胎盤11β-HSD的表達(dá)差異與雙胎生長不一致的關(guān)系

倪麗 朱暉

[摘要]?目的?研究胎盤11β-羥基類固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid?dehydrogenase，11β-HSD）的表達(dá)差異與雙胎生長不一致的關(guān)系。方法?選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對，根據(jù)雙胎出生體質(zhì)量差是否在20%及以上，分為雙胎生長不一致（discordant?twins，DT）組（實(shí)驗(yàn)組）及雙胎生長一致（concordant?twins，CT）組（對照組）。采用qRT-PCR法檢測兩組胎兒胎盤組織中11β-HSD1和11β-HSD2?mRNA的表達(dá)水平及差異。結(jié)果?兩組胎兒胎盤組織中11β-HSD1?mRNA的表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；CT組A孩與B孩的11β-HSD2?mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而DT組小孩胎盤11β-HSD2?mRNA的表達(dá)水平顯著低于DT組大孩的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論?胎盤11β-HSD2的表達(dá)差異可能與雙絨毛膜雙胎生長不一致的發(fā)生有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]?雙胎生長不一致；胎盤；11β-羥基類固醇脫氫酶；表達(dá)差異；雙絨毛膜雙胎

[中圖分類號]?R714??????[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]?A????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.14.011

Relationship?between?the?expression?difference?of?11β-HSD?in?placenta?with?discordant?twins

NI?Li1，?ZHU?Hui2

1.Department?of?Clinical?Pharmacy，?Affiliated?Hospital?of?Jiaxing?University，?Jiaxing?Maternity?and?Child?Health?Care?Hospital?in?Zhejiang?Province，?Jiaxing?314000，?Zhejiang，?China;?2.Department?of?Clinical?Obstetrics，?Affiliated?Hospital?of?Jiaxing?University，?Jiaxing?Maternity?And?Child?Health?Care?Hospital?in?Zhejiang?Province，?Jiaxing?314000，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?study?the?relationship?between?the?expression?difference?of?11β-hydroxysteroid?dehydrogenase?（11β-HSD）?in?placenta?with?discordant?twins.?Methods?Twelve?pairs?of?discordant?twins?（DT）?group?delivered?in?Jiaxing?Maternal?and?Child?Health?Hospital?from?January?2021?to?December?2022?were?selected?as?the?experimental?group，?and?15?pairs?of?concordant?twins?（CT）?group?were?selected?as?the?control?group.?The?mRNA?expression?levels?of?11β-HSD1?and?11β-HSD2?in?fetal?placenta?of?the?two?groups?were?detected?by?qRT-PCR.?Results?The?mRNA?expression?of?11β-HSD1?showed?no?significant?difference?between?two?groups?（P>0.05）.?The?mRNA?expression?of?11β-HSD2?did?not?statistically?significantly?differ?between?children?A?and?B?in?CT?group?（P>0.05），?while?the?smaller?children?had?a?lower?mRNA?expression?of?11β-HSD2?in?DT?group?（P<0.05）.?Conclusion?The?difference?of?placental?11β-HSD2?expression?may?be?related?to?the?occurrence?of?twin?growth?discordant.

[Key?words]?Twin?inconsistent?growth;?Placenta;?11β-Hydroxysteroid?dehydrogenase;?Expression?difference;?Dichorionic?twins

雙胎妊娠與單胎妊娠相比，具有更高的新生兒不良結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)，會顯著增加胎兒早產(chǎn)、生長受限的發(fā)生率[1-4]。因生長受限導(dǎo)致雙胎出生體質(zhì)量差異達(dá)到20%或更高時(shí)（即雙胎生長不一致），會顯著影響新生兒圍產(chǎn)期結(jié)局[3，5-9]。

導(dǎo)致雙胎生長不一致的高危因素有很多，近些年的研究都將重點(diǎn)放在了胎盤功能對胎兒生長發(fā)育的影響上[10-14]。11β-羥基類固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid?dehydrogenase，11β-HSD）是一種在胎盤表達(dá)，能夠使活性糖皮質(zhì)激素及其非活性代謝產(chǎn)物相互轉(zhuǎn)化的酶系，已被確認(rèn)會影響人類多種疾病的發(fā)病，但是目前尚無相關(guān)報(bào)道表明其對雙胎生長不一致的作用[15]。本研究以雙絨毛膜雙胎為研究對象，通過qRT-PCR法測定胎盤中11β-HSD的表達(dá)水平，從而研究其與雙胎生長不一致的關(guān)系。

1??對象與方法

1.1??研究對象

選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對，根據(jù)雙胎胎兒出生體質(zhì)量差是否在20%及以上，分為雙胎生長不一致（discordant?twins，DT）組（實(shí)驗(yàn)組）及雙胎生長一致（concordant?twins，CT）組（對照組）。收集兩組胎兒基本信息，DT組每對雙胎中體質(zhì)量較重胎兒為大孩、較輕胎兒為小孩，CT組因每對雙胎體質(zhì)量接近，故隨機(jī)分為A孩、B孩，本研究所有患者均簽署知情同意書，且經(jīng)筆者醫(yī)院倫理學(xué)委員會討論審議通過[倫理審批號：2020（醫(yī)倫）-1]。納入標(biāo)準(zhǔn)：??????①在嘉興市婦幼保健分娩；②孕婦病歷書寫資料完整；③雙絨毛膜雙胎妊娠、胎兒無畸形，雙胎出生體質(zhì)量差20%及以上者；④剖腹產(chǎn)胎兒娩出后收集胎兒胎盤組織，進(jìn)行qRT-PCR法進(jìn)行檢測；⑤獲得患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者病歷資料不完整；②非筆者醫(yī)院出生；③胎兒先天畸形；④妊娠合并雙胎生長不一致發(fā)生高危因素，如妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、妊娠期貧血等。

1.2??資料收集

通過院內(nèi)電子病歷系統(tǒng)，收集孕婦及新生兒相關(guān)資料：①孕婦基本信息：孕婦分娩時(shí)的年齡、胎兒娩出時(shí)的孕周、孕婦妊娠次數(shù)、分娩次數(shù)、是否通過輔助生殖技術(shù)妊娠、胎兒分娩時(shí)間、雙胎性別是否一致。②新生兒基本信息：孕期羊水深度是否有異常、臍動脈SD值是否異常、胎兒有無臍帶繞頸、胎盤形狀是否異常、胎兒的出生體質(zhì)量等。

1.3??11β-HSD1和11β-HSD2?mRNA水平測定

剖腹產(chǎn)當(dāng)天胎兒娩出后，取胎盤組織（母胎面即有臍帶面）2cm×2cm×2cm，生理鹽水或者BPS沖洗后放入EP管中，–80℃冰箱冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出組織按照廠家說明使用Trizol試劑制備總RNA，取RNA（1μg）、4μl?5×?PrimeScript?RT?Master?Mix和?RNase-free?水（補(bǔ)足至最終體積20μl）組成混合物；37℃?15min，85℃?5s進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，PCR擴(kuò)增是在ABI?7500序列檢測系統(tǒng)上進(jìn)行的。設(shè)計(jì)引物時(shí)，采用?Primer?5.0?軟件，合成由上海生工公司進(jìn)行，內(nèi)參選擇GAPDH序列：上游：5-CAAGGCTGTGGG?CAAGGT-3，下游：5-GGAAGGCCATGCCAGT?GA-3；11β-HSD1序列：上游：5-AAGTTGCAGTG?AGCCGAGATC-3，下游：5-TTCCGAGGCAGAGT?CTTGCT-3；11β-HSD2序列：上游：5-GGCC?AAGGTTTCCCAGTGA-3，下游：5-GAGGGTGT?TTGGGCTCATGA-3。11β-HSD1、11β-HSD2標(biāo)準(zhǔn)化為內(nèi)部對照GAPDH的含量（2-??Ct）。每個(gè)樣本重復(fù)分析3次計(jì)算平均表達(dá)量。按照TaKaRa?PrimeScript??RT?Master?Mix（Perfect?Real?Time）（Code?No.?RR036Q）說明書要求進(jìn)行PCR擴(kuò)增。測定均一式4份。

1.4??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料如果符合正態(tài)分布，則以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行t檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布則以中位數(shù)（四分?jǐn)?shù)間距）[M（P25，P75）]表示，行非參數(shù)軼和檢驗(yàn)（Mann-Whitney?U?test）。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（百分?jǐn)?shù)）[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??孕婦、胎兒基本情況比較

兩組孕婦一般臨床資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。兩組胎兒組間一般臨床資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.2??胎兒胎盤11β-HSD1、11β-HSD2?mRNA的表達(dá)比較

DT組小孩胎盤11β-HSD2?mRNA的相對表達(dá)量（2-??Ct值）與DT組大孩比，其表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；11β-HSD1?mRNA的相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而對CT組胎兒A孩與B孩胎盤11β-HSD1和11β-HSD2?mRNA的相對表達(dá)量進(jìn)行比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3??討論

雙胎生長不一致是雙胎妊娠比較常見的一種并發(fā)癥，與胎兒圍產(chǎn)期死亡率增加有關(guān)[16]。隨著輔助生殖技術(shù)的成熟，雙胎生長不一致的發(fā)生率日益增長，約為16%[17]。導(dǎo)致雙胎生長不一致的高危因素有許多，包括妊娠期高血壓、糖尿病、輔助生殖技術(shù)的使用、孕產(chǎn)史次數(shù)多、孕期增重過多、雙胎胎兒性別不同等[18]。本文對孕婦及胎兒相關(guān)混雜因素行Fisher確切概率法檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)兩組孕婦及胎兒組間一般臨床資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

遺傳差異和胎盤功能障礙是雙絨毛膜雙胎生長受限最常見的原因[19]。胎盤是聯(lián)系胎兒與母體之間的重要器官，它在胚胎發(fā)育過程中起著營養(yǎng)供給和代謝調(diào)節(jié)的作用[20]。11β-HSD是一種在胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的重要酶系，它參與糖皮質(zhì)激素（皮質(zhì)醇）的代謝調(diào)節(jié)，從而影響胎兒的生長發(fā)育。11β-HSD有兩個(gè)亞型：11β-HSD1、11β-HSD2，可氧化、還原糖皮質(zhì)激素[21]。有文獻(xiàn)研究了成年男性同卵雙胎臍周皮下脂肪組織11β-HSD1?mRNA的表達(dá)量差異，結(jié)果顯示，雙胎中體質(zhì)量較重者11β-HSD1?mRNA的表達(dá)水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）[22]。該文獻(xiàn)未對11β-HSD2的表達(dá)量進(jìn)行比較研究，是因其不在脂肪組織中表達(dá)[23]。該結(jié)果證明了11β-HSD的表達(dá)差異與雙胎體質(zhì)量差異存在關(guān)聯(lián)。

根據(jù)上述研究結(jié)果，本研究在兩組研究對象一般臨床資料無差異的前提下，采用qRT-PCR法檢測了11β-HSD1和11β-HSD2在兩組胎兒胎盤中的表達(dá)量。結(jié)果顯示11β-HSD1、11β-HSD2在DT組和CT組胎兒胎盤中均有表達(dá)。11β-HSD1的表達(dá)量在兩組胎兒胎盤中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。11β-HSD2在CT組A孩與B孩中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但在DT組小孩胎盤中的表達(dá)量與DT組大孩相比，明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這表明胎盤11β-HSD2的低表達(dá)可能與雙絨毛膜雙胎胎兒生長不一致的發(fā)生相關(guān)。雙絨毛膜雙胎可以認(rèn)為是概念上的單胎，因雙胎均有獨(dú)立的胎盤跟羊膜囊，只是碰巧生長在一個(gè)子宮里。因此，雙絨毛膜雙胎胎兒生長受限模式可以遵循單胎胎兒生長受限的模式。大量文獻(xiàn)研究已證實(shí)，單胎胎兒生長受限與胎盤11β-HSD2蛋白的低表達(dá)有關(guān)[24]。

但是截至目前，對于胎盤11β-HSD的表達(dá)差異與雙胎生長不一致的關(guān)系的研究還相對有限。本次研究樣本量較少，還需要進(jìn)一步積累資料來驗(yàn)證兩者之間的關(guān)系。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 任靜，?張海燕，?陳慧，?等.?雙胎妊娠絨毛膜性與妊娠結(jié)局的關(guān)系[J].?新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，?2023，?46（3）：?338–341.

[2] 謝育娣，?趙敏.?單絨毛膜性與雙絨毛膜性雙胎妊娠結(jié)局比較分析[J].?中國婦幼保健，?2023，?38（05）：?801–804.

[3] Practice?Bulletin?No.?159?Summary：?Management?of?preterm?Labor[J].?Obstet?Gynecol，?2016，?127（1）：?190–191.

[4] WEINER?E，?BARBER?E，?FELDSTEIN?O，?et?al.?The?placental?component?and?neonatal?outcome?in?singleton?vs.?twin?pregnancies?complicated?by?gestational?diabetes?mellitus[J].?Placenta，?2018，?63（2）：?39–44.

[5] 李姝，?余慕雪，?馮嘉麗，?等.?雙胎絨毛膜性、出生胎齡、出生體質(zhì)量不一致程度與新生兒結(jié)局分析[J].?中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），?2023，?44（6）：?1030–1037.

[6] 黃嘉琦，?魏瑗.?雙胎胎兒生長受限診斷與生長曲線研究[J].?中國計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，?2023，?15（12）：?10–13.

[7] HIERSCH?L，?BARRETT?J，?AVIRAM?A，?et?al.?Patterns?of?discordant?growth?and?adverse?neonatal?outcomes?in?twins[J].?Am?J?Obstet?Gynecol，?2021，?225（2）：?181–187.

[8] DANTONIO?F，?ODIBO?A?O，?PREFUMO?F，?et?al.?Weight?discordance?and?perinatal?mortality?in?twin?pregnancy：?systematic?review?and?Meta-analysis[J].?Ultrasound?Obstet?Gynecol，?2018，?52（1）：?11–23.

[9] JAHANFAR?S，?LIM?K，?OVIDEO-JOEKES?E.?Birth?weight?discordance?and?adverse?perinatal?outcomes[J].?J?Perinat?Med，?2017，?45（5）：?603–611.

[10] 陳曉燕，?朱元方.?影響胎兒生長發(fā)育不可忽視的多因素管控[J].?中國計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，?2023，?15（12）：?3–5.

[11] ASHWAL?E，?HIERSCH?L，?BERGER?H，?et?al.?Pathologic?basis?for?the?definition?of?discordant?growth?in?dichorionic?twins[J].?Fetal?Diagn?Ther，?2021，?48（4）：?279–287.

[12] SCHREY-PETERSEN?S，?BAUMER?S，?LOSSNER?U，?et?al.?Adipocyte?fatty?acid-binding?protein?4?is?altered?in?growth?discordant?dichorionic，?but?not?in?monochorionic?twins[J].?J?Endocr?Soc，?2020，?4（4）：?1–12.

[13] MORGAN?E?A，?SIDEBOTTOM?A，?VACQUIER?M，?et?al.?The?effect?of?placental?location?in?cases?of?placenta?accreta?spectrum[J].?Am?J?Obstet?Gynecol，?2019，?221（4）：?351–357.

[14] KALAFAT?E，?THILAGANATHAN?B，?PAPAGEORGHIOU?A，?et?al.?Significance?of?placental?cord?insertion?site?in?twin?pregnancy[J].?Ultrasound?Obstet?Gynecol，?2018，?52（3）：?378–384.

[15] 吳春麗，?李娟，?王晶，?等.?關(guān)于11β-類固醇脫氫酶的研究進(jìn)展[J].?海峽藥學(xué)，?2020，?32（4）：?177–180.

[16] PARK?Y?H，?KIM?Y?N，?IM?D?H，?et?al.?Neonatal?outcomes?between?discordant?monochorionic?and?dichorionic?twins[J].?J?Matern?Fetal?Neonatal?Med，?2021，?34（13）：?2080–2088.

[17] 李秋影，?張慧，?陳倩，?等.?輔助生殖技術(shù)對雙胎出生體質(zhì)量不一致的影響[J].?中國當(dāng)代兒科雜志，?2023，?25（12）：?1239–1245.

[18] 晏紅.?出生體質(zhì)量不一致雙胎臨床資料分析[D].?貴陽：?貴州醫(yī)科大學(xué)，?2022.

[19] LEWI?L，?DEVLIEGER?R，?DE?CATTE?L，?et?al.?Growth?discordance[J].?Best?Pract?Res?Clin?Obstet?Gynaecol，?2014，?28（2）：?295–303.

[20] 范秀軍，?黃晨，?陳指龍，?等.?妊娠期代謝性疾病與胎盤發(fā)育[J].?中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，?2018，?34（9）：?959–963.

[21] 廖建華，?李婉婷，?梁真嬌.?妊娠期糖尿病患者胎盤中不同亞型11β-羥類固醇脫氫酶基因的表達(dá)水平及其臨床意義[J].?廣西醫(yī)學(xué)，?2019，?41（16）：?2026–2030.

[22] VIHMA?V，?NAUKKARINEN?J，?TURPEINEN?U，?et?al.?Metabolism?of?sex?steroids?is?influenced?by?acquired?adiposity-A?study?of?young?adult?male?monozygotic?twin?pairs[J].?J?Steroid?Biochem?Mol?Biol，?2017，?172（2）：?98–105.

[23] KUPCZYK?D，?BILSKI?R，?KOZAKIEWICZ?M，?et?al.?11Beta-HSD?as?a?new?target?in?pharmacotherapy?of?metabolic?diseases[J].?Int?J?Mol?Sci，?2022，?23（16）：?8984–8998.

[24] 時(shí)雪婷.?孕期母體鎘暴露通過活性糖皮質(zhì)激素過暴露損害胎盤血管生成的機(jī)制探討[D].?合肥：?安徽醫(yī)科大學(xué)，?2021.

（收稿日期：2023–12–22）

（修回日期：2024–03–05）