?chǎng)自然放牧、未進(jìn)行任何人工補(bǔ)飼的藏綿羊各6只，屠宰后采集背最長(zhǎng)肌、臂三頭肌和股二頭肌各500 g，封裝帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2 試驗(yàn)試劑

濃硫酸、鹽酸、石油醚、硼酸、無(wú)水甲醇、無(wú)水碳酸鈉、氫氧化鈉購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；硫酸銅、硫酸鉀、甲基紅、溴甲酚氯購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑有限公司；正己烷購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Servicebio?RT First Strand CDNA Synthesis Kit）購(gòu)自武漢塞維爾生物科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)儀器

試驗(yàn)用到的儀器主要有C-LM3B型肌肉嫩度儀（北京天翔飛域儀器設(shè)備有限公司）、Meat-1型失水率測(cè)試儀（北京天翔飛域儀器設(shè)備有限公司）、TESTO205型便攜式pH計(jì)（德圖儀表有限公司）、MATTHAUS OPTO-STAR 型肉色測(cè)定儀（德國(guó)MATTHAUS公司）、HH-2型恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）、BPG-9240A型精密鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、KJELTEC 8200型凱氏定氮儀（上海瑞玢國(guó)際貿(mào)易有限公司）、SOXTEC 2050型全自動(dòng)索氏脂肪浸提儀（上海瑞玢國(guó)際貿(mào)易有限公司）、9700 ThermalCycler梯度PCR儀（ABI，USA）、Quant Studio DX實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x（Life Techonologies，USA）和DYY-6C瓊脂糖凝膠電泳儀（北京六一儀器廠）。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 肉品質(zhì)測(cè)定 熟肉率：取長(zhǎng)方體肉樣約60 g，稱(chēng)其質(zhì)量，記作M1，在80 ℃蒸鍋中加熱30 min，蒸煮后待肉樣冷卻至室溫，濾紙吸干表面水分，然后稱(chēng)其質(zhì)量，記作M2，設(shè)置3個(gè)平行。熟肉率的計(jì)算公式如下。

熟肉率=M2/M1×100% （1）

剪切力：用肌肉嫩度儀測(cè)定其剪切力值，平行操作3次，取平均值作為樣品的剪切力。

失水率：將肉樣修剪為直徑5 cm、厚度1 cm，立即用分析天平稱(chēng)其質(zhì)量，記作M3，然后在樣品上下各墊16層左右的中性濾紙，放置在失水率測(cè)試儀上施加35 kg壓力保持5 min，之后將肉樣取出再稱(chēng)其質(zhì)量，記作M4，設(shè)置3個(gè)平行。失水率計(jì)算公式如下。

失水率=（M3-M4）/M3×100% （2）

1.4.2 營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定 采用GB 5009.4—2016灼燒重量法[15]測(cè)定粗灰分含量；采用GB 5009.5—2016凱氏半微量定氮法[16]測(cè)定粗蛋白含量；采用GB 5009.6—2016索氏抽提法[17]測(cè)定粗脂肪含量；采用GB 5009.3—2016 直接干燥法[18] 測(cè)定水分含量。

1.5 基因表達(dá)量測(cè)定

1.5.1 RNA提取和cDNA的合成 用Trizol法提取背最長(zhǎng)肌和股二頭肌的組織RNA，提取后用Implen超微量分光光度儀對(duì)其含量和純度檢測(cè)，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)其RNA的完整性；通過(guò)反轉(zhuǎn)錄試劑盒在20 μL的體系中反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，體系和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.2 設(shè)計(jì)與合成引物 在NCBI系統(tǒng)搜索綿羊H-FABP、LPL、MC4R 和CAST 的mRNA序列，然后用Premier 5.0設(shè)計(jì)各個(gè)基因的擴(kuò)增引物，引物信息如表1所示。

1.5.3 熒光定量PCR 檢測(cè) 將β-Actin 作為內(nèi)參基因進(jìn)行校正，然后利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀對(duì)H-FABP、LPL、MC4R 和CAST 基因和內(nèi)參基因進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，PCR 體系包括：4×gDNA wiper Mix5.0 μL，RNase free ddH2O 3.6 μL，上、下游引物各0.2 μL，cDNA 模板1.0 μL。PCR 程序?yàn)椋?4 ℃3 min；94 ℃ 20 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 10 min， 30個(gè)循環(huán)；保存于4 ℃冰箱。 PCR產(chǎn)物用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5 %的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)：電壓100 V，電泳40 min，EB染色20 min，凝膠成像儀成像，要求引物擴(kuò)增目的片段條帶清晰明亮，沒(méi)有雜帶。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010 和SPSS 22.0 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同海拔藏綿羊肉品質(zhì)比較

不同海拔藏綿羊不同部位肉的品質(zhì)存在差異（表2）。在熟肉率上，臂三頭肌在不同海拔間差異不顯著；中低海拔和高海拔的股二頭肌均顯著高于中海拔；背最長(zhǎng)肌在不同海拔間差異顯著。在同一海拔下，背最長(zhǎng)肌的熟肉率均高于其他2個(gè)部位，其中，在低海拔下背最長(zhǎng)肌顯著高于臂三頭肌和股二頭??；在中海拔下背最長(zhǎng)肌顯著高于臂三頭肌、極顯著高于股二頭肌，臂三頭肌顯著高于股二頭??；在高海拔下背最長(zhǎng)肌顯著高于臂三頭肌和股二頭肌。剪切力均表現(xiàn)為低海拔最低，其中，中高海拔和中海拔臂三頭肌顯著高于低海拔；中高海拔股二頭肌顯著高于低海拔和中海拔；中高海拔和中海拔背最長(zhǎng)肌顯著高于低海拔。在中海拔下，背最長(zhǎng)肌的剪切力顯著高于股二頭肌，與臂三頭肌差異不顯著。在失水率上，臂三頭肌表現(xiàn)為中海拔最低，但不同海拔間差異不顯著；股二頭肌表現(xiàn)為低海拔和中海拔均顯著高于高海拔；背最長(zhǎng)肌表現(xiàn)為高海拔和低海拔顯著低于低海拔。在低海拔下，臂三頭肌和股二頭肌的失水率顯著高于背最長(zhǎng)肌；在中海拔下，股二頭肌的失水率顯著高于臂三頭肌，極顯著高于背最長(zhǎng)肌；在高海拔下，臂三頭肌和股二頭肌的失水率均顯著高于背最長(zhǎng)肌。

2.2 不同海拔藏綿羊肉質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分比較

由表3可知，不同海拔藏綿羊不同部位肉的營(yíng)養(yǎng)成分存在差異。3個(gè)部位的灰分含量均表現(xiàn)為高海拔最高，其中，在高海拔下股二頭肌的灰分含量顯著高于低海拔和中海拔；在高海拔下，股二頭肌的灰分含量顯著高于臂三頭肌和背最長(zhǎng)肌。背最長(zhǎng)肌的粗脂肪含量均表現(xiàn)為高海拔最低，顯著高于低海拔，與中海拔差異不顯著。在低海拔下，背最長(zhǎng)肌的粗脂肪含量顯著高于臂三頭肌和股二頭肌；在中海拔下，背最長(zhǎng)肌顯著高于股二頭肌，均與臂三頭肌差異不顯著；在高海拔下，背最長(zhǎng)肌顯著高于臂三頭肌，均與股二頭肌差異不顯著。不同部位粗蛋白含量均表現(xiàn)為高海拔最高。低海拔和高海拔股二頭肌的粗蛋白含量均顯著高于中海拔。在高海拔下，股二頭肌和背最長(zhǎng)肌的粗蛋白含量顯著高于臂三頭肌；在低、中海拔下，不同部位間差異不顯著。在低海拔與中海拔下，背最長(zhǎng)肌的水分含量均顯著高于臂三頭肌和股二頭?。辉诟吆０蜗鹿啥^肌的水分含量與背最長(zhǎng)肌差異顯著，與臂三頭肌均差異不顯著。

2.3 不同海拔藏綿羊肉質(zhì)相關(guān)基因在股二頭肌的相對(duì)表達(dá)量

由H-FABP、LPL、MC4R、CAST 在股二頭肌的相對(duì)表達(dá)量（圖1）可以看出，不同基因的表達(dá)量在不同海拔藏綿羊間存在差異。從整體來(lái)看，LPL 與CAST 的表達(dá)量均高于其他基因，H-FBP 和MC4R 基因的表達(dá)量較低。從單個(gè)基因來(lái)看，HFABP基因在中、低海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于高海拔；LPL 在低海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于中、高海拔；MC4R 在低海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于高海拔；CAST 在低海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于中、高海拔藏綿羊。

2.4 不同海拔藏綿羊肉質(zhì)相關(guān)基因在背最長(zhǎng)肌的相對(duì)表達(dá)量

由圖2可知，不同肉質(zhì)相關(guān)基因在不同海拔的藏綿羊背最長(zhǎng)肌中的相對(duì)表達(dá)量存在差異。從整體來(lái)看，CAST 和LPL 基因的表達(dá)量較高，MC4R和H-FABP 基因的表達(dá)量較低。從單個(gè)基因來(lái)看，H-FABP 基因在低、中海拔藏綿羊中的表達(dá)量顯著高于高海拔藏綿羊；LPL 基因在中、高海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于低海拔藏綿羊；MC4R 基因在不同海拔藏綿羊間差異均不顯著；CAST 基因在高海拔藏綿羊的表達(dá)量顯著高于低海拔藏綿羊。

2.5 不同海拔藏綿羊肉質(zhì)特征與基因表達(dá)量相關(guān)性分析

由表 4知，H-FABP 基因與灰分、粗蛋白含量呈極顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.874、-0.815；LPL 基因與熟肉率呈極顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.813，與粗蛋白和水分含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.678和0.654；MC4R 基因與剪切力、失水率呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.628、-0.707；CAST 基因與熟肉率呈極顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.870，與失水率呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.649，與水分含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.762。

3 討論

3.1 關(guān)于肉品質(zhì)的比較分析

熟肉率能夠很好地體現(xiàn)羊肉的蒸煮損失，也就是肉的含水量，熟肉率越高，蒸煮損失越小，肉品質(zhì)越好[19]。本研究表明，3個(gè)海拔下，背最長(zhǎng)肌的熟肉率均高于臂三頭肌和股二頭肌，說(shuō)明藏綿羊背最長(zhǎng)肌的肉品質(zhì)最好。不同海拔間比較發(fā)現(xiàn)，3個(gè)海拔間臂三頭肌的熟肉率差異不顯著；高海拔股下二頭肌和背最長(zhǎng)肌的熟肉率均高于低、中海拔；因此，高海拔的蒸煮損失小于低、中海拔，肉的含水量少，在肉的加工過(guò)程中損失更少。剪切力是評(píng)價(jià)肉品質(zhì)的重要指標(biāo)，且剪切力與嫩度之間相互影響，而嫩度是影響肉質(zhì)的重要因素之一[20]。本研究中，低海拔3個(gè)部位的剪切力均小于中、高海拔，說(shuō)明低海拔下羊肉嫩度較好，而中、高海拔下肉質(zhì)較老，這與日格波等[21]在牛肉上的研究結(jié)果一致，這種現(xiàn)象可能與長(zhǎng)期適應(yīng)性進(jìn)化有關(guān)。失水率是指羊肉的一種保水能力，它與羊肉的眾多食用品質(zhì)相關(guān)，如風(fēng)味、嫩度、色澤、營(yíng)養(yǎng)以及加工時(shí)的產(chǎn)量等[22]。王芳等[23]研究表明，失水率越低，系水力越好，保水性越好，肉質(zhì)越佳。本研究表明，藏綿羊的臂三頭肌的失水率表現(xiàn)為中海拔較低，股二頭肌和背最長(zhǎng)肌表現(xiàn)為高海拔較低。在不同海拔放牧藏綿羊，其不同部位的肉品質(zhì)存在差異，在低海拔下肉的剪切力小、失水率低、嫩度高、口感更好，尤其背最長(zhǎng)??；在高海拔下，熟肉率高，即出肉率更高。

3.2 關(guān)于營(yíng)養(yǎng)成分的比較分析

灰分是有機(jī)成分揮發(fā)后殘留下來(lái)的無(wú)機(jī)成分，包括無(wú)機(jī)鹽和氧化物，主要是各種礦物元素的氧化物。通過(guò)灰分可評(píng)定肉質(zhì)有無(wú)污染，最后體現(xiàn)肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[24]。雞肉中粗灰分含量能夠反應(yīng)肉質(zhì)的無(wú)機(jī)鹽含量[25]。本研究中，高海拔組3個(gè)部位的灰分含量分別為1.110%、1.259%、1.107%，均高于中、低海拔，且高海拔股二頭肌的灰分含量顯著高于中、低海拔，由此說(shuō)明，高海拔下藏綿羊肉的無(wú)機(jī)鹽含量更高，更具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，健康性更好。本研究中的粗脂肪主要為肌內(nèi)脂肪，肌內(nèi)脂肪含量是體現(xiàn)肉品質(zhì)風(fēng)味的重要指標(biāo)[26]。3個(gè)海拔下，背最長(zhǎng)肌的粗脂肪含量顯著高于其他2個(gè)部位，說(shuō)明背最長(zhǎng)肌肉的口感更好，且肉的嫩度也有極大改善，但脂肪會(huì)產(chǎn)生油膩感，因此不能過(guò)高[27]。臂三頭肌和股二頭肌的粗脂肪含量表現(xiàn)為中海拔藏綿羊較高。肌間脂肪可以有效地提高肉的嫩度、口感和風(fēng)味，降低剪切力，提高多汁性[28]。蛋白質(zhì)含量是羊肉的重要指標(biāo)，羊肉中蛋白質(zhì)含量較高[29]，富含維生素和不飽和脂肪酸，且性溫?zé)帷⒚牢?、口感好，是人們?nèi)粘Ｉ畹睦硐肴馄罚哂泻芨叩臓I(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本研究表明，高海拔下3個(gè)部位的粗蛋白含量均高于中、低海拔的，說(shuō)明高海拔下羊肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高。干物質(zhì)量可以反映肉質(zhì)的多汁性和口感，有效地體現(xiàn)羊肉中的有機(jī)物的多少和營(yíng)養(yǎng)含量的豐富程度[30]。本研究表明，臂三頭肌和背最長(zhǎng)肌的干物質(zhì)含量表現(xiàn)為高海拔高于中、低海拔，而股二頭肌表現(xiàn)為中海拔最高，但與高海拔間差異不顯著，說(shuō)明在高海拔下?tīng)I(yíng)養(yǎng)累計(jì)較高、蒸煮損失較小，但肉質(zhì)多汁性不如低海拔，與于小杰等[19]的研究結(jié)果一致。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分析發(fā)現(xiàn)，高海拔下肉的無(wú)機(jī)鹽、粗蛋白含量較高，更具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而低海拔下肉的多汁性好，其中背最長(zhǎng)肌口感、營(yíng)養(yǎng)均優(yōu)于腿肌。

3.3 肉質(zhì)相關(guān)基因在股二頭肌中的表達(dá)特征分析

本研究表明，不同海拔下，藏綿羊股二頭肌中H-FABP 基因的表達(dá)量較高，且股二頭肌中粗脂肪含量表現(xiàn)為中海拔藏綿羊最高。李武峰等[9]研究表明，H-FABP 基因在脂肪代謝強(qiáng)度高的細(xì)胞中表達(dá)量較高，由此說(shuō)明，H-FABP基因的表達(dá)量與動(dòng)物脂肪含量關(guān)系密切。LPL是動(dòng)物體內(nèi)甘油三脂降解為甘油和游離脂肪酸反應(yīng)的限速酶，并參與各種脂蛋白代謝，與機(jī)體的脂質(zhì)代謝及肥胖密切相關(guān)[31]；且LPL 基因的表達(dá)量受年齡和營(yíng)養(yǎng)水平的影響較大[32]。本試驗(yàn)表明，股二頭肌中LPL 在低海拔藏綿羊的相對(duì)表達(dá)量顯著高于中、高海拔藏綿羊。MC4R 基因在人、豬、馬等哺乳動(dòng)物中主要影響機(jī)體脂肪、增重率等性狀[33]。王懷禹[34]研究發(fā)現(xiàn)，在有地方豬或野豬血統(tǒng)的雜交豬，MC4R 基因的作用可能相反或不顯著，這可能是由于在不同遺傳背景下基因的效應(yīng)存在差異。脂肪性狀受脂肪細(xì)胞的分化以及細(xì)胞內(nèi)脂肪沉積等多種生化和內(nèi)分泌因素的影響，在脂肪型的地方豬中可能存在對(duì)脂肪性狀效應(yīng)較大的主效基因。本研究發(fā)現(xiàn)，低海拔下藏綿羊股二頭肌中MC4R 基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于中海拔的。CAST的主要作用是抑制鈣蛋白酶，姚慧[35]研究表明，豬肉中CAST 的活性低于牛、羊，CAST作為細(xì)胞內(nèi)專(zhuān)一性抑制CAPN活性的基因，可以有效通過(guò)調(diào)控CAPN 的表達(dá)量來(lái)控制肉質(zhì)中的脂肪含量，防止羊肉脂肪過(guò)高產(chǎn)生油膩感。本研究表明，低海拔藏綿羊CAST 基因在股二頭肌中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于中、高海拔藏綿羊，與前人研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了CAST 基因是與肉質(zhì)嫩度相關(guān)的候選基因。

3.4 肉質(zhì)相關(guān)基因在背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)特征分析

背最長(zhǎng)肌作為羊肉各部位中最具典型的一塊肌肉，在肉質(zhì)研究中極具代表性，與臂三頭肌和股二頭肌的肉品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分也不盡相同，在相關(guān)基因的表達(dá)上也存在差異。本研究表明，低、中海拔藏綿羊背最長(zhǎng)肌H-FABP 基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于高海拔藏綿羊，說(shuō)明低、中海拔藏綿羊背最長(zhǎng)肌中脂肪含量高于高海拔藏綿羊，與李武峰等[9]的研究結(jié)果一致；中、高海拔藏綿羊背最長(zhǎng)肌中LPL基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于低海拔藏綿羊。在脂蛋白水解過(guò)程中，LPL活性的調(diào)控對(duì)于血漿脂質(zhì)代謝和機(jī)體功能具有重要作用，其調(diào)控可發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后、翻譯以及翻譯后多個(gè)水平，同時(shí)也受其自身酶固有特性的調(diào)控，高水平脂肪酸可降低LPL活性，有助于防止組織吸收過(guò)量的脂肪酸[36]。本研究中CAST基因在高海拔藏綿羊背最長(zhǎng)肌中的相對(duì)表達(dá)量高于低海拔藏綿羊，而在股二頭肌的相對(duì)表達(dá)量低于低海拔藏綿羊，這可能是高海拔下羊的運(yùn)動(dòng)量更大所致，詳細(xì)原因還有待進(jìn)一步研究。

3.5 肉質(zhì)指標(biāo)與基因表達(dá)量的相關(guān)性分析

研究表明，綿羊H-FABP 基因的SNPs多態(tài)性對(duì)肌肉內(nèi)脂肪含量影響顯著；其AA和AB、BB基因型的剪切力差異極顯著，B基因型對(duì)剪切力有正效應(yīng)，A基因型對(duì)其存在負(fù)效應(yīng)，說(shuō)明H-FABP基因?qū)θ赓|(zhì)嫩度影響顯著[37‐38]。本研究表明，H-FABP 基因與失水率呈正相關(guān)，與前人研究結(jié)果一致。LPL在脂蛋白運(yùn)輸和能量代謝方面發(fā)揮著重要作用，在豬、雞等動(dòng)物中將其作為影響背膘厚、肌間脂寬、腹脂重等性狀的候選基因[39]。本研究中，LPL 基因與粗蛋白、干物質(zhì)量呈顯著正相關(guān)。綿羊MC4R 基因與肉質(zhì)性狀密切相關(guān)[40]，本研究中MC4R 基因與剪切力、失水率呈顯著負(fù)相關(guān)，剪切力越小，肉越嫰，失水率越低，保水性越好。研究表明，CAST 基因?qū)∪饽鄱扔绊戯@著，增加CAST 基因表達(dá)會(huì)降低豬肉嫩度[41-43]。本研究中CAST 基因與熟肉率呈極顯著負(fù)相關(guān)，與失水率、粗蛋白呈顯著負(fù)相關(guān)，與干物質(zhì)呈顯著正相關(guān)，干物質(zhì)含量越高，水分越少，出肉率高。由此說(shuō)明，不同海拔藏綿羊肉質(zhì)指標(biāo)與肉質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)關(guān)系密切，因此可通過(guò)調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)量來(lái)提高藏綿羊肉的品質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)。

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（責(zé)任編輯：張冬玲）