芪參桃紅顆粒對心力衰竭小鼠心肌重構(gòu)的干預(yù)作用及對自噬相關(guān)miRNA的影響

靳嘉麟 劉 靜 萬 潔 李 冬 逯金金 崔曉云 周 鹍 高 群 李天力 賈文浩 武 乾 李 巖 林 謙

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院,北京,100700; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029; 3 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京,100078; 4 中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心,北京,100700)

心力衰竭(心衰)是因心臟結(jié)構(gòu)及其功能的異常改變所引起的一組復(fù)雜臨床綜合征,心肌組織重構(gòu)是心衰的主要病理生理過程,反過來也是促進(jìn)疾病的重要病因,其主要表現(xiàn)包括心臟幾何結(jié)構(gòu)改變[1]、心肌纖維面積減少、心肌纖維化、心肌細(xì)胞凋亡等[2],并與細(xì)胞自噬等生命活動異常變化相關(guān)。研究已經(jīng)表明細(xì)胞自噬與心力衰竭等心臟疾病密切相關(guān)[3],并且任何過度或不足的自噬過程都會損害心功能[4]。臨床心衰患者多屬于中醫(yī)氣虛血瘀水停的病機范疇,益氣活血利水法是中醫(yī)治療心衰的有效方案[5-6]。芪參桃紅顆粒(前稱為“益氣活血利水方”)由林謙教授根據(jù)氣血理論創(chuàng)制而成,長期應(yīng)用于臨床,療效肯定[7]。本研究結(jié)合既往成果,以芪參桃紅顆粒為干預(yù),以自噬激動劑雷帕霉素、阻滯劑3-甲基腺嘌呤為工具藥,以陽性藥馬來酸依那普利片為對照組[8-9],觀察在藥物干預(yù)下,壓力負(fù)荷心衰小鼠不同時期心功能、心肌重構(gòu)程度,自噬體形成情況,自噬相關(guān)的miRNA表達(dá)情況,進(jìn)一步探究芪參桃紅顆粒作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性C57BL/6Cnc小鼠,6～8周齡,100只,體質(zhì)量(20±3)g,購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,動物生產(chǎn)使用許可證書編號:北京SYXK(京)2017-0033.實驗動物飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心功能實驗室,無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級動物房,恒濕恒溫,由專業(yè)人員使用實驗動物無菌飼料飼養(yǎng)。本研究方案已通過北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院實驗動物倫理委員會審查。

1.1.2 藥物 芪參桃紅顆粒(QSTH),顆粒劑型,由生黃芪60 g、桃仁10 g、黨參15 g、豬苓15 g、澤蘭15 g、紅花10 g、桑白皮10 g、丹參10 g、葶藶子10 g等組成,該方藥由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院生產(chǎn),每包約25 g。馬來酸依那普利片(揚子江藥業(yè)集團江蘇制藥股份有限公司,批號:18081011)。

1.1.3 試劑與儀器 雷帕霉素(Sigma公司,美國,貨號:529M032);3-甲基腺嘌呤(Sigma公司,美國,貨號:097M4018V);Tween-80(北京索萊寶科技有限公司,貨號:1114D011);TRIzol RNA提取劑(天根生化科技有限公司,貨號:DP405-02);miR cutemiRNA熒光定量試劑盒(天根生化科技北京有限公司,貨號:FP401);DL2000 DNA Marker(TaKaRa寶生物公司,日本,貨號:3427Q);大體顯微鏡(Nikon,日本,型號:SMZ745);動物超聲心動檢查系統(tǒng)(Visual Sonics Inc,美國,型號:Vevo770 ultrasound system);凝膠成像系統(tǒng)(上海天能科技有限公司,型號:Tanon 1600);熒光定量PCR儀(Applied Biosystems公司,美國,型號:ABI7500)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 橫向主動脈縮窄(Transverse Aortic Constriction,TAC)導(dǎo)致壓力負(fù)荷升高的心衰小鼠模型:4%水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉。視角由顯微鏡放大5～10倍,沿左側(cè)胸骨第2肋間,造成3 mm手術(shù)切口,鈍性分離肌肉,直至暴露主動脈弓。于主動脈前后,區(qū)分出無名動脈和左側(cè)頸總動脈,環(huán)繞一圈主動脈弓,使用聚丙烯縫6號線將血管連同28-gauge針頭一同結(jié)扎,結(jié)扎后緩慢退出針頭,造成固定性縮窄,隨后縫合皮膚。術(shù)后約4周即可顯現(xiàn)出明顯心力衰竭。模型組與假手術(shù)組手術(shù)相同,但假手術(shù)組只進(jìn)行至鈍性分離肌肉,游離主動脈弓,只穿線,不結(jié)扎。將90只C57小鼠隨機分為:模型組(M組)、芪參桃紅顆粒組(芪參桃紅顆粒簡稱QSTH,該組為T組)、QSTH+雷帕霉素組(TR組)、QSTH+3-甲基腺嘌呤組(T3M組)、依那普利組(E組),假手術(shù)組(S組)。

1.2.2 給藥方法 根據(jù)隨機數(shù)表法,造模后的小鼠被隨機分配入組,每組動物15只,給藥及分組情況如下:S組給生理鹽水;M組給予生理鹽水;T組給予QSTH[4 g/(kg·d)];TR組給予QSTH[4 g/(kg·d)]+雷帕霉素[2 mg/(kg·d)][10];T3M組給予QSTH[4 g/(kg·d)]+3-甲基腺嘌呤[15 mg/(kg·d)][11];E組給予馬來酸依那普利片[0.9 mg/(kg·d)]。中藥量為參考臨床成人經(jīng)驗用藥量與《藥理實驗方法學(xué)》,換算中藥QSTH成人劑量至小鼠用量。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

一般情況監(jiān)測及心臟病理檢測。監(jiān)測小鼠一般情況,術(shù)后2、4周完成超聲心動測量后處死,稱量、取材并行蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin,HE)及Masson染色,采用image J圖像分析系統(tǒng)測定心肌細(xì)胞直徑;計算心肌細(xì)胞膠原容積分?jǐn)?shù)(Collagen Volume Fraction,CVF),隨機取切片中5個視野,調(diào)節(jié)灰度后,區(qū)分膠原與非膠原組分,CVF=膠原面積/心肌面積。

1.2.3.1 心功能檢測 動物心臟超聲無創(chuàng)檢測系統(tǒng)[12]:TAC術(shù)后2、4周分別檢測1次。動態(tài)監(jiān)測心室壁肥厚情況、心室收縮功能:取左心室乳頭肌水平短軸位M型超聲,檢測左室后壁厚度、左室舒張末期內(nèi)徑,左室射血分?jǐn)?shù)、收縮分?jǐn)?shù)。

1.2.3.2 自噬體形成情況監(jiān)測 各組動物在術(shù)后2、4周,檢測心功能后處死取新鮮心肌組織,處理后在透射電鏡下觀察自噬體的形成和分布情況[13]。

1.2.3.3 細(xì)胞凋亡檢測 各組動物在術(shù)后2、4周心肌細(xì)胞急性分離后進(jìn)行凋亡檢測,在Adobe Photoshop軟件中對各組凋亡細(xì)胞染色圖像定量分析,以凋亡細(xì)胞百分比作為參考值[13]。

1.2.3.4 自噬相關(guān)差異miRNA動態(tài)表達(dá)及靶基因預(yù)測 造模后2、4周,進(jìn)行超聲檢測后,選取S組、M組、T組,取小鼠左心室組織(≥50 mg),液氮閃凍,-80 ℃條件下儲存?zhèn)錅y。分步驟進(jìn)行Total RNA樣本檢測、文庫構(gòu)建、上機測序及生物信息分析、基因本體(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析、差異miRNA動態(tài)表達(dá)及靶基因預(yù)測、qPCR驗證關(guān)鍵差異miRNA表達(dá)[14-19]。取P<0.05、log2FoldChange絕對值≥1為顯著差異條件。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般情況監(jiān)測 手術(shù)后各組小鼠均可見萎靡、反應(yīng)減弱、倦怠。術(shù)后2周,S組小鼠逐漸恢復(fù),其他各組均可見不同程度的抓取反應(yīng)力減弱、納差、運動能力減弱、毛色光澤差。術(shù)后2周內(nèi),S組未發(fā)生死亡事件;M組5只死亡;E組4只死亡;T組1只死亡;TR組死亡4只;T3M組死亡3只,考慮術(shù)后感染或急性心力衰竭致死。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)化心臟肺臟質(zhì)量 術(shù)后2、4周,對各組小鼠進(jìn)行體質(zhì)量測量,取材并稱量心臟及肺臟質(zhì)量,并將心肺質(zhì)量比上相應(yīng)體質(zhì)量,乘以1 000,以此作為心肺質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化(Standardized Heart Weight,SHW;Standardized Lung Weight,SLW)處理。見表1。

表1 各組小鼠心功能比較(n=7)

2.3 左室心功能評價 TAC術(shù)后2周時,與S組比較,M組左心室射血分?jǐn)?shù)(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF)%、左室短軸縮短率(Shortening Fraction,FS)%降低,舒張期左室內(nèi)徑(Left Ventricular End-diastolic Dimension,LVIDd)、舒張期左室后壁厚度(Diastolic Left Ventricular Posterior Wall Thickness,LVPWd)升高;干預(yù)組中,M組、TR組、T3M組、E組FS、LVEF不同程度降低,LVIDd升高;M組、E組LVPWd升高。與M組比較,T組LVEF、FS升高,T3R組LVIDd升高,T組、TR組、T3M組LVPWd降低。組間比較,T組、TR組、T3M組、E組LVEF值存在統(tǒng)計學(xué)差異。TAC術(shù)后4周時,與S組比較,M組FS、LVEF值降低,LVIDd、LVPWd升高;TR組、T3M組、R組FS、LVEF值下降,LVPWd值升高,T組、TR組、T3M組、E組LVIDd值升高。與M組比較,T組、TR組、T3M組、E組FS、LVEF值升高,LVPWd值下降;T組、TR組、E組LVIDd值下降;組間與同組前后自身比較可以發(fā)現(xiàn),TR組、E組FS、LVEF值較前升高,M組FS、LVEF值較前降低;術(shù)后4周,TR組較T3M組LVEF值升高,E組較T3M組LVEF組LVEF值升高;TR組、E組、M組LVIDd值較自身升高。見表1。

2.4 左心室病理學(xué)檢測 除S組,其他組可見不同程度心臟橫截面幾何形狀變形、心肌肥厚、心肌細(xì)胞肥大、壞死,周圍血管可見血管壁增厚、炎性細(xì)胞浸潤;定量分析顯示,T組和E組相比較其他各組心肌總面積更高(P<0.05)。心肌細(xì)胞凋亡檢測:T組和E組相比較其他各組,心肌纖維凋亡百分比更低。見圖1～3。

圖2 各組心肌橫截面膠原纖維比較(Masson染色,×400,橫截面標(biāo)尺500 μm,放大圖標(biāo)尺30 μm)注:A. S組,B. M組,C. T組,D. T3M組(QSTH+自噬阻滯藥組),E. TR組(QSTH+自噬激動藥組),F. E組(陽性對照藥組)

圖3 各組病理檢查定量比較注:與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與模型組比較,△P<0.05;A示心肌纖維直徑;B示心肌纖維數(shù)量;C示心肌纖維總面積;D示單個心肌纖維面積;E示心肌組織纖維膠原面積百分比;F示心肌纖維凋亡百分比。(3)A. S組,B. M組,C. T組,D. T3M組(QSTH+自噬阻滯藥組),E. TR組(QSTH+自噬激動藥組),F. E組(陽性對照藥組)

2.5 透射電鏡觀察自噬體 相較于S組，M組、T組、E組、TR組、T3M組各自的自噬濾泡、自噬溶酶體和自噬體數(shù)量增加，心肌細(xì)胞排列紊亂，線粒體呈現(xiàn)稀疏松散，并且不規(guī)則，其內(nèi)可見被破壞的線粒體結(jié)構(gòu)。術(shù)后4周更嚴(yán)重，其中T3M組在心肌纖維細(xì)胞和線粒體排列、完整性方面，相對更差。見圖4。

圖4 各組透射電鏡觀察自噬超微結(jié)構(gòu)比較(左側(cè)標(biāo)尺20 μm,放大倍數(shù)為5 000倍;右側(cè)標(biāo)尺10 μm,放大倍數(shù)為10 000倍)注:A. S組,B. M組,C. T組,D. T3M組(QSTH+自噬阻滯藥組),E. TR組(QSTH+自噬激動藥組),F. E組(陽性對照藥組)。透射電鏡視野中,自噬濾泡的特征為:雙層或多層膜,伴新月狀或杯狀;自噬體的特征為:內(nèi)含胞漿成分,如核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體,多為雙層,或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu);自噬溶酶體的特征為:胞漿成分被降解的單層膜結(jié)構(gòu)

2.6 基于第二代基因測序技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)分析可能存在的分子機制 差異miRNA表達(dá)結(jié)果。根據(jù)術(shù)后2周、4周T組較M組差異miRNA結(jié)果,發(fā)現(xiàn)術(shù)后2周,差異miRNA有miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-708-3p、miR-200b-3p、miR-6715-5p、miR-96-5p、miR-7689-3p、miR-1983、miR-382-5p,術(shù)后4周時,差異miRNA有miR-7225-5p、miR-671-5p、miR-677-5p、miR-582-3p、miR-208b-3p、miR-101a-5p、miR-184-3p、miR-181b-2-3p。結(jié)合文獻(xiàn),選取關(guān)鍵miRNA進(jìn)行qPCR驗證,經(jīng)QSTH干預(yù)2周后,M組mmu-miR-200a-3p、mmu-miR-200c-3p、mmu-miR-96-5p顯著下降;經(jīng)QSTH干預(yù)4周后mmu-miR-671-5p顯著下降。見表2,圖5。

圖5 qPCR驗證結(jié)果注:T組與M組比較,*P<0.05

表2 術(shù)后2周、4周T組較M組差異miRNA

從 miRNA測序及KEGG分析結(jié)果可知,M組相較于S組,在差異miRNA富集的多條信號通路中,其中Metabolic、Lysosome通路與細(xì)胞自噬聯(lián)系密切并且富集因子較高、差異顯著。在T組較M組的各差異miRNA富集通路中,mTOR、Lysosome通路與自噬密切相關(guān),其中mTOR是調(diào)節(jié)自噬非常重要的信號通路。KEGG分析結(jié)果。結(jié)果以KEGG散點圖的方式進(jìn)行展現(xiàn)。見圖6～7。

圖6 M組對比S組候選靶基因KEGG富集散點圖

圖7 T組對比M組候選靶基因KEGG富集散點圖注:Rich factor(富集因子)指表達(dá)有差異的基因中,處于該通路(pathway)條目的基因總數(shù)與所有位于該通路中有注釋的基因條目的總數(shù)的比值。該因子越大,表示富集越發(fā)顯著。qvalue是經(jīng)多重假設(shè)檢驗校正的p值,其得出數(shù)值的范圍為[0,1],越接近于0,表示富集性越強、越顯著。Gene_number是該通路富集到的基因數(shù)目,數(shù)值越大,相應(yīng)的圓形越大

3 討論

芪參桃紅顆粒(前稱益氣活血利水方),應(yīng)用于臨床長達(dá)十?dāng)?shù)年,為林謙教授循廖家楨教授臨床經(jīng)驗,結(jié)合氣血理論所創(chuàng),治療慢性心力衰竭療效肯定。該方由生黃芪、黨參、桃仁、紅花、丹參、桑白皮、葶藶子、豬苓、澤蘭組成。方中選取益氣、活血、利水之常用藥物,以生黃芪、黨參大補心脾肺之宗氣,宗氣充足則血行流暢;以桃仁、紅花、丹參活血化瘀,紅花兼具散濕之力,使補氣而無留滯之虞,使五臟六腑得養(yǎng)以正常行使氣化之功;以桑白皮、葶藶子、澤蘭、豬苓瀉去離經(jīng)蓄積之水邪,邪去則正安。

慢性心衰是由多種原因持續(xù)存在導(dǎo)致的心肌重構(gòu)及相應(yīng)的臨床綜合癥狀,重構(gòu)表現(xiàn)包括心肌肥厚、心臟幾何形狀改變、心肌纖維化和心肌細(xì)胞凋亡等[20],進(jìn)而導(dǎo)致臨床中患者運動受限、呼吸困難等主要癥狀。在心肌重構(gòu)的過程中,自噬具有密切、雙向的作用。在心肌缺血缺氧的情況下,自噬促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)成分循環(huán)利用使并以此適應(yīng)應(yīng)激刺激,但同時,程序性細(xì)胞死亡也可以由自噬觸發(fā),并成為促進(jìn)細(xì)胞死亡的因素[21-27],因此,任何過度或不足的自噬都會損害心肌組織。

臨床中心衰患者多表現(xiàn)為運動受限及呼吸困難,其主要原因是心臟幾何形狀改變、心肌細(xì)胞缺失造成心室組織不協(xié)調(diào)、不完全收縮,LVEF值降低,心臟負(fù)荷增重,同時導(dǎo)致心室分泌BNP并在活化酶的作用下產(chǎn)生NT-proBNP。本課題組前期通過一項RCT試驗證明,芪參桃紅顆粒可改善慢性心衰患者中醫(yī)證候及癥狀評分、心功能,提升LVEF,降低NT-proBNP,提高患者生命質(zhì)量[28]。本實驗結(jié)果顯示,相較于M組,芪參桃紅顆?？梢越档托∈髽?biāo)準(zhǔn)化心臟比與標(biāo)準(zhǔn)化肺臟重量(心臟、肺臟質(zhì)量比體質(zhì)量之后乘以1 000),減小心臟橫截面直徑、提高LVEF值(P<0.05),提示該方可控制心衰小鼠心臟質(zhì)量增加,抑制心臟幾何形狀改變。

除此之外,在重構(gòu)過程中,心肌細(xì)胞整合各個來源的生物信息,將生物力學(xué)力信息轉(zhuǎn)化為基因?qū)用娴谋磉_(dá)[29],并由此引發(fā)心肌細(xì)胞中的能量代謝異常,進(jìn)而觸發(fā)心肌細(xì)胞自噬異常,造成心肌細(xì)胞凋亡、纖維化以及形狀的改變。李巖等[30]進(jìn)行益氣藥對慢性心力衰竭模型大鼠能量代謝研究中發(fā)現(xiàn),芪參桃紅顆粒的主要組成部分黨參、生黃芪可以維持總肌酸激酶活性,維持肌酸激酶同工酶及腺苷酸轉(zhuǎn)位酶2種異構(gòu)體mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá),保證心衰大鼠心肌能量物質(zhì)體系的正常運行,改善心肌運動功能;李思耐等[31]、孫婭楠[32]證實,黨參、生黃芪、丹參等QSTH的主要成分具有降低TAC術(shù)后心衰動物模型左心室室壁厚度、質(zhì)量指數(shù),改善LVEF,具有抑制心肌重構(gòu)同時改善心室舒張收縮能力的作用。本實驗結(jié)果顯示在心肌膠原纖維化定量分析中,T3M組(QSTH+自噬阻滯藥)術(shù)后2周時心肌細(xì)胞纖維化程度最低,但卻表現(xiàn)出較重的心肌肥厚、炎性細(xì)胞浸潤,這是因為而心肌成纖維細(xì)胞自噬是心肌纖維化的主要過程[33],自噬被抑制的同時,心肌纖維化也被抑制,該組術(shù)后4周時出現(xiàn)較明顯的纖維化改變,提示芪參桃紅顆?？赡芫哂写龠M(jìn)自噬的作用;TR組(QSTH+自噬激動藥)干預(yù)2周、4周時,心肌細(xì)胞纖維化顯著,且術(shù)后4周,TR組心肌細(xì)胞纖維化水平并未顯著高于M組,提示芪參桃紅顆?？赡芫哂幸种谱允蛇^度活躍的作用,且T組與E組都表現(xiàn)出膠原纖維比降低,據(jù)此進(jìn)一步提示芪參桃紅顆?？赡芫邆潆p向調(diào)節(jié)自噬通量的特點與抑制心衰小鼠心肌纖維化的作用。細(xì)胞凋亡的定量分析結(jié)果提示,過分自噬(TR組)以及抑制自噬的狀態(tài)(T3M組)都會導(dǎo)致凋亡水平過高,而T組顯著低于前2組,提示芪參桃紅顆?？梢酝ㄟ^調(diào)節(jié)適應(yīng)性自噬水平,降低心肌細(xì)胞凋亡百分比,并發(fā)揮保護(hù)心肌功能的作用。

當(dāng)心肌細(xì)胞處于某種應(yīng)激條件時,如持續(xù)的壓力負(fù)荷、缺血缺氧等,細(xì)胞能量代謝發(fā)生障礙,促使細(xì)胞自噬異常,并將諸多信息整合轉(zhuǎn)化為相關(guān)基因的表達(dá)異常,其中包括自噬相關(guān)miRNA表達(dá)異常。本實驗miRNA測序及KEGG分析結(jié)果顯示,M組相較于S組,新陳代謝通路、溶酶體通路與心肌細(xì)胞自噬聯(lián)系緊密,并且富集性高、差異顯著;T組較M組mTOR、溶酶體通路富集明顯,與自噬密切相關(guān)。結(jié)合文獻(xiàn)檢索及以上實驗結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),術(shù)后2周,T組較M組,miR-96-5p、miR-200c-3p、miR-200a-3p上調(diào),支持了自噬水平被上調(diào)的可能性[34-35];術(shù)后4周時,miR-671-5p上調(diào),支持了心肌組織自噬水平被下調(diào)[36-39],相應(yīng)組織樣本定量PCR驗證了上述miRNA的差異性結(jié)果。

中醫(yī)已有心衰病名,雖然其內(nèi)涵卻與現(xiàn)代心力衰竭綜合征的內(nèi)涵不完全一致,但HF患者動則氣喘、氣虛乏力、脈細(xì)弱或結(jié)代、口唇發(fā)紺的主要癥狀均被中醫(yī)所認(rèn)知、歸納,總結(jié)出“心悸”“支飲”“喘證”“心脹”“腎水”“心水”等病,可以與今天的臨床癥狀對應(yīng)。既往有學(xué)者發(fā)現(xiàn),HF的基本病機是心氣虛,貫穿疾病始終,并可伴隨水停、血瘀等實證病機[40];在心氣虛的基礎(chǔ)上,病機可進(jìn)一步發(fā)展為氣陰兩虛或陽虛,衍生諸多癥狀。芪參桃紅顆粒針對HF核心病機所設(shè),重在補心氣,兼顧活血利水。本實驗中,M組呈現(xiàn)顯著的心力衰竭氣虛血瘀證表現(xiàn),如運動減弱、抓取反應(yīng)力降低、皮毛光澤差、納差;相對于假手術(shù)組,SLW顯著增大,并可發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn),少量運動即可導(dǎo)致急促的胸腹呼吸運動。此外可以明顯發(fā)現(xiàn),術(shù)后2、4周時,對各組動物眼球取血,M組剝離眼球后,血液滴速緩慢、血色暗淡、血量少且易凝,T組剝離眼球后,血流更快,血液貼壁流動性好,血液鮮紅,出血量大,據(jù)此總結(jié)發(fā)現(xiàn),氣虛血瘀證顯著存在于小鼠TAC心衰模型中,且芪參桃紅顆?；钛Ч黠@;并且,根據(jù)SLW可以發(fā)現(xiàn),M組顯著高于S組與其他各組,全身血脈皆過于肺,心氣虛時,心臟無力鼓動血行,氣亦不能發(fā)揮氣帥血行的功能,血停于脈中為淤血,故而脈道不通,水道不利,兼全身氣虛,肺脾腎三臟氣化失司,發(fā)為水飲停聚。肺具有通調(diào)水道的功能與朝百脈的特性,當(dāng)水停于肺時,就可見小鼠動則喘息,伴肺臟體積增大、SLW升高。芪參桃紅顆粒重在益氣,兼顧活血利水,有效改善TAC心衰小鼠的心衰癥狀、病理表現(xiàn)、血液流動與SLW,這些結(jié)果印證上述理論在動物模型中的表現(xiàn),并對本團隊前期相關(guān)成果作了進(jìn)一步的補充與論證?！堆C論》說:“氣為血之帥……氣得之而靜謐?！薄稄埵厢t(yī)通》說:“蓋氣與血……血不得氣,則凝而不流。”可見,在血液運行,氣血關(guān)系中,氣具有主導(dǎo)作用,血的異常運行與氣的病理變化密切相關(guān),此外,《素問·痿論》亦強調(diào):“心主身之血脈?！奔葱慕y(tǒng)帥全身血脈。以上理論再次強調(diào)了氣血的密切聯(lián)系,尤其是血液有賴于心氣的推動,才能在脈中環(huán)流不息,發(fā)揮濡養(yǎng)周身的作用。雖然氣血概念,古今有所區(qū)別,但古人對血液運行的觀察,與現(xiàn)代無太多出入,都是血液循行脈中,停于脈中或流于脈外是為瘀血。

綜合以上實驗結(jié)果及分析,芪參桃紅顆?？梢跃徑鈮毫ω?fù)荷心衰小鼠的心肌重構(gòu)并改善心功能;其機制可能是基于細(xì)胞自噬并調(diào)控相關(guān)miRNA,在心衰發(fā)生發(fā)展的過程中,芪參桃紅顆粒可能上調(diào)或下調(diào)心肌細(xì)胞自噬水平趨向于某種特定程度,以產(chǎn)生相應(yīng)的保護(hù)作用。本次實驗并未進(jìn)行自噬流及自噬關(guān)鍵蛋白檢測,僅能通過相關(guān)miRNA推斷芪參桃紅顆粒對于自噬干預(yù)作用的趨勢,但未得到直接的自噬趨勢證據(jù),下一步可以基于miRNA測序差異基因,檢測目標(biāo)蛋白的差異表達(dá),并直接觀測心肌細(xì)胞自噬流與線粒體自噬變化,進(jìn)一步探究芪參桃紅顆粒治療心力衰竭的作用機制。

利益沖突聲明:無。