醒腦靜注射液“異病同治”急性腦梗死與急性腦出血作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

彭景 陳星 呂秋藝 宋蕾 鄒憶懷

摘要? 目的：采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討醒腦靜注射液“異病同治”急性腦梗死（ACI）與急性腦出血（ACH）的作用機(jī)制。方法：利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫及分析平臺(tái)（TCMSP）與中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫（TCMID）獲得醒腦靜注射液的有效成分及其作用靶點(diǎn)，同時(shí)利用人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards）、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫（OMIM）、遺傳藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫（PharmGkb）、治療目標(biāo)數(shù)據(jù)庫（TTD）和藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫（DrugBank）等數(shù)據(jù)庫獲取ACI和ACH潛在的基因靶點(diǎn)，在DIAGRAMS平臺(tái)內(nèi)繪制共同靶點(diǎn)韋恩圖。采用Cytoscape 3.9軟件構(gòu)建醒腦靜注射液“藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。利用STRING構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行拓?fù)浞治?。通過R/BioConductor對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（GO）及京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。結(jié)果：篩選共得到醒腦靜注射液藥物活性成分68種，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)基因583個(gè)，ACI潛在靶點(diǎn)3 597個(gè)，ACH潛在靶點(diǎn)3 959個(gè)，三者共同靶點(diǎn)299個(gè)；PPI網(wǎng)絡(luò)核心蛋白包括血管內(nèi)皮生成因子A（VEGFA）、JUN轉(zhuǎn)錄因子（JUN）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）、清蛋白（ALB）、胱天蛋白酶 3（CASP3）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 1（AKT1）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）3、低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、表皮生長因子受體（EGFR）、表皮生長因子（EGF）、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2）、IL-1β、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）等；其主要生物學(xué)通路涉及脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、MAPK信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、TNF信號(hào)通路、凋亡、IL-17信號(hào)通路等。結(jié)論：醒腦靜注射液通過抗氧化應(yīng)激、抗炎癥反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡和促血管生成等作用機(jī)制達(dá)到“異病同治”ACI和ACH的療效。

關(guān)鍵詞? 急性腦梗死；急性腦出血；醒腦靜注射液；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；異病同治

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.02.005

Mechanism of "Different Diseases with Same Treatment" with Xingnaojing Injection for the Treatment of Acute Cerebral Infarction and Acute Cerebral Hemorrhage Based on Network Pharmacology

PENG Jing， CHEN Xing， LYU Qiuyi， SONG Lei， ZOU Yihuai

Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China; Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China

Corresponding Author? ZOU Yihuai， E-mail： zouyihuai2004@163.com

Abstract? Objective：To explore the mechanism of "different diseases with same treatment" of Xingnaojing injection for? treating acute cerebral infarction（ACI） and acute cerebral hemorrhage（ACH） by network pharmacology.Methods：The effective components and the targets of Xingnaojing injection were obtained by Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform（TCMSP） and Traditional Chinese Medicine Integrated Database（TCMID）.The potential gene targets of ACI and ACH were obtained by GeneCards，OMIM，PharmGkb，TTD，and DrugBank.The common target Venn diagram was drawn by DIAGRAMS.The interaction network of "drugs-active ingredients-potential targets" was constructed by Cytoscape 3.9 software.Finally，the protein-protein interaction（PPI） network was constructed by STRING and topology analysis was carried out.Gene ontology（GO） and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG） enrichment of common targets were analyzed by R/BioConductor.Results：There were 68 active components of Xingnaojing injection，583 corresponding target genes，of which 3 597 potential targets were related to ACI，3 959 potential targets were related to ACH，and there were 299 common targets.PPI network core proteins included vascular endothelial growth factor A（VEGFA），JUN，signal transducers and activators of transcription 3（STAT3），interleukin（IL）-6，tumor necrosis factors（TNF），serum albumin（ALB），caspase-3（CASP3），protein kinase（AKT）1，mitogen activated protein kinase（MAPK）3，hypoxia-inducible factor-1α（HIF-1α），epidermal growth factor receptor（EGFR），epidermal growth factor（EGF），recombinant prostaglandin endoperoxide synthase 2（PTGS2），IL-1β，matrix metalloproteinase 9（MMP-9）;mainly pathway involved in lipid and arteriosclerosis，MAPK signal pathway，fluid shear stress and arteriosclerosis，TNF signal pathway， apoptosis，IL-17 signal pathway and so on.Conclusion：Xingnaojing injection achieves the therapeutic effect on ACI and ACH by anti-oxidative stress，anti-inflammatory reaction，anti-apoptosis，and promoting angiogenesis.

Keywords? ??acute cerebral infarction; acute cerebral hemorrhage; Xingnaojing injection; network pharmacology; different diseases with same treatment

基金項(xiàng)目? 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81904285）；北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.7182104）

作者單位? 1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院（北京 100700）；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)（北京 100029）

通訊作者? 鄒憶懷，E-mail：zouyihuai2004@163.com

引用信息? 彭景，陳星，呂秋藝，等.醒腦靜注射液“異病同治”急性腦梗死與急性腦出血作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（2）：231-238.

急性腦梗死（acute cerebralinfarction，ACI）與急性腦出血（acute cerebral hemorrhage，ACH）為常見的兩種腦血管急癥，合稱為腦卒中，是由于腦部血管突發(fā)阻塞或破裂，血液不能流入大腦而導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧性損傷［1］，具有起病急、病情進(jìn)展迅速的特點(diǎn)，以其高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率嚴(yán)重危害人類的健康［2］。因此，ACI和ACH的診療策略以及藥物腦保護(hù)機(jī)制一直是腦損傷防治領(lǐng)域的研究重點(diǎn)，現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)治療中聯(lián)合醒腦靜注射液可有效提高腦卒中病人的臨床療效，在改善ACI和ACH神經(jīng)功能缺損方面有效且安全［3-6］。

醒腦靜注射液方藥源自臨床使用200余年的經(jīng)典急救名方“安宮牛黃丸”，由麝香、冰片、梔子和郁金4味中藥經(jīng)科學(xué)提取精制而成，是國內(nèi)唯一獲批用于腦缺血和出血性腦卒中急救的中藥注射液［7］。方中麝香、冰片氣味芳香走竄，能通諸竅不利，為通竅醒腦之要藥，又擅瀉火毒、化瘀血、散熱結(jié)；梔子、郁金性味苦寒、清熱瀉火、涼血解毒、化痰開郁，清利三焦痰瘀熱邪，并助開竅通絡(luò)。諸藥合用，共奏開竅醒腦、安神定志、清熱解毒、鎮(zhèn)驚止痛、涼血行氣之功，有“異病同治”之效。但其處方組成的合理性及作用機(jī)制的科學(xué)內(nèi)涵尚未闡明，遂本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)醒腦靜注射液“異病同治”ACI和ACH的有效成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測分析，以期進(jìn)一步揭示其藥理作用，為醒腦靜注射液臨床應(yīng)用推廣和作用機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1? 資料與方法

1.1? 醒腦靜注射液活性成分與靶點(diǎn)篩選

運(yùn)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫及分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）與中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫（Traditional Chinese Medicines Integrated Database，TCMID），分別以“麝香”“冰片”“郁金”“梔子”為關(guān)鍵詞檢索其活性成分，通過PubChem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）分別查找各活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，導(dǎo)入Swiss ADME平臺(tái)（http：//www.swissadme.ch/）篩選，符合“胃腸吸收度”為“high”，以及“類藥性”的5個(gè)過濾器屬性值中有2項(xiàng)或以上為“yes”的通過篩選，獲取有效成分。運(yùn)用Swiss Target Prediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）預(yù)測各有效成分的靶點(diǎn)，設(shè)置“probability＞0”的靶點(diǎn)為有效靶點(diǎn)，運(yùn)用UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）統(tǒng)一將蛋白質(zhì)靶點(diǎn)信息標(biāo)準(zhǔn)化為相應(yīng)的UniProt ID。收錄符合條件的活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。

1.2? ACI和ACH潛在疾病靶點(diǎn)篩選

分別以“acute cerebral infarction”和“acute cerebral hemorrhage”為檢索詞，從人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards，https：//www.genecards.org/）、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫（OMIM，https：//omim.org/）、遺傳藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫（PharmGkb，https：//www.pharmgkb.org/）、治療目標(biāo)數(shù)據(jù)庫（TTD，http：//db.idrblab.net/ttd/）和藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫（DrugBank，https：//www.drugbank.com/）中檢索，合并5個(gè)數(shù)據(jù)庫信息，去重后得到ACI和ACH潛在靶點(diǎn)。

1.3? 共同靶點(diǎn)獲取

利用DIAGRAMS（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）在線工具平臺(tái)，將醒腦靜注射液各活性成分靶點(diǎn)與ACI、ACH疾病潛在靶點(diǎn)分別導(dǎo)入，取交集并繪制韋恩圖。

1.4? “藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用Cytoscape 3.9軟件導(dǎo)入所獲得的藥物活性成分、潛在靶點(diǎn)等信息及相互作用關(guān)系，構(gòu)建醒腦靜注射液治療ACI、ACH的“藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)”可視化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

1.5? 蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與拓?fù)浞治?/p>

將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org/），設(shè)定物種為“Homo sapiens”，同時(shí)去掉游離的靶點(diǎn)，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。將PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.9軟件并利用CytoNCA APP進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，先以Betweenness值＞61為標(biāo)準(zhǔn)篩選，再提取Degree值排前15位的靶點(diǎn)作為核心蛋白靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.6? 基因本體（gene ontology，GO）及京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析

在BioConductor檢索“DOSE”“clusterProfiler”“enrichplot”“pathview”安裝語言，并在R中安裝，同時(shí)安裝“colorspace”“stringi”“ggplot2”。對(duì)篩選的共同靶點(diǎn)進(jìn)行靶點(diǎn)GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，篩選出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的生物學(xué)過程和信號(hào)通路，均以P＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)。并將KEGG富集分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.9軟件進(jìn)行拓?fù)浞治?，?gòu)建KEGG關(guān)系網(wǎng)絡(luò)。

2? 結(jié)? 果

2.1? 醒腦靜注射液藥物活性成分與靶點(diǎn)預(yù)測

依照上述檢索與篩選標(biāo)準(zhǔn)，收集醒腦靜注射液藥物有效成分信息見表1，去重后獲得活性成分68個(gè)及相應(yīng)靶點(diǎn)基因583個(gè)。

2.2? 醒腦靜注射液“異病同治”ACI和ACH潛在靶點(diǎn)篩選

通過GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD和DrugBank等數(shù)據(jù)庫收集并去重后獲得ACI潛在靶點(diǎn)3 597個(gè)及ACH潛在靶點(diǎn)3 959個(gè)，與藥效靶點(diǎn)取交集后得到299個(gè)共同靶點(diǎn)，視為醒腦靜注射液治療ACI和ACH“異病同治”效應(yīng)潛在的作用靶點(diǎn)。詳見圖1。

圖1? 醒腦靜注射液治療ACI和ACH靶點(diǎn)韋恩圖

2.3? “藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將醒腦靜注射液藥物活性成分與ACI、ACH藥效作用靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9軟件，構(gòu)建“藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖（見圖2），共有367個(gè)節(jié)點(diǎn)（包括68個(gè)活性成分及299個(gè)潛在靶點(diǎn)基因）和1 244條邊，許多靶點(diǎn)可以通過多種活性成分進(jìn)行調(diào)控，并存在單個(gè)活性成分與多個(gè)靶點(diǎn)的相互作用。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龅玫礁鞴?jié)點(diǎn)度值，Degree值排名前10位的核心活性成分及其詳細(xì)信息見表2，Degree值排名前10位的潛在靶點(diǎn)為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2）、細(xì)胞色素P450 19A1酶（CYP19A1）、羥基類固醇脫氫酶11β1（HSD11B1）、花生四烯酸-5-脂加氧酶（ALOX5）、性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）、乙酰膽堿酯酶（ACHE）、雌激素受體1（ESR1）、細(xì)胞色素P450 17A1酶（CYP17A1）、雌激素受體2（ESR2）、組織蛋白酶K（CTSK）等。

2.4? PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及拓?fù)浞治?/p>

通過STRING數(shù)據(jù)庫和Cytoscape 3.9軟件對(duì)上述299個(gè)醒腦靜注射液作用靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用信息分析并構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，運(yùn)用CytoNCA APP進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，根?jù)Betweenness值和Degree值篩選出核心蛋白網(wǎng)絡(luò)，包括血管內(nèi)皮生成因子A（VEGFA）、JUN轉(zhuǎn)錄因子（JUN）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子（TNF）、清蛋白（ALB）、胱天蛋白酶（CASP）3、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 1（AKT1）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）3、低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、表皮生長因子受體（EGFR）、表皮生長因子（EGF）、PTGS2、IL-1β、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）等。詳見圖3。

2.5? GO富集分析結(jié)果

將醒腦靜注射液治療ACI和ACH的299個(gè)作用靶點(diǎn)基因?qū)隦軟件進(jìn)行富集分析，GO分析排前10位的結(jié)果見圖4，其中，生物過程（biological process，BP）主要涉及對(duì)外源性刺激的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、傷口愈合、脂多糖反應(yīng)等；細(xì)胞組分（cellular component，CC）包括膜微結(jié)構(gòu)域、膜筏、細(xì)胞-基底連接、黏著斑、神經(jīng)元細(xì)胞體等；分子功能（molecular function，MF）主要富集在蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶活性、內(nèi)肽酶活性、血紅素結(jié)合、跨膜受體蛋白激酶活性、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等。

2.6? KEGG富集分析及關(guān)系網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

KEGG富集分析結(jié)果顯示P＜0.05的醒腦靜注射液治療ACI和ACH的信號(hào)通路共176條，主要相關(guān)通路為脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、MAPK信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、TNF信號(hào)通路、凋亡、IL-17信號(hào)通路等。詳見圖5。將KEGG富集分析結(jié)果與相關(guān)基因靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9軟件進(jìn)行拓?fù)浞治?，?gòu)建KEGG關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，圖形大小代表連接節(jié)點(diǎn)的數(shù)量，可見MAPK3、MAPK1、AKT1、RELA癌基因（RELA）、螺旋環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)域擴(kuò)散激酶（CHUK）、核因子κB（NF-κB）激酶亞基β抑制因子（IKBKB）、STAT3、MAPK10、MAPK8、MAPK9、絲裂原激活蛋白激酶激酶1（MAP2K1）、CASP、MAPK14、JUN、NF-κB抑制因子α（NFKBIα）等可能是醒腦靜注射液治療ACI和ACH的核心靶點(diǎn)。詳見圖6。繪制與ACI、ACH關(guān)系密切的2條信號(hào)通路機(jī)制圖。詳見圖7。

3? 討? 論

ACI和ACH為臨床難治性疾病，其病理機(jī)制分別為腦組織缺血性和出血性損傷，學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)同二者病理生理過程中引發(fā)的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、興奮性毒性等復(fù)雜的生化和分子機(jī)制相互關(guān)聯(lián)，參與腦缺血、腦水腫、血腦屏障通透性改變和神經(jīng)元凋亡等一系列神經(jīng)系統(tǒng)損害［8］。且臨床研究證實(shí)醒腦靜注射液通過減輕免疫炎性反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激損傷、參與新生血管形成等機(jī)制保護(hù)受損腦組織，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，應(yīng)用于腦血管疾病療效肯定［9］。而從中醫(yī)學(xué)角度來看，ACI和ACH統(tǒng)稱“中風(fēng)病”，其中ACI源于風(fēng)火痰瘀、痹阻腦絡(luò)，而ACH源于風(fēng)火灼傷腦絡(luò)、絡(luò)破血溢，均致氣血逆亂、上擾腦竅、神明失用，為中風(fēng)病之核心病機(jī)［10］，表現(xiàn)為突然昏仆、半身不遂、口舌歪斜、言語謇澀或不語、偏身麻木等典型癥狀［11］。中風(fēng)病急性期標(biāo)實(shí)癥狀突出，本著“急則治其標(biāo)”的原則，早期圍繞核心病機(jī)予醒腦開竅、醒神回厥治法，對(duì)證首選醒腦靜注射液涼血解毒、開竅醒腦、行氣活血，進(jìn)行共性治療?？梢?，ACI和ACH的中醫(yī)核心病機(jī)與西醫(yī)病理機(jī)制共同為醒腦靜注射液“異病同治”的基礎(chǔ)。

本研究通過數(shù)據(jù)庫篩選與網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建發(fā)現(xiàn)，醒腦靜注射液“異病同治”ACI和ACH的關(guān)鍵活性成分有槲皮素、梔子苷、桑色素、青蒿素和山柰酚等，可調(diào)節(jié)醒腦靜注射液治療的大多數(shù)靶點(diǎn)，且均可透過血腦屏障對(duì)ACI和ACH后受損的神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生良好的保護(hù)作用。槲皮素具有抗氧化反應(yīng)、清除自由基、抗炎、抗血栓、抑制細(xì)胞凋亡的獨(dú)特神經(jīng)保護(hù)作用，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理過程中可作為一種神經(jīng)保護(hù)物質(zhì)［12］。梔子苷營養(yǎng)神經(jīng)的作用顯著，Chiu等［13］在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中證實(shí)其能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞神經(jīng)突生長，并伴有神經(jīng)元分化，可能與作用于MAPK/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）信號(hào)通路有關(guān)，亦有研究認(rèn)為其抗氧化和解毒功能也是腦保護(hù)的機(jī)制之一［14］。桑色素可通過下調(diào)炎性遞質(zhì)NF-κB、Toll樣受體4（TLR4）和多聚ADP核糖聚合酶1（PARP1）等的表達(dá)而抑制炎性反應(yīng)，促進(jìn)腦缺血受損神經(jīng)功能的恢復(fù)［15］。青蒿素是治療瘧疾最有效的藥物之一，此外，研究表明青蒿素及其衍生物可抵抗氧化應(yīng)激來發(fā)揮營養(yǎng)和保護(hù)神經(jīng)的作用［16-17］。山柰酚通過調(diào)節(jié)NF-κB、p38MAPK和AKT等重要的炎癥信號(hào)通路，促進(jìn)抗炎和抗氧化應(yīng)激作用［18］，從而發(fā)揮多種腦神經(jīng)保護(hù)功能。

通過STRING數(shù)據(jù)庫對(duì)醒腦靜注射液“異病同治”ACI和ACH的共同靶點(diǎn)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)顯示，核心靶點(diǎn)包括VEGFA、JUN、STAT3、IL-6、TNF、ALB、CASP3、AKT1、MAPK3、HIF-1α、EGFR、EGF、PTGS2、IL-1β、MMP-9等。主要涉及以下機(jī)制，1）血管生成方面：EGFR協(xié)同EGF具有促進(jìn)神經(jīng)再生的功能，研究證實(shí)激活EGFR可增加神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和存活，減少缺血性腦損傷［19］。HIF-1α是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫和炎癥的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)和活性受到細(xì)胞氧濃度與EGFR的嚴(yán)密調(diào)控，并通過控制血管生成來調(diào)節(jié)氧的運(yùn)輸能力，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)低氧的耐受［20］。VEGFA為HIF-1α的下游基因，在腦損傷和缺氧的雙重刺激下，通過誘導(dǎo)血管生成、進(jìn)行血供重建而提高神經(jīng)保護(hù)［21］。故推測醒腦靜注射液減輕ACI和ACH神經(jīng)系統(tǒng)損害的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HIF-1α/VEGFA通路促進(jìn)腦梗死后血管新生、修復(fù)受損血腦屏障有關(guān)。2）細(xì)胞凋亡方面：Caspase-3是涉及細(xì)胞凋亡的半胱天冬酶家族成員，已被公認(rèn)為神經(jīng)元凋亡的關(guān)鍵介質(zhì)［22］。JUN可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，加重腦缺血/再灌注過程誘導(dǎo)的損傷［23］。此外，STAT3和AKT1與腦卒中后神經(jīng)元細(xì)胞凋亡亦有著密切關(guān)系［24］。3）炎癥反應(yīng)方面：ACI早期免疫系統(tǒng)激活誘發(fā)炎癥細(xì)胞的積累和炎性細(xì)胞因子（IL-6、TNF、IL-1β、MMP-9）的釋放，是導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡、神經(jīng)系統(tǒng)受損的主要因素［25］。此外，大腦中PTGS2是合成前列腺素的核心酶介，后者介導(dǎo)神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)同時(shí)，使腦血管過度擴(kuò)張引發(fā)疼痛［26］。以上核心作用靶點(diǎn)表明醒腦靜注射液可能通過促血管生成、抗細(xì)胞凋亡、抗炎癥反應(yīng)等機(jī)制發(fā)揮中藥多靶點(diǎn)“異病同治”的特性。

進(jìn)一步運(yùn)用GO及KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)，相關(guān)靶點(diǎn)富集通路與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，而動(dòng)脈粥樣硬化是ACI和ACH發(fā)生、發(fā)展最重要的病理生理機(jī)制，亦為獨(dú)立危險(xiǎn)因素［27］。早期機(jī)體脂質(zhì)代謝障礙、纖維組織增生、鈣沉積，致使動(dòng)脈血管內(nèi)膜增厚，從而形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，病變繼續(xù)加重則可出現(xiàn)斑塊鈣化、粥樣潰瘍、血栓形成和斑塊內(nèi)出血等繼發(fā)病變，導(dǎo)致顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄、堵塞或破裂［28］，引發(fā)ACI和ACH病理改變?？梢娭|(zhì)代謝異常是動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)，而流體剪切應(yīng)力則代表血流施加在血管內(nèi)皮的摩擦力，其下降是動(dòng)脈粥樣硬化和血管炎癥的促成條件［29］。隨著動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積的不斷增加，ACI、ACH病情嚴(yán)重程度與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)亦增加，故現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用腦卒中后強(qiáng)化降脂治療的策略。此外，其他途徑如MAPK家族的信號(hào)通路可以被各種炎癥、損傷、應(yīng)激等激活，在ACI和ACH炎癥反應(yīng)、神經(jīng)退行性病變和神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程中均發(fā)揮重要的作用［30-32］，已被視為缺血性和出血性腦血管疾病的潛在治療靶點(diǎn)；神經(jīng)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的激活會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元喪失，被認(rèn)為是繼發(fā)性腦損傷的主要病理變化之一，造成神經(jīng)功能損傷進(jìn)行性發(fā)展［33］；TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)在ACI和ACH病程進(jìn)展中一方面能夠損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促使動(dòng)脈粥樣硬化及不穩(wěn)定斑塊的破裂，另一方面增加血腦屏障通透性，導(dǎo)致腦水腫及組織壞死，并致預(yù)后不良［34］。

基于以上認(rèn)識(shí)，近年來，阻斷相關(guān)通路的藥物一直是ACI和ACH藥效機(jī)制研究的熱點(diǎn)，值得注意的是，本研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜注射液可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化及炎癥相關(guān)通路從而修復(fù)受損的血管內(nèi)皮系統(tǒng)，減輕血管炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制腦損傷的進(jìn)展，為ACI和ACH神經(jīng)保護(hù)擴(kuò)展新的治療手段。

4? 小? 結(jié)

綜上所述，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步探究醒腦靜注射液“異病同治”ACI和ACH的分子生物學(xué)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)醒腦靜注射液可能通過槲皮素、梔子苷、桑色素、青蒿素和山柰酚等主要活性成分，作用于VEGFA、JUN、STAT3、IL-6、TNF、ALB、CASP3、AKT1、MAPK3、HIF-1α、EGFR、EGF、PTGS2、IL-1β、MMP-9等核心靶點(diǎn)，涉及脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、MAPK信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、TNF信號(hào)通路、凋亡、IL-17信號(hào)通路等多條通路，發(fā)揮抗氧化應(yīng)激、抗炎癥反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡和促血管生成的作用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)ACI和ACH腦損傷的保護(hù)與修復(fù)，具有多成分、多靶點(diǎn)、多通道協(xié)同作用、異病同治的特點(diǎn)。

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（收稿日期：2023-02-17）

（本文編輯王麗）