急性心肌梗死病人血清Klotho表達及其與冠狀動脈病變程度和預后的關系

張虹 武宏偉 李慧杰 劉若凡 王欣悅

摘要 目的：檢測急性心肌梗死（AMI）病人血清Klotho表達水平并探討其與冠狀動脈病變程度和預后的關系。方法：以河北華奧醫(yī)院2018年1月—2020年8月收治的176例AMI病人作為AMI組，另選取同期健康體檢志愿者150人作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測兩組血清Klotho表達水平。依據SYNTAX評分將AMI組病人分為輕度病變組（60例）、中度病變組（65例）、重度病變組（51例）。隨訪2年，根據不同預后情況分為預后不良組（66例）、預后良好組（110例）。分析AMI病人血清Klotho表達水平與SYNTAX評分的關系；采用Kaplan-Meier生存曲線分析血清Klotho表達水平與AMI病人預后的關系；采用Cox回歸分析影響AMI病人不良預后的危險因素。結果：與對照組相比，AMI組血清Klotho表達水平明顯降低（P＜0.05）。輕度病變組、中度病變組、重度病變組血清Klotho表達水平依次顯著降低（P＜0.05）。與預后良好組相比，預后不良組血清Klotho表達水平明顯降低（P＜0.05）。Spearman相關性分析顯示，AMI病人血清Klotho表達水平與SYNTAX評分呈負相關（r＝－0.679，P＜0.001）。Kaplan-Meier法分析顯示，Klotho低表達組不良預后發(fā)生率顯著高于血清Klotho高表達組（χ²＝22.046，P＜0.001）。多因素Cox回歸分析表明，Klotho低表達是AMI病人不良預后的危險因素。結論：AMI病人血清Klotho表達水平降低，與AMI病人冠狀動脈病變程度及預后有關，有望成為預測AMI病人不良預后的生物標志物。

關鍵詞 急性心肌梗死；Klotho；冠狀動脈病變程度；預后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.03.023

作者單位 1.河北華奧醫(yī)院（河北張家口075051）；2.北京大學國際醫(yī)院（北京102206）

通訊作者 王欣悅，E-mail：smiuf54@163.com

引用信息 張虹，武宏偉，李慧杰，等.急性心肌梗死病人血清Klotho表達及其與冠狀動脈病變程度和預后的關系［J］.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2024，22（3）：521-525.

急性心肌梗死（AMI）是由于冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂后形成血栓，部分阻塞或完全阻塞血管，造成冠狀動脈的供血急劇減少或中斷繼而引發(fā)的缺血性心肌壞死^［1-3］。近年來，我國AMI死亡率呈不斷上升趨勢^［4］。經皮冠狀動脈介入術（PCI）是AMI的主要治療手段，能夠迅速重建血管，改善血流，但部分病人接受PCI后的預后較差^［5］。因此，尋找能夠準確評估病人預后的生物標志物有助于臨床醫(yī)師采取相應的干預措施改善預后情況。Klotho是一種參與抗衰老的內源性多效蛋白，有助于維持血管穩(wěn)態(tài)及心功能正常，其水平的下降與心血管病的發(fā)病和不良預后有關^［6］。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho基因能夠改善心肌梗死模型大鼠的氧化應激損傷^［7］。本研究通過檢測AMI病人血清Klotho表達水平，旨在探討其與AMI冠狀動脈病變程度及預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

以河北華奧醫(yī)院2018年1月—2020年8月收治的176例AMI病人作為AMI組，另選取同期健康體檢志愿者150人作為對照組。AMI組中男100例，女76例；年齡42～75（57.25±7.99）歲；體質指數（BMI）為（23.14±3.03）kg/m²。對照組中男84人，女66人；年齡41～74（58.20±7.64）歲；BMI（22.94±3.19）kg/m²。AMI組、對照組性別構成比、年齡、BMI比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。根據AMI病人SYNTAX評分^［8］分為輕度病變組（0～22分，60例）、中度病變組（23～32分，65例）和重度病變組（≥33分，51例）。

AMI病人納入標準：1）AMI病人符合《急性ST段抬高心肌梗死診斷和治療指南》^［9］中急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）或《不穩(wěn)定性心絞痛和非ST段抬高心肌梗死診斷與治療指南》^［10］中急性非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）判定標準，并經醫(yī)生檢查確診；2）發(fā)病12 h內接受PCI術；3）臨床資料完整。排除標準：1）患有先天性心臟病、風濕性心臟病等其他類型心臟病病人；2）合并腫瘤、感染性疾病、自身免疫缺陷病病人；3）既往接受過PCI術或冠狀動脈搭橋治療病人；4）有PCI禁忌證病人；5）肝、腎等重要器官嚴重功能障礙病人；6）治療或住院期間死亡病人。本研究獲取河北華奧醫(yī)院倫理委員會批準，受試者及其家屬對本研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集

病人入院后，收集病人一般資料。1）人口學資料：年齡、性別、BMI、吸煙史；2）合并癥及相關資料：高血壓史、高脂血癥史、糖尿病史、心肌梗死類型、SYNTAX評分、Killip分級；3）生化指標：總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、心肌肌鈣蛋白T（cTnT）、N-末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）、D-二聚體（D-D）。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清Klotho表達水平

收集AMI病人入院時及健康體檢志愿者體檢當日肘靜脈血5 mL，4 ℃下3 000 r/min離心15 min，分離血清，儲存于－80 ℃冰箱冷凍待測。按照ELISA試劑盒（貨號：69-24996，購自武漢默沙克生物科技有限公司）說明書檢測血清Klotho表達水平。

1.2.3 隨訪

AMI病人接受PCI術后對其進行隨訪。以電話或門診復查的方式進行，第1年每隔3個月進行1次隨訪，之后每隔6個月進行1次隨訪，隨訪時長為24個月。以此期間病人發(fā)生死亡、惡性心律失常、心力衰竭、心源性休克、復發(fā)心肌梗死等為不良預后，病人出現(xiàn)預后不良事件為終點事件。本研究隨訪截至2022年8月。根據AMI病人預后情況分為預后不良組（66例）、預后良好組（110例）。

1.3 統(tǒng)計學處理

利用SPSS 25.0軟件分析數據。定量資料經檢驗符合正態(tài)分布，以均數±標準差（x^-±s）表示，兩組比較行t檢驗；3組比較行單因素方差分析，進一步兩兩比較行SNK-q檢驗；不符合正態(tài)分布的定量資料以中位數和四分四分位間距［M（Q₁，Q₃）］表示，兩個獨立樣本比較行Mann-Whitney U檢驗，3個獨立樣本比較行Kruskal-Wallis H檢驗。定性資料采用例數和百分比（%）表示，組間比較采取χ²檢驗；Spearman相關性分析AMI組病人血清Klotho表達水平與SYNTAX評分的相關性；Kaplan-Meier生存曲線分析血清Klotho表達水平與AMI病人預后的關系；Cox回歸分析影響AMI病人不良預后的危險因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 AMI組與對照組血清Klotho表達水平比較

AMI組血清Klotho表達水平為（305.93±79.75）ng/L，明顯低于對照組的（1 146.36±276.69）ng/L（t＝－38.474，P＜0.001）。

2.2 不同冠狀動脈病變程度AMI病人血清Klotho表達水平及SYNTAX評分比較

輕度病變組、中度病變組、重度病變組血清Klotho表達水平依次顯著降低（P＜0.05），SYNTAX評分依次顯著升高（P＜0.05）。詳見表1。

2.3 AMI病人血清Klotho表達水平與SYNTAX評分的相關性

Spearman相關性分析顯示，AMI病人血清Klotho表達水平與SYNTAX評分呈負相關（r＝－0.679，P＜0.001）。詳見圖1。

2.4 不同預后AMI病人臨床資料及血清Klotho表達水平比較

預后不良組AMI病人Killip分級≥3級比例、SYNTAX評分、cTnT、NT-proBNP、D-D水平均顯著高于預后良好組（P＜0.05），血清Klotho表達水平明顯低于預后良好組（P＜0.05）；兩組年齡、性別、BMI、吸煙史、高血壓史、高脂血癥史、糖尿病史、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Scr、BUN水平、心肌梗死類型比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表2。

2.5 血清Klotho表達水平與AMI病人預后的關系

以血清Klotho表達水平平均值305.93 ng/L將AMI組病人分為低表達組（89例）和高表達組（87例）。預后不良病人66例，發(fā)生率為37.50%。Klotho低表達組不良預后48例，發(fā)生率為53.93%，Klotho高表達組不良預后18例，發(fā)生率為20.69%。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，Klotho低表達組不良預后發(fā)生率顯著高于Klotho高表達組（χ²＝22.046，P＜0.001）。詳見圖2。

2.6 Cox回歸分析影響AMI病人預后的危險因素

以AMI病人預后情況為因變量，以不良預后AMI病人臨床資料及血清Klotho表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義的指標為自變量，進行Cox回歸分析。單因素Cox回歸分析和多因素Cox回歸分析均表明，Killip分級（≥3級）、SYNTAX高評分、cTnT高表達、NT-proBNP高表達、Klotho低表達是AMI病人不良預后的危險因素（P＜0.05）。詳見表3。

3 討 論

AMI是一種起病迅速、病情兇險的心血管危急重癥。隨著醫(yī)學技術的不斷進步，越來越多的血液生物標志物被證實對AMI病人的預后具有一定的預測效能^［11］，但AMI病理機制復雜，同時由于病人個體差異的存在，目前依然存在著死亡率較高及預后差的現(xiàn)象，臨床仍需不斷探索與AMI病變程度及預后相關的生物標志物，以期為AMI的治療及改善預后提供一定的理論依據。

人Klotho基因位于第13號染色體上，其編碼的Klotho蛋白與動脈粥樣硬化、左心室肥厚等多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關^［12］。有研究發(fā)現(xiàn)，冠心病病人血清Klotho表達顯著降低^［13］。另有研究發(fā)現(xiàn)，心肌梗死模型大鼠心肌組織中Klotho表達降低^［7］，這與本研究中AMI組血清Klotho表達水平降低的結果一致。Najafipour等^［14］研究發(fā)現(xiàn)，適宜強度的運動訓練能夠增加心肌梗死大鼠血清Klotho表達，進而改善其心臟功能。心肌梗死使局部組織由于缺血、缺氧導致再灌注損傷，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶、黃嘌呤氧化酶等產生大量的氧自由基，引起氧化應激反應，對心肌細胞造成損傷^［7］，此時Klotho能夠通過增強超氧化物歧化酶的活性，減少活性氧的產生發(fā)揮抗氧化應激的作用^［12］，Klotho被不斷消耗，表達下調。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI病人血清Klotho表達水平明顯降低，這一結果與Xu等^［7］研究結果一致，且輕度病變組、中度病變組、重度病變組血清Klotho表達水平依次顯著降低，AMI病人血清Klotho表達與反映冠狀病變程度的SYNTAX評分呈負相關，提示Klotho參與AMI的病情進展過程，AMI病人病情越嚴重，氧化應激反應越劇烈，Klotho充當抗氧化劑被消耗越多，表達水平越低，檢測血清Klotho表達能夠反映病人病情的嚴重程度，有助于輔助臨床制定相應的治療措施。此外，Klotho在AMI中發(fā)揮作用還可能與Wnt信號通路有關。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho敲低會加重轉化生長因子-β₁（TGF-β₁）誘導的心臟纖維化和Wnt信號傳導的激活^［15］。另有細胞實驗發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化中泡沫細胞的形成會導致Klotho的減少，重組Klotho蛋白能夠通過抑制THP-1巨噬細胞衍生泡沫細胞中的Wnt/β-catenin信號傳導通路的活化促進膽固醇的代謝，減少脂質積累^［16］。Klotho在AMI的作用可能與氧化應激及Wnt/β-catenin等信號傳導通路有關，但需要進一步研究證實。

通過生存分析發(fā)現(xiàn)，血清Klotho低表達的AMI病人不良預后的發(fā)生率更高，Cox回歸分析表明Klotho低表達是影響病人預后的危險因素，說明血清Klotho具有評估病人預后的潛力，其有助于臨床判斷病人預后情況。推測AMI發(fā)生時，心肌缺血缺氧，炎癥反應和氧化應激通路被激活，Klotho為保護心肌細胞被大量消耗，Klotho越低，炎性反應和氧化應激對心臟造成的損傷越嚴重，發(fā)生不良預后的可能性就越大。同時本研究發(fā)現(xiàn)，Killip分級、SYNTAX評分、cTnT、NT-proBNP與AMI預后有關。Killip分級和SYNTAX評分分別反映AMI病人心臟功能和冠狀動脈病變嚴重程度。cTnT在心肌細胞受損時能夠迅速從細胞釋放進入血液循環(huán)，是心肌損傷的標志物。NT-proBNP由心肌壁受壓后心室應答產生，兩者高表達已被證實與AMI病人的不良預后有關^［17-18］。臨床評估病人的預后應綜合考慮各種指標，結合病人個體差異制定有效的干預措施。

綜上所述，AMI病人血清Klotho表達水平降低與病人冠狀動脈病變程度及預后有關，可為臨床評估病人病情及預后提供一定的理論依據。但本研究納入樣本數量較少，研究內容不夠全面，同時并未對Klotho在AMI中的具體作用機制進行探討。后續(xù)將擴大樣本量，關注國內外關于Klotho在AMI中作用的最新報道，開展動物實驗或細胞實驗，進一步深入研究。

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（收稿日期：2022-11-04）

（本文編輯 王雅潔）