桑葉化學成分研究

趙金梅 孟凡林 王楠 張貴會

摘 要：目的：針對桑葉95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的化學成分進行研究。方法：利用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜和制備HPLC等色譜技術對化學成分進行分離；利用質譜、核磁共振波譜等鑒定技術，結合文獻數據，鑒定化合物結構。結果：從桑葉95%乙醇提取物分離得到10個化合物，分別為紫云英苷（1）、槲皮素-3-O-洋槐糖苷（2）、山奈酚（3）、槲皮素-3-O-β-D木糖苷（4）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（5）、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、熊果酸（7）、矢車菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（8）、香橙素（9）、沒食子酸（10）。結論：鑒定出的化合物1、2、4、5、6為首次從該植物中分離得到。

關鍵詞：桑葉；化學成分；結構鑒定

Chemical Constituents from the Leaves of Morus nigra L.

ZHAO Jinmei1， MENG Fanlin2， WANG Nan2， ZHANG Guihui2*

（1.Horqin Left Wing Middle Banner Menda Central School Tongliao City， Tongliao 029100， China; 2.Zhalute Banner Market Inspection and Testing Center， Tongliao 029100， China）

Abstract Objective： To study the chemical constituents of the ethyl acetate fraction from the ethanol extract of the leaves of Morus nigra L. Method： The chemical constituents were isolated by means of silica gel column chromatography， reverse phase ODS chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography and prepared high performance liquid chromatography; the structures of the compounds were identified by means of mass spectrometry， nuclear magnetic resonance spectroscopy and lit-erature data. Result： Ten compounds were isolated from the ethanol extract of the leaves of Morus nigra L.， and identified as astragalin（1）， quercetin-3-O-robinobioside（2）， kaempferol（3）， quercetin-3-o-β-D-xylopyranoside（4）， kaempferol-3-o-rutoside（5）， kaempferol-7-o-β-D-glucopyranoside（6）， ursolicacid（7）， cyanidin-3-o-β-D-galactopyranoside（8）， aromadendrin（9）， gallic acid（10）. Conclusion： Compounds 1， 2， 4， 5， 6 are isolated from the plan for the first time.

Keywords： leaves of Morus nigra L.; chemical constituents; structural identification

隨著生活水平的提升，人們的保健意識越來越強，西藥由于自身的理論局限性，很難從整體上滿足人們快節(jié)奏的生活需求。而中醫(yī)藥中存在著大量高效低毒的先導化合物，對其化學成分進行研究具有重要的意義。桑葉屬于藥食同源類物質，味苦、甘、性寒、歸肺、肝經[1-2]，具有疏風清熱、涼血明目、清肺潤燥的功效[3-4]。本課題組前期對桑葉中的主要活性物質黃酮、生物堿、多糖的提取工藝、含量測定、結構鑒定等進行了較為系統(tǒng)的研究，發(fā)現其中一些化合物具有較強的生物活性[5-7]。本實驗對桑葉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進行系統(tǒng)的化學成分研究，分離鑒定出10個化合物，分別為紫云英苷（1）、槲皮素-3-O-洋槐糖苷（2）、山奈酚（3）、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷（4）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（5）、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、熊果酸（7）、矢車菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（8）、香橙素（9）、沒食子酸（10）。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

Thermo TSQ Quantum三重四極桿液質聯用儀（美國賽默飛世爾有限公司）；2767 waters制備液相色譜（美國waters公司）；e2695高效液相色譜儀（沃特世科技有限公司）；C-605中壓柱色譜系統(tǒng)（瑞士步琪有限公司）；RE-5299旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；MS105DU電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；AV 800超導脈沖傅立葉變換核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；DEF-6020真空干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司）；超純水機（成都超純科技有限公司）。

1.2 材料與試劑

葡聚糖凝膠填料SephadexLH-20瑞典pharmacia公司；反相ODS色譜美國waters公司；制備型液相色譜柱（300 mm×21 mm，10 μm），美國Waters公司；液相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美國Waters公司；柱色譜硅膠80～100目、薄層層析用聚酰胺，青島海洋化工有限公司；甲醇、乙腈色譜純；其他化學試劑均為市售分析純，。

桑葉于2021年8月采集，采自新疆維吾爾族自治區(qū)和田地區(qū)，經扎魯特旗市場檢驗檢測中心孟凡林中藥師鑒定為Morus nigra L.。桑葉粉碎過100目篩備用。

1.3 實驗方法

取過100目篩的桑葉粉末3.2 kg，用95%乙醇滲漉提取，滲漉得到的藥液經60 ℃水浴真空旋轉蒸發(fā)儀濃縮，直至無醇味后得浸膏450.98 g，加入熱水溶解混懸，用乙酸乙酯劇烈振搖萃取4次，每次用量為1.5 L。合并萃取液旋轉蒸發(fā)至近干，減壓濃縮得到乙酸乙酯浸膏122.36 g。取部分浸膏用甲醇溶解后加入硅膠攪拌均勻，進行干法上樣。

用甲醇-乙酸乙酯（80∶20→50∶50→

20 ∶80，體積比）梯度洗脫，經TLC薄層HPLC檢測后合并相似組分，得到5個活性段（Fi.1～Fi.5）。其中，Fi.2經C18中壓色譜柱，用30%～40%甲醇梯度洗脫，得到Fi.2-1和Fi.2-2組分；Fi.2-1和Fi.2-2經高壓制備色譜，以30%～40%甲醇水梯度洗脫，得到化合物1（6.2 mg）和化合物8（8.9 mg）。Fi.4經C18中壓柱色譜，用20%～30%甲醇梯度洗脫，得到化合物4（16.7 mg）。Fi.1反復多次上樣于Sephadex LH-20凝膠柱色譜，以甲醇洗脫、純化，得到化合物2（10.4 mg）。Fi.3經C18中壓色譜柱，用10%～30%甲醇梯度洗脫，得到Fi.3-1和Fi.3-2組分，Fi.3-1重結晶得到化合物3（9.8 mg）；將Fi.3-2經高壓制備色譜，分別用10%～30%的甲醇梯度洗脫，得到化合物5（6.3 mg）。Fi.5經C18中壓色譜柱，用20%～40%甲醇梯度洗脫，得到Fi.5-1和Fi.5-2組分，Fi.5-2經Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫，經高壓制備色譜得化合物7（18.5 mg）。Fi.5-1進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯-甲醇（80∶20→50∶50→20 ∶80）梯度洗脫，得到

3個組分Fi.5-1-1～Fi.5-1-3，Fi.5-1-1進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯-甲醇（60∶40）洗脫，得化合物10（25.7 mg）；Fi.5-1-2經Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫，得到化合物6（24.5 mg）；Fi.5-1-3經Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇水洗脫，經高壓制備色譜得化合物9（8.8 mg）。

2 結果與分析

化合物1為淡黃色粉末，C21H20O11，電噴霧電離質譜m/z：447.44[M-H]-；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：8.04.（2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，-6′），6.87（2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，-5′），12.66

（1H，s，5-OH），6.08（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），

6.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），5.59（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），3.10～3.55（6H，m，Glc-H）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：177.55（C-4），161.88（C-5），164.12（C-7），160.25（C-4′），156.87（C-8a），156.52（C-2），133.08（C-3），130.84（C-2′，6′），121.03（C-1′），115.47（C-3′，5′），104.64（C-4a），101.35（C-1″），98.08（C-6），94.33（C-8），77.92（C-3″），76.39（C-5″），73.29（C-2″），69.68（C-4″），60.28（C-6″）。該數據與文獻[8]中的化合物進行比對，發(fā)現結構基本一致。故鑒定為紫云英苷。

化合物2為黃色粉末（甲醇），C27H30O16，電噴霧電離質譜m/z：611.52[M+H]+； 1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：7.87（1H，s，H-2′），7.49（1H，d，J=7.8 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J=7.7 Hz，H-5′），6.28（1H，brs，H-8），6.39（1H，brs，H-6），5.15（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），4.22（1H，brs，H-1′′′），3.81（1H，m，H-2″），3.82（1H，m，H-4″），3.84（1H，m，H-6″b），3.55（1H，m，H-5″），3.66（1H，m，H-2′′′），3.75（1H，m，H-3″），3.52（1H，m，H-5′′′），3.54（1H，m，H-3′′′），3.45（1H，m，H-6″a），3.26（1H，m，H-4′′′），1.25（3H，d，J=6.0 Hz，H-6′′′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.8（C-2），135.9（C-3），179.6（C-4），163.3（C-5），100.5（C-6），167.1（C-7），95.2（C-8），158.9（C-9），106.3（C-10），122.4（C-1′），118.8（C-2′），145.8（C-3′），150.2（C-4′），116.5（C-5′），123.4（C-6′），105.6（C-1″），74.5（C-2″），75.3（C-3″），70.9（C-4″），75.4（C-5″），67.7（C-6″），102.1（C-1′′′），72.3（C-2′′′），72.5（C-3′′′），73.6（C-4′′′），69.9（C-5′′′），18.8（C-6′′′）。以上數據與文獻報道一致[9]，故鑒定為槲皮素-3-O-洋槐糖苷。

化合物3為淡黃色粉末，C15H10O6噴霧電離質譜m/z：287.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：12.54（1H，s，5-OH），10.87（1H，s，7-OH），10.66（1H，s，3′-OH），9.45（1H，s，3-OH），8.00（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.95（2H，d，J=8.8，Hz，H-3′，5′），6.54（1H，d，J=8.7 Hz，H-8），6.20（1H，d，J=2.3 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：176.55（C-4），164.88（C-7），161.12（C-4′），159.25（C-9），156.65（C-5），147.52（C-2），136.08（C-3），130.84（C-2′，6′），122.03（C-1′），115.97（C-3′，5′），103.64（C-10），99.08（C-6），93.33（C-8）。以上數據與文獻報道一致[10]，故鑒定為山奈酚。

化合物4為黃色粉末，C20H18O11噴霧電離質譜

m/z：435.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）

δ：12.64（1H，s，5-OH），10.90（1H，s，7-OH），9.76（1H，s，4′-OH），9.35（1H，s，3′-OH），7.50（1H，d，J=2.7 Hz，H-2′），7.55（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），6.84（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.40（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.15（1H，s，H-6），5.45（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.85（C-4），164.78（C-7），161.12（C-5），156.75（C-2），156.87（C-9），149.52（C-4′），145.08（C-3′），133.84（C-3），121.93（C-6′），121.47（C-1′），116.64（C-5′），115.35（C-2′），104.08（C-10），102.33（C-1″），99.22（C-6），94.39（C-8），76.29（C-3″），74.68（C-2″），69.28（C-4″），66.58（C-5″）。以上數據與文獻報道一致[11]，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-木糖苷。

化合物5為白色粉末，C27H30O15，電噴霧電離質譜m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：8.17（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′/H-6′），6.79（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′/H-5′），6.45（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.23（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.22（1H，d，J=7.2 Hz，H-1glc），4.50（1H，s，H-1rha）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.47（C-2），135.46（C-3），179.56（C-4），105.18（C-4a），163.22（C-5），100.11（C-6），166.25（C-7），95.21（C-8），159.63（C-8a），122.90（C-1′），132.55（C-2′/C-6′），116.34（C-3′/C-5′），161.47（C-4′），3-O-Glc，102.61（C-1glc），75.91（C-2glc），78.34（C-3glc），71.61（C-4glc），77.32（C-5glc），68.17（C-6glc），rha，102.16（C-1rha），72.22（C-2rha），72.54（C-3rha），74.50（C-4rha），69.89（C-5rha），18.10（C-6rha）。以上數據與文獻報道一致[12]，故鑒定為山奈酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物6為黃色粉末，C21H20O11，電噴霧電離質譜m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：7.9（2H，d，J=8.3 Hz，H-2′，6′），6.96（2H，d，J=8.2 Hz，H-3′，5′），6.48（1H，brs，H-8），6.25（1H，brs，H-6），5.52（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：147.28（C-2），136.26（C-3），177.23（C-4），161.22（C-5），98.00（C-6），162.13（C-7），93.19（C-8），156.15（C-9），104.21（C-10），121.25（C-1′），131.41（C-2′，6′），115.13（C-3′，5′），160.33（C-4′），101.33（C-1″），74.24（C-2″），76.65（C-3″），70.24（C-4″），75.17（C-5″），62.15（C-6″）。以上數據與文獻報道一致[13]，故鑒定為山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7為白色粉末，C30H48O3，電噴霧電離質譜m/z：457.68[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：11.81（1H，s，COOH），5.14（1H，t，J=3.7 Hz，H-12），3.55（1H，m，H-3），2.15（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.15（3H，s，24-CH3），0.95（3H，s，26-CH3），0.91（3H，s，25-CH3），0.87（3H，s，23-CH3），0.88（3H，d，J=6.4 Hz，30-CH3），0.86（3H，s，27-CH3），0.68（3H，d，J=6.0 Hz，29-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：38.19（C-1），27.14（C-2），77.23C-3），38.91（C-4），55.22（C-5），18.15（C-6），33.22（C-7），40.24（C-8），47.23（C-9），36.18（C-10），23.275（C-11），125.40（C-12），138.16（C-13），42.11（C-14），28.27（C-15），124.31（C-16），47.15（C-17），52.18（C-18），39.10（C-19），38.17（C-20），30.26（C-21），37.10（C-22），28.10（C-23），16.36（C-24），5.72（C-25），17.14（C-26），23.31（C-27），178.28（C-28），17.25（C-29），21.36（C-30）。以上數據與文獻報道一致[14]，故鑒定為熊果酸。

化合物8為紫黑色粉末，C21H21O11，電噴霧電離質譜m/z：449.25[M]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）

δ：8.95（1H，s，H-4），8.26（1H，dd，J=2.0，

8.0 Hz，H-6′），7.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），

6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.84（1H，brs，H-8），6.67（1H，brs，H-6），5.26（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：64.60（C-2），145.18（C-3），137.22（C-4），159.12（C-5），102.22（C-6），170.15（C-7），94.58（C-8），157.82（C-9），113.25（C-10），121.23（C-1′），117.115（C-2′），147.24（C-3′），158.19（C-4′），115.32（C-5′），128.23（C-6′），104.90（C-Gal-1），72.23（C-Gal-2），74.26（C-Gal-3），70.23（C-Gal-4），77.22（C-Gal-5），62.78（C-Gal-6）。以上數據與文獻報道一致[15]，鑒定為矢車菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物9為黃色針晶，C15H12O6，電噴霧電離質譜m/z：311.40[M+Na]+；1H-NMR（CD3OD，

800 MHz）δ：7.46（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=7.8 Hz，H-3′，5′），6.52（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.66（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），4.95（1H，d，J=12.6 Hz，H-2），4.56（1H，d，J=126 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：84.25（C-2），72.10（C-3），203.16（C-4），152.17（C-5），93.15（C-6），170.14（C-7），101.15（C-8），159.28（C-9），99.57（C-10），115.3（C-1′），128.11（C-2′），109.58（C-3′），161.22（C-4′），109.64（C-5′），128.16（C-6′）。以上數據與文獻報道對照基本一致[16]，故鑒定為香橙素。

化合物10為針狀結晶，C7H6O5，電噴霧電離質譜m/z：171.10[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）

δ：7.05（2H，s，H-2，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：120.54（C-1），108.25（C-2，6），

14.88（C-3，5），138.65（C-4），170.14（C-7）。以上數據與文獻報道對照基本一致[17]，故鑒定為沒食子酸。

3 結論

本實驗從桑葉中分離得到10個化合物，其中黃酮類化合物8個，三萜類化合物1個，有機酸類化合物1個，其中化合物1、2、4、5和6為首次從該植物中分離得到。為了拓展人們對桑屬植物物質基礎的認識，有必要對其化學成分進行分離鑒定，從而為該屬植物的開發(fā)與利用提供理論依據，為合成藥物、新藥研發(fā)、人類的健康不斷提供活性的先導化合物。

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