高產(chǎn)色素低產(chǎn)桔青霉素紅曲霉菌篩選及發(fā)酵工藝優(yōu)化研究

殷倩倩 左勇

摘要：該研究通過擴(kuò)大菌株分離源，選育優(yōu)質(zhì)紅曲霉菌M7-5。以該菌株為發(fā)酵菌株，采用單因素試驗(yàn)研究大米糊化水量、發(fā)酵溫度、碳源種類及添加量、氮源種類及添加量對(duì)紅曲發(fā)酵色價(jià)及桔青霉素含量的影響，在此基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化最佳控制參數(shù)。結(jié)果表明，紅曲最佳發(fā)酵條件為大米糊化水量13%、甘油添加量8%、硝酸鈉添加量1.85%，在此條件下，色價(jià)與桔青霉素含量的比值（p/c值）達(dá)到22 158.2。該研究可為傳統(tǒng)紅曲發(fā)酵工藝的改進(jìn)和工業(yè)化應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：紅曲；發(fā)酵工藝；色價(jià)；桔青霉素；響應(yīng)面

中圖分類號(hào)：TS202.3????? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A???? 文章編號(hào)：1000-9973（2024）02-0062-07

Study on Screening and Fermentation Process Optimization of Monascus?with High-Yield Pigment and Low-Yield Citrinin

Abstract： In this study， high-quality Monascus M7-5 is selected by expanding the source of strain isolation. Using this strain as the fermentation strain， the effects of rice gelatinization water amount， fermentation temperature， carbon source type and addition amount， nitrogen source type and addition amount on the color value of Monascus fermentation and citrinin content are studied by single factor test. On this basis， response surface test is used to optimize the optimal control parameters. The results show that the optimum fermentation conditions of Monascus are as follows： the rice gelatinization water amount is 13%， glycerin addition amount is 8% and sodium nitrate addition amount is 1.85%. Under these conditions， the ratio of color value to citrinin content （p/c value） reaches 22 158.2.This study can provide references for the improvement of traditional Monascus fermentation process and industrial application.

Key words： Monascus; fermentation process; color value; citrinin; response surface

傳統(tǒng)紅曲是由紅曲霉菌以大米為基質(zhì)發(fā)酵而成，屬于藥食兩用產(chǎn)品。紅曲色素是從發(fā)酵完成的紅曲米中提取的一種天然色素，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)紅曲色素具有抗菌、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性[1]，在釀酒、制醋、食品防腐、食品添加劑、醫(yī)藥等方面有著廣泛的應(yīng)用[2]。然而紅曲霉菌代謝產(chǎn)生色素的同時(shí)，也會(huì)產(chǎn)生桔青霉素，對(duì)哺乳動(dòng)物的肝臟和腎臟都具有一定的生殖毒性，給紅曲類制品帶來食品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)[3]。

隨著紅曲色素的推廣應(yīng)用，其產(chǎn)量常常供不應(yīng)求，提高色素產(chǎn)量、降低桔青霉素含量成為亟待解決的問題。紅曲色素的生產(chǎn)工藝分為液態(tài)和固態(tài)兩種：液態(tài)發(fā)酵工藝雖操作簡(jiǎn)單，但紅曲色素產(chǎn)量低；固態(tài)發(fā)酵工藝紅曲色素產(chǎn)量高，但桔青霉素污染嚴(yán)重，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定[4]。目前大多數(shù)紅曲霉菌株產(chǎn)紅曲色素能力較低，且發(fā)酵性能不穩(wěn)定。因此，選育高產(chǎn)色素、低產(chǎn)桔青霉素的菌株并研究其發(fā)酵條件，對(duì)獲得高品質(zhì)、高產(chǎn)量的紅曲顯得尤為重要。

本研究通過篩選高產(chǎn)色素、低產(chǎn)桔青霉素的紅曲霉菌，采用單因素試驗(yàn)探究大米糊化水量、制曲溫度、外加碳源種類及添加量、外加氮源種類及添加量對(duì)紅曲色素產(chǎn)量和桔青霉素含量的影響，以色價(jià)與桔青霉素含量的比值（p/c值）為響應(yīng)值，通過響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵工藝，以獲得紅曲霉菌高產(chǎn)色素、低產(chǎn)桔青霉素的最佳工藝條件，為高品質(zhì)紅曲制品的工業(yè)化、規(guī)模化、可控化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 材料來源

菌株分離源：紅曲米、紅曲粉、紅曲米酒、瀘州老窖酒曲；商業(yè)菌株紅色紅曲霉菌、紫色紅曲霉菌：由實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買并保藏；大米：購(gòu)于成都恩圖吉家市場(chǎng)。

1.1.2 培養(yǎng)基

PDA固體/斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，加1 000 mL蒸餾水，煮沸1 h，過濾，補(bǔ)水至1 000 mL，加瓊脂2%，121 ℃下滅菌20 min。

種子培養(yǎng)基：麥芽浸粉13.1 g，水100 mL，121 ℃下滅菌15 min。

固體培養(yǎng)基：大米清洗后，浸泡2 h，瀝干水分，根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)調(diào)整水分含量，取20 g分裝入250 mL錐形瓶中，121 ℃，0.1 MPa滅菌20 min。

1.1.3 主要試劑

麥芽浸粉、2×Rapid Taq Master Mix：北京索萊寶科技有限公司；甲醇、乙腈（均為色譜純）：賽默飛世爾科技有限公司；桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)品：上海源葉生物科技有限公司；磷酸、乳酸（均為分析純）：成都市科隆化學(xué)品有限公司；HLB固相萃取小柱：納譜分析技術(shù)（蘇州）有限公司。

1.1.4 主要儀器設(shè)備

Agilent 1200高效液相色譜儀（配熒光檢測(cè)器） 美國(guó)安捷倫科技有限公司；GI54DW高壓滅菌鍋 南京庚辰科學(xué)儀器有限公司；HZQ-F160恒溫振蕩培養(yǎng)箱 上海坤誠(chéng)科學(xué)儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；多樣品快速平行濃縮儀 東京理化器械株式會(huì)社。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 紅曲霉菌分離純化

從紅曲霉菌分離源樣品中，取適量紅曲米經(jīng)研缽研碎后，轉(zhuǎn)至盛有適量生理鹽水的錐形瓶中，經(jīng)搖床30 ℃，160 r/min培養(yǎng)2 d后進(jìn)行梯度稀釋。接種100 μL上述梯度稀釋液，涂布于固體培養(yǎng)基上，在30 ℃下培養(yǎng)3 d，挑取符合紅曲霉微生物學(xué)特征的菌株再次進(jìn)行分離純化，將純化3次后得到的較純菌株進(jìn)行編號(hào)和甘油管藏。

1.2.2 菌種鑒定

1.2.2.1 菌落形態(tài)觀察

采用點(diǎn)種法將純化得到的單菌落接種于PDA固體培養(yǎng)基上，在30 ℃下培養(yǎng)5 d，觀察并記錄菌落形態(tài)。

1.2.2.2 菌株顯微形態(tài)觀察

取適量種子液滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片，進(jìn)行顯微形態(tài)觀察。

1.2.2.3 分子生物學(xué)鑒定

采用CTAB法提取紅曲霉菌總DNA，通過真菌通用引物ITS1、ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證并送去測(cè)序。測(cè)序結(jié)果在NCBI上利用BLAST程序進(jìn)行比對(duì)，通過MEGA 10.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[5]。

1.2.3 紅曲發(fā)酵指標(biāo)檢測(cè)方法

紅曲色價(jià)的測(cè)定參考 GB 1886.19－2015《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 紅曲米》；桔青霉素含量的測(cè)定參考GB 5009.222－2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中桔青霉素的測(cè)定》第二法C18固相萃取小柱凈化-高效液相色譜法以及彭碧寧等[6]的方法，部分步驟有所改動(dòng)。

樣品提?。壕芊Q取樣品粉末（1.00±0.05） g，置于具塞離心管中，加入甲醇-水（70∶30）5 mL，振搖提取30 min，8 000 r/min離心5 min，殘?jiān)屑尤? mL甲醇-水（70∶30），振搖提取30 min，8 000 r/min離心5 min，合并上清液。加純水稀釋至15 mL，振搖1 min，靜置2 min，再振搖1 min，靜置3 min，用微纖維濾紙過濾，即得提取液。樣品經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)移至平行濃縮儀中，50 ℃真空濃縮至1 mL后，經(jīng)0.22 μm微孔有機(jī)濾膜過濾后進(jìn)行HPLC分析。

色譜條件：色譜柱：ZORBAX SB-Aq（4.6 mm×100 mm，2.6 μm），美國(guó)安捷倫公司；熒光檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)為λex=331 nm，λem=500 nm；柱溫28 ℃；流動(dòng)相A為磷酸水溶液（pH為2.5），流動(dòng)相B為乙腈，流動(dòng)相A∶流動(dòng)相B為33∶67；洗脫條件：流速1 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

1.2.4 紅曲菌株固態(tài)發(fā)酵初篩

1.2.4.1 紅曲發(fā)酵流程[7]

紅曲發(fā)酵流程見圖1。

1.2.4.2 紅曲發(fā)酵初篩

將分離得到的紅曲霉菌株在PDA斜面上培養(yǎng)4 d后，用無菌生理鹽水洗下紅曲霉孢子，制成孢子懸浮液，按照10%的接種量接種到已滅菌的固體培養(yǎng)基中，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h后將紅曲米搖散，此后每隔24 h進(jìn)行一次振蕩搖瓶，直到發(fā)酵結(jié)束[8]。

1.2.5 紅曲菌株固態(tài)發(fā)酵復(fù)篩

選取4種不同類型的大米，以p/c值為指標(biāo)對(duì)初篩菌株進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵復(fù)篩[9]。

1.2.6 固態(tài)發(fā)酵單因素試驗(yàn)

以紅曲色素含量和桔青霉素含量為指標(biāo)，采用一系列單因素試驗(yàn)研究大米糊化水量、發(fā)酵溫度、外加碳源種類及添加量、外加氮源種類及添加量對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響。試驗(yàn)水平分別選取大米糊化水量5%、15%、25%、35%、45%；發(fā)酵溫度28，30，32 ℃，前3 d 30 ℃，后期28 ℃；前3 d 30 ℃，后期26 ℃；外加碳源種類葡萄糖、麥芽糖、乳糖、甘油、乙醇；甘油添加量1%、3%、5%、7%、9%；外加氮源種類谷氨酸、麩皮、硝酸鈉、蛋白胨、酵母粉；硝酸鈉添加量0.5%、1.25%、2%、2.75%、3.5%、4.25%。

1.2.7 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取甘油添加量（A）、硝酸鈉添加量（B）、大米糊化水量（C）3個(gè)因素進(jìn)行三因素三水平的Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以p/c值作為考核指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平見表1[10-11]。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

繪圖采用Origin 2021，響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分析采用Design Expert 10.0.1，顯著性分析采用IBM SPSS 20，差異顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株分離篩選

2.1.1 菌株分離

從篩菌分離源中共分離出42株菌株，部分菌株的菌落形態(tài)見圖2。對(duì)菌株進(jìn)行鏡檢，見圖3。發(fā)現(xiàn)它們的形態(tài)呈閉囊殼，生于菌絲頂端，部分被菌絲包裹，符合紅曲霉菌的特性[12]。

2.1.2 菌種初篩

以實(shí)驗(yàn)室保藏的兩株商業(yè)菌株紫色紅曲霉菌、紅色紅曲霉菌為對(duì)照，對(duì)分離菌株進(jìn)行發(fā)酵指標(biāo)的初篩，菌株初篩結(jié)果見表2。分離菌株中有15株菌株的色素產(chǎn)量高于商業(yè)菌株，其中有5株桔青霉素含量低于商業(yè)菌株。因此，選擇M3-2、M6-3、M7-3、M7-5、M9-2 5株菌株進(jìn)行后續(xù)復(fù)篩。

2.1.3 菌種復(fù)篩

選取4種常用于紅曲發(fā)酵的大米為發(fā)酵基質(zhì)，檢測(cè)發(fā)酵結(jié)束后固態(tài)紅曲米中色素、桔青霉素含量。不同類型大米編號(hào)見表3。5株菌株復(fù)篩后色價(jià)和桔青霉素含量見圖4和圖5。 M7-5菌株以編號(hào)為“T”的泰香軟米為發(fā)酵基質(zhì)時(shí)，色素產(chǎn)量達(dá)到2 656 U/g，在高產(chǎn)色素的同時(shí)，桔青霉素的含量也較低，因此選擇M7-5菌株進(jìn)行后續(xù)研究。

2.1.4 菌種鑒定

以ITS1、ITS4為引物，對(duì)菌株M7-5進(jìn)行ITS區(qū)域序列擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物送去測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在NCBI核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，結(jié)合菌落形態(tài)、顏色、生理生化數(shù)據(jù)，將M7-5菌株鑒定為紅色紅曲霉菌，系統(tǒng)發(fā)育樹見圖6。

2.2 紅曲固態(tài)發(fā)酵單因素試驗(yàn)

2.2.1 大米糊化水量對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

基質(zhì)含水量是影響大米糊化度和紅曲霉菌生長(zhǎng)的重要因素[13-14]。含水量少，大米糊化度太低，會(huì)導(dǎo)致米粒內(nèi)部化學(xué)物質(zhì)反應(yīng)不充分，大米過硬，紅曲霉對(duì)其利用較少；但水分太多，糊化度過高，會(huì)導(dǎo)致大米黏結(jié)，不適合紅曲霉菌著床生長(zhǎng)。通過前期糊化度分級(jí)試驗(yàn)，以不額外加水的試驗(yàn)組為對(duì)照，選擇加水量5%、15%、25%、35%、45%進(jìn)行試驗(yàn)。加水量45%試驗(yàn)組發(fā)酵效果差，色素含量遠(yuǎn)低于500 U/g，因此圖中未展示。

由圖7可知，隨著大米糊化水量的增加，紅曲發(fā)酵產(chǎn)物中色素含量先增加后減少，桔青霉素含量先減少后增加。當(dāng)大米糊化水量為15%時(shí)，色素含量達(dá)到最高，為3 279.1 U/g，桔青霉素含量最低，僅為0.91 μg/g，此時(shí)p/c值達(dá)到最高。因此，選取15%的糊化水量作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適糊化度。

2.2.2 發(fā)酵溫度對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

相關(guān)研究報(bào)道，桔青霉素的合成時(shí)間稍晚于色素的合成時(shí)間[15]，采取變溫發(fā)酵的策略可以在保證色素產(chǎn)量的同時(shí)，有效降低桔青霉素的含量。

由圖8可知，溫度在28～32 ℃區(qū)間內(nèi)，隨著溫度的上升，紅曲發(fā)酵產(chǎn)物的色素含量和桔青霉素含量也逐漸增加，當(dāng)溫度設(shè)置為前3 d培養(yǎng)溫度為30 ℃、后8 d培養(yǎng)溫度為28 ℃時(shí)，紅曲發(fā)酵色素含量較高，為3 320.8 U/g，桔青霉素含量最低，為0.69 μg/g，此時(shí)p/c值達(dá)到最高，當(dāng)降低紅曲后期發(fā)酵溫度為26 ℃時(shí)，其p/c值明顯下降。因此，選取前期30 ℃、后期28 ℃作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適發(fā)酵溫度。

2.2.3 外加碳源對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

不同種類的碳源會(huì)影響紅曲霉菌代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。由圖9可知，添加乙醇的試驗(yàn)組中，色素含量低于對(duì)照組，桔青霉素含量高于對(duì)照組，說明乙醇不適合作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的外加碳源；添加葡萄糖、麥芽糖、乳糖的試驗(yàn)組中，色素含量均高于對(duì)照組，桔青霉素含量也高于對(duì)照組，說明三者不適合作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的外加碳源。在添加甘油的試驗(yàn)組中，色素含量較高，為3 291.7 U/g，桔青霉素含量最低，為0.49 μg/g，p/c值達(dá)到最高，選取其作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適外加碳源。

2.2.4 碳源添加量對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

由圖10可知，隨著甘油質(zhì)量濃度的逐漸增加，紅曲色素含量變化較小，呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，桔青霉素含量呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)，在甘油添加量為7%時(shí)達(dá)到最低，為0.41 μg/g。在甘油添加量為總發(fā)酵質(zhì)量的7%時(shí)，紅曲色素含量較高，桔青霉素含量最低，此時(shí)p/c值達(dá)到最高，選取其作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適碳源添加量。

2.2.5 外加氮源對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

不同種類的氮源會(huì)影響紅曲霉菌的生長(zhǎng)，進(jìn)而影響代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。由圖11可知，添加酵母粉的試驗(yàn)組中，色素含量低于對(duì)照組，桔青霉素含量高于對(duì)照組，說明酵母粉不適合作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的外加氮源；添加麩皮和蛋白胨的試驗(yàn)組中，色素含量高于對(duì)照組，桔青霉素含量也高于對(duì)照組，說明兩者不適合作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的外加氮源；添加谷氨酸和硝酸鈉的試驗(yàn)組中，色素含量均高于對(duì)照組，桔青霉素含量均較低，無顯著性差異，其中添加硝酸鈉的試驗(yàn)組，紅曲色素含量為2 766.7 U/g，桔青霉素含量最低，為0.35 μg/g，此時(shí)p/c值達(dá)到最高，選取其作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適外加氮源。

2.2.6 氮源添加量對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響

由圖12可知，隨著硝酸鈉添加量的逐漸增加，紅曲色素含量總體呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，桔青霉素含量總體呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)。硝酸鈉添加量為2%時(shí)，紅曲發(fā)酵產(chǎn)物的p/c值達(dá)到最高，此時(shí)桔青霉素含量最低，選取其作為M7-5菌株固態(tài)發(fā)酵的最適氮源添加量。

2.3 紅曲固態(tài)發(fā)酵響應(yīng)面分析

基于單因素試驗(yàn)的數(shù)據(jù)，選取甘油添加量（A）、硝酸鈉添加量（B）、大米糊化水量（C）3個(gè)因素進(jìn)行三因素三水平的Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以p/c值作為考核指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)用Design-Expert 10.0.1軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果見表4，回歸模型方差分析見表5[16-17]。

根據(jù)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果，得到紅曲質(zhì)量指標(biāo)p/c值對(duì)A（碳源添加量）、B（氮源添加量）、C（大米糊化水量）的多元回歸方程：Y=21 403.51+1 994.35A+667.03B－2 587.76C－1 581.55AB－2 054.57AC+1 312.79BC－3 561.97A2－4 773.14B2－3 719.32C2。

由表4可知，模型的F=103.22，P<0.000 1，表明試驗(yàn)所采用的二次模型極顯著，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。本試驗(yàn)失擬項(xiàng)的P值為0.682 4（P>0.05），表明該試驗(yàn)回歸模型的擬合程度良好。通過3個(gè)因素的F值可知，影響紅曲發(fā)酵指標(biāo)p/c值的因素主次順序?yàn)镃（大米糊化水量）>A（碳源添加量）>B（氮源添加量），在回歸模型方程二次項(xiàng)中A2、B2、C2均極顯著（P<0.01），交互項(xiàng)中AB、BC均極顯著（P<0.01），AC顯著（P<0.05）。

根據(jù)Design-Expert 10.0.1軟件獲得了大米糊化水量、碳源添加量、氮源添加量3個(gè)因素的交互作用對(duì)紅曲發(fā)酵指標(biāo)p/c值影響的響應(yīng)面圖和等高線圖，見圖13～圖15。通過回歸模型的預(yù)測(cè)，得到高產(chǎn)色素低產(chǎn)桔青霉素的紅曲發(fā)酵最佳工藝條件為碳源添加量7.97%、氮源添加量1.85%、大米糊化水量13.24%，在該條件下紅曲發(fā)酵p/c值預(yù)測(cè)值為22 264.4。

2.4 最佳工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn)

考慮實(shí)際操作情況，將響應(yīng)因素調(diào)整為甘油添加量8%、硝酸鈉添加量1.85%、糊化水量13%，其他條件不變，進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。色價(jià)和桔青霉素含量分別為2 769.78 U/g和0.125 μg/g，p/c值為22 158.2，相對(duì)誤差為0.47%。因此，通過響應(yīng)面法優(yōu)化得到的紅曲發(fā)酵工藝回歸模型符合實(shí)際。

3 結(jié)論

本研究篩選出優(yōu)質(zhì)紅曲霉菌株，并利用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化紅曲發(fā)酵工藝條件，其發(fā)酵最佳條件為甘油添加量8%、硝酸鈉添加量1.85%、大米糊化水量13%，在此條件下，紅曲發(fā)酵的p/c值最高，色價(jià)和桔青霉素含量分別為2 769.78 U/g和0.125 μg/g，p/c值為22 158.2，相對(duì)誤差為0.47%，色素產(chǎn)量顯著超過1 000 U/g的標(biāo)準(zhǔn)，桔青霉素的含量較低。本研究結(jié)果可為紅曲發(fā)酵的進(jìn)一步工業(yè)化應(yīng)用提供借鑒。

參考文獻(xiàn)：

[1]王瓊，莫中成，鄭標(biāo)，等.紅曲抗動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展[J].湘南學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2022，24（3）：69-72.

[2]KOLI S H， SURYAWANSHI R K， MOHITE B V， et al. Prospective of Monascus pigments as an additive to commercial sunscreens[J].Natural Products Communications，2019，14（12）：1-7.

[3]毛妍，楊夢(mèng)然，梁曾恩妮，等.桔青霉素的研究現(xiàn)狀[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2021，42（11）：121-124.

[4]尚學(xué)平，許世錦，陳羅華周，等.功能紅曲液態(tài)發(fā)酵的研究進(jìn)展[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2022，48（19）：320-327.

[5]周康熙，陳思鵬，王澤楠，等.紅曲中紅曲菌的鑒定及優(yōu)質(zhì)菌的篩選[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2023，23（1）：296-305.

[6]彭碧寧，余創(chuàng)波，曾川，等.紅曲紅色素中桔青霉素檢測(cè)方法的優(yōu)化研究[J].中國(guó)食品添加劑，2022，33（8）：208-215.

[7]胡琨，馬倩，殷倩倩，等.紅曲發(fā)酵加工工藝及桔霉素控制研究進(jìn)展[J].中國(guó)食品添加劑，2022，33（6）：208-214.

[8]朱蕊，彭林，劉雙平，等.高產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的篩選及菌種共酵對(duì)紅曲固態(tài)發(fā)酵的影響[J].食品工業(yè)科技，2019，40（11）：168-173，177.

[9]張江寧，王娟娟，張俊杰，等.紅曲高產(chǎn)洛伐他汀低產(chǎn)桔青霉素的研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2018，43（2）：76-80.

[10]劉瑾，趙華.響應(yīng)面法優(yōu)化丁酸梭菌快速增殖基礎(chǔ)培養(yǎng)基[J].中國(guó)調(diào)味品，2023，48（2）：65-70.

[11]韓世明，方玉梅，吳蓮蓮，等.響應(yīng)面優(yōu)化超聲輔助酶法提取辣椒紅色素研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2022，47（2）：177-181，190.

[12]吳玉峰.高產(chǎn)洛伐他汀紅曲菌的選育及其在黃酒中的應(yīng)用研究[D].無錫：江南大學(xué)，2021.

[13]CARVALHO M O， FRADINHO P， MARTINS M J， et al. Paddy rice stored under hermetic conditions： the effect of relative humidity， temperature and storage time in suppressing Sitophilus zeamais and impact on rice quality[J].Journal of Stored Products Research，2019，80（11）：21-27.

[14]LIU X H， SUN A N， LI Q， et al. A systematic study of the production of Monacolin K by solid state fermentation of Monascus ruber[J].AMB Express，2022，12（1）：29.

[15]石侃，夏楓耿，吳振強(qiáng).紅曲色素發(fā)酵生產(chǎn)過程桔霉素控制技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)釀造，2016，35（4）：1-6.

[16]趙志軍，趙婷，劉延波，等.酯化型紅曲菌復(fù)合誘變選育及其固態(tài)發(fā)酵條件優(yōu)化[J].食品工業(yè)科技，2021，42（2）：76-82.

[17]董彩文，王雪純，李一晴，等.響應(yīng)面法優(yōu)化紅曲調(diào)味酒的發(fā)酵條件[J].中國(guó)調(diào)味品，2020，45（1）：31-34.