ABO溶血癥患兒實驗室結(jié)果與溶血 貧血程度的相關(guān)性分析

李媧　吳旭良　聶錦標　單款玲

【摘要】? 目的? ? 探討新生兒ABO溶血癥（ABO-HDN）患兒不同性別、確診日齡、母嬰血型類別、直接抗人球蛋白試驗（DAT）凝集強度與新生兒患兒的溶血、貧血程度的關(guān)系。方法? ? 對2020年1月—2021年10月期間確診的255例ABO-HDN病例進行分析，檢測所有患兒的溶血三項和紅細胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（HB）、血小板計數(shù)（platelet count，PLT）、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、間接膽紅素（indirect bilirubin，IBIL）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH），根據(jù)患兒性別、確診日齡、血型類別、DAT凝集強度等分成不同組別，比較各組間RBC、HB、PLT、TBIL、IBIL、LDH差異，并分析病例臨床資料與溶血、貧血之間的關(guān)系。結(jié)果? ? 不同性別患兒HDN溶血程度比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；確診日齡為1～2 d組患兒的PLT、TBIL、IBIL水平低于確診日齡為3 d及以上組，LDH水平高于確診日齡為3 d及以上組（P<0.05）；O-A組患兒RBC、HB水平高于O-B組（P<0.05），TBIL、IBIL、LDH水平低于O-B組（P<0.05）；O-AB組患兒TBIL、IBIL水平低于O-A組和O-B組（P<0.05），RBC計數(shù)高于O-B組（P<0.05）；不同DAT凝集強度的患兒相比較其溶血程度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論? ? HDN患兒的貧血溶血程度與性別差異關(guān)聯(lián)度較小、與DAT凝集強度無關(guān)，與HDN確診日齡、不同母嬰血型關(guān)聯(lián)度較大，對于確診日齡≤2 d、母嬰血型為O-A、O-B的患兒，應盡早做溶血三項試驗以明確診斷，密切關(guān)注RBC、HB、TBIL和IBIL水平的變化情況。

【關(guān)鍵詞】? ABO溶血癥； 溶血程度； 貧血

Correlation analysis between laboratory results and degree of hemolysis in children with ABO-HDN

Li Wa，Wu Xuliang，et al.The Guangzhou Zengcheng Maternal and Child Health Hospital，Guangzhou，Guangdong? 511300

【Abstract】? Objective? ? To explore the relationship between different gender， age of diagnosis，maternal and infant blood group， direct antiglobulin test （DAT） agglutination intensity and the degree of hemolysis and anemia in newborns with ABO hemolysis （ABO-HDN）. Methods? ? 255 cases of ABO-HDN diagnosed from January 2020 to October 2021 were analyzed.The hemolysis， erythrocyte count （RBC）， hemoglobin concentration （HB）， platelet count （PLT）， total bilirubin （TBIL）， indirect bilirubin （IBIL） and lactate dehydrogenase （LDH） were measured according to the sex， age of diagnosis， blood type Dat agglutination intensity was divided into different groups. The differences of RBC， Hb， PLT， TBIL， IBIL and LDH among the groups were compared， and the relationship between clinical data and hemolysis and anemia was analyzed. Results? ? there was no significant difference in the degree of HDN hemolysis between children of different genders （P>0.05）. The levels of PLT， TBIL and IBIL in 1-2D group were significantly lower than those in 3D and above group， and the level of LDH was higher than those in 3D and above group （P<0.05）. The levels of RBC and Hb in O-A group were higher than those in O-B group （P<0.05）， the levels of TBIL， IBIL and LDH in o-ab group were lower than those in O-A group and O-B group （P<0.05）， and the RBC count in o-ab group was higher than that in O-B group （P<0.05）. There was no significant difference in hemolysis degree between children with different dat agglutination intensity （P>0.05）. Conclusion? ? the degree of anemia and hemolysis in children with HDN has nothing to do with gender differences and DAT agglutination intensity. It is closely related to the age of HDN diagnosis and the incidence of different maternal and infant blood groups.

【Key Words】? ABO-HDN； Laboratory results； Degree of hemolysis； Anemia Relevance

中圖分類號：R722.18? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1672-1721（2023）23-0100-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.23.033

新生兒溶血癥（hemolytic disease of thenewborn，HDN）是指由于母親懷孕時，母體內(nèi)的不同血型IgG類抗體通過胎盤進入胎兒血液循環(huán)[1]，引起的一系列免疫性溶血性反應[2]。臨床常見ABO血型系統(tǒng)引起的新生兒溶血癥，即ABO-HDN[3]。其主要的臨床癥狀為新生兒早期出現(xiàn)輕度黃疸、貧血、水腫、肝脾腫大[4]等，及時治療一般不會發(fā)展為危重病例；但當溶血程度較重時，胎兒可出現(xiàn)水腫、心力衰竭、高膽紅素血癥，甚至發(fā)展為膽紅素腦病，造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙，更為嚴重者則可出現(xiàn)胎兒早期自然流產(chǎn)或中晚期死胎[5]。隨著近年來二孩、三孩政策的放開，越來越多的新生兒將面臨這一疾病，因此，重視HDN的發(fā)生，早預防、早診斷、早治療非常重要。為了能更高效地為HDN的診療過程提供依據(jù)，本文回顧分析了2020年1月—2021年10月廣州市增城區(qū)婦幼保健院255例ABO-HDN患兒不同性別、確診日齡、血型分類、直抗試驗凝集強度與患兒溶血程度的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 對象? ? 選取2020年1月—2021年10月廣州市增城區(qū)婦幼保健院確診的255例ABO-HDN病例為研究組，其中男性121例，女性134例。

1.2? ? 儀器與試劑? ? 儀器：RBC、HB、PLT由希森美康XN-1000全自動血細胞分析儀檢測；TBIL、IBIL、LDH由日立7180全自動生化分析儀檢測；離心機為湖南湘儀實驗室儀器有限公司制造，離心機型號為CTK12OC；凝膠卡孵育器和DG-SPIN血型卡專用離心機由長春博研科學儀器有限公司生產(chǎn)。

試劑：抗人球蛋白檢測卡由西班牙戴安娜公司生產(chǎn)，RBC、HB、PLT為Sysmex公司配套試劑，TBIL、IBIL、LDH試劑由邁克生物提供。

各檢測嚴格按照說明書進行操作，且檢測前已確保當日儀器質(zhì)控在控。

1.3? ? 方法

1.3.1? ? 用微柱凝膠法鑒定新生兒血型，具體步驟按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[6]中的指導。

1.3.2? ? 所有患兒進行新生兒溶血三項檢測，包括直接抗人球蛋白試驗（direct antinglobulin test，DAT）、血清游離抗體試驗、紅細胞放散試驗，記錄DAT凝集強度。RBC、HB、PLT用紫色EDTA-K2管采靜脈血1.8 mL混勻。TBIL、IBIL、LDH用黃色分離膠管采靜脈血3 mL，3 000 r/min離心10 min。所有檢測需在抽血后2 h內(nèi)成。

1.3.3? ? HDN診斷標準? ? 當新生兒溶血三項試驗中的任意2項陽性或3項均陽性時，診斷為HDN陽性，若只有釋放試驗單獨1項陽性時也診斷為HDN陽性[7]。

1.4? ? 統(tǒng)計學方法? ? 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料以x±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以百分比表示，采用χ²檢驗；呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，組間比較采用獨立樣本t檢驗和單因素ANOVA檢驗；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)，采用非參數(shù)K-W檢驗；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 不同性別的患兒HDN溶血、貧血程度比較? ? 在ABO-HDN的255例患兒中，男性患兒121例（47.5%），女性患兒134例（52.5%），2組PLT相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余研究指標比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2? ? 不同確診日齡患兒的溶血、貧血程度比較? ? 確診日齡為1～2 d組患兒的PLT、TBIL、IBIL水平均明顯低于確診日齡為3 d及以上組，LDH水平明顯高于確診日齡為3 d及以上組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；2組間RBC及HB差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

2.3? ? 不同母嬰血型的患兒溶血、貧血程度比較? ? O-A組患兒RBC、HB水平明顯高于O-B組，TBIL、IBIL、LDH水平明顯低于O-B組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；O-AB組患兒TBIL、IBIL水平顯著低于O-A組和O-B組，RBC數(shù)量高于O-B組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。3組之間PLT數(shù)量比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

2.4? ? 不同DAT凝集強度的患兒溶血、貧血程度比較? ? 在本次收集數(shù)據(jù)中，沒有出現(xiàn)DAT結(jié)果為陽性（4+）的強陽性標本，所以強陽性標本的比較結(jié)果缺如。而在陰性、陽性（≤1+）、陽性（2+）、陽性（3+）幾組中，各實驗室結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表4。

3? ? 討論

HDN原理為胎兒通過基因遺傳獲得不同于母體的血型抗原，這些抗原通過臍帶激活了母體的免疫系統(tǒng)，使母體產(chǎn)生了對應的免疫性IgG抗體，IgG抗體進入胎兒血液循環(huán)，胎兒紅細胞被來自母親的IgG抗體所包被并遭到破壞，出現(xiàn)新生兒黃疸、溶血、肝脾腫大等溶血癥癥狀。母體產(chǎn)生的IgG為抗-A或抗-B時稱為ABO-HDN。目前臨床上常用新生兒溶血三項試驗來診斷ABO-HDN[8]。直接抗人球蛋白試驗（DAT）用來檢測母體滲透的IgG抗體是否令新生兒的紅細胞致敏，新生兒紅細胞抗原點位少、密度低，抗原性較弱，能結(jié)合的母體IgG抗體也相應較少，DAT結(jié)果可出現(xiàn)弱陽性或陰性。血清游離抗體試驗主要檢測來自母體的IgG抗體是否存在于新生兒血清中，若血清中出現(xiàn)未結(jié)合到紅細胞的多余抗體，則不停產(chǎn)生的新紅細胞仍會致敏，病程持續(xù)時間較長，為疾病的嚴重程度提供了參考依據(jù)。以上2種試驗陽性并不能確診HDN，而紅細胞抗體釋放試驗可分別檢測放散液中和酶處理的患兒紅細胞血型IgG抗體，若檢測結(jié)果為陽性，則表明患兒紅細胞與來自母體的IgG抗體相結(jié)合，可直接診斷新生兒溶血癥[9]。本次研究結(jié)果中，直接抗人球蛋白陽性率為14.9%（38/255），游離抗體試驗陽性率為81.2%（207/255），釋放試驗陽性率為100%。HDN屬于血管外溶血，原理為紅細胞受到損傷，在肝和脾內(nèi)被巨噬細胞識別并且吞噬破壞。人體膽紅素主要來自血中破碎的紅細胞，紅細胞破碎所釋放的血紅蛋白在體內(nèi)經(jīng)過一系列的代謝，最后變成膽紅素，分為直接膽紅素與間接膽紅素。間接膽紅素在體內(nèi)不與葡萄糖醛酸相結(jié)合，更能直接反映體內(nèi)紅細胞的破壞程度。LDH在紅細胞、心肌、肝臟及肌肉中廣泛存在，對溶血反應迅速。伴隨溶血的進展，TBIL、IBIL、LDH不同程度的升高，HB濃度有所降低，進而導致了RBC、PLT計數(shù)的進一步改變，最終出現(xiàn)貧血的變化。

尹明偉等[10]研究結(jié)果顯示，在HDN患病的性別差異上，女嬰確診率高于男嬰，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。本研究羅列了男性患兒、女性患兒的RBC、HB、PLT、TBIL、IBIL、LDH水平的差異，發(fā)現(xiàn)除PLT差異有統(tǒng)計學意義外（P<0.05），其余指標女嬰均較男嬰有不同程度偏低，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。提示HDN患兒溶血貧血的程度與患兒性別的關(guān)聯(lián)度較小。分析原因，可能是由于男性女性生理上的不同，男性女性各時期指標的正常參考范圍也有所不同，比如HB在各時期多是男性高于女性，這是由于生理發(fā)育不同而呈現(xiàn)出來的差異性。

確診日齡為1～2 d組患兒的PLT、TBIL、IBIL水平均明顯低于確診日齡為3 d及以上組，LDH水平明顯高于確診日齡為3 d及以上組（P<0.05），而RBC、HB差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。臨床上新生兒出生24 h以內(nèi)，常見黃疸出現(xiàn)較早，發(fā)展較為迅速，血清膽紅素以間接膽紅素增高較為顯著，部分患兒黃疸較輕，程度接近生理性黃疸，因而及時進行實驗室血型血清學檢測，是臨床早發(fā)現(xiàn)早治療的重要措施。本次研究結(jié)果可見，HDN檢出的陽性率與患兒出生時間存在較強關(guān)聯(lián)，即患兒檢測時日齡越小，檢出的陽性率越高。新生兒剛出生時，體內(nèi)仍存在較多的游離IgG血型抗體及致敏紅細胞，而伴隨發(fā)病時間的延長，新生兒血液中游離IgG抗體及致敏紅細胞含量越來越少，大部分IgG抗體失去了反應原性，最終導致檢出率降低。故而，對于疑似HDN的患兒，應盡早進行血清學檢測才能減少漏診率。

O-A組RBC、HB水平高于O-B組，TBIL、IBIL、LDH水平低于O-B組；O-AB組TBIL、IBIL水平均遠低于O-A、O-B組；O-B組RBC計數(shù)低于O-AB組，以上差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在血型分析中，有學者發(fā)現(xiàn)A型血的患兒相對于B型血更加容易發(fā)生ABO-HDN，認為新生兒紅細胞上的A型抗原決定簇多，更加容易結(jié)合IgG抗體[11]；但是也有學者研究認為ABO-HDN的發(fā)病率與血型無相關(guān)性[12]。劉建朝等[13]研究顯示，O-AB組TBIL均高于O-A組和O-B組，HB低于O-B組，這是因為O型孕婦可產(chǎn)生IgG類抗-A、抗-B、抗-AB，以上抗體均可以與AB型白細胞結(jié)合，與單一抗體相比，溶血程度更高。在本研究顯示的結(jié)果中，A型血與B型血新生兒患病數(shù)量相似，但B型血患兒相對于A型血患兒，有更明顯的貧血與溶血傾向；A型、B型血的患兒與AB型血患兒相比，溶血表現(xiàn)也更明顯。本研究溶血結(jié)論與文獻[11-13]中相差較大，可能是由于本次研究所選取的數(shù)量較少，病例種類較為集中，也有可能與不同研究人員納入的標本中人群偏倚有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，DAT陽性率為14.9%（38/255）較低，在直抗試驗凝集強度為陰性、陽性1+、陽性2+、陽性3+的各組數(shù)據(jù)中，監(jiān)測的各實驗室結(jié)果比較，差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。直接抗人球蛋白試驗檢測結(jié)果為陰性也不能排除HDN的可能。在本次收集數(shù)據(jù)中，沒有出現(xiàn)DAT結(jié)果為陽性（4+）的強陽性標本，所以強陽性標本的比較結(jié)果缺如，這也可能是造成本次結(jié)果無差異性的一個客觀原因，需進一步擴大標本量繼續(xù)監(jiān)測。

綜上所述，HDN患兒的貧血、溶血程度與不同性別類型關(guān)聯(lián)度較小，與直抗試驗凝集強度無關(guān)，與HDN患兒檢測及確診日齡、不同母嬰血型的關(guān)聯(lián)性較大，對于確診日齡≤2 d、母嬰血型為O-A、O-B的患兒，應盡早做溶血三項試驗以明確診斷，密切關(guān)注RBC、HB和TBIL、IBIL水平的變化情況，做好ABO-HDN早期預防以及應對措施，減少ABO-HDN造成的影響，提高新生兒的生存質(zhì)量。

參考文獻

[1] 陳清艷，王秋實.新生兒溶血病發(fā)病機制及產(chǎn)前診斷研究進展[J].臨床輸血與檢驗，2021，23（5）：578-584.

[2] 劉瑩，楊珍珍，劉小艷，等.O型血孕婦血清中IgG抗A（B）抗體效價與ABO新生兒溶血癥的相關(guān)性研究[J].臨床醫(yī)學研究與實踐，2021，6（15）：7-9.

[3] 王文婷，黨盼玉，張保萍，等.抗-D抗體致新生兒溶血癥的輸血策略及其預后療效評估分析[J].臨床輸血與檢驗，2021，23（1）：38-40.

[4] 張鈺，張璐，許紀玲，等.1 300例新生兒溶血病血型血清學檢測結(jié)果分析[J].中國輸血雜志，2020，33（9）：922-924.

[5] MARKHAM K B，ROSSI K Q，NAGARAJA H N，et al.Hemolytic disease of the fetus and newborn due to multiple maternal antibodies[J].Am J Obstet Gynecol.2015，213（1）：68.1-5.

[6] 陳靜思，裘曉樂.530例新生兒溶血病檢測及危險因素分析[J].中國婦幼保健，2020，35（24）：4758-4760.

[7] 朱潔好，葉伙梅.189例新生兒ABO溶血三項試驗結(jié)果的分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2021，39（2）：472-473，485.

[8] 蔡大鳳，榮成智，秦雪，等.新生兒溶血病患兒的實驗結(jié)果及相關(guān)因素分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2020，17（14）：2000-2003.

[9] 林粦梅，劉建武，王燕京.ABO新生兒溶血病與O型血孕婦IgG效價間的相關(guān)性分析[J].中國醫(yī)藥科學，2018，8（24）：209-212.

[10] 尹明偉，陳學軍，曾智，等.母嬰ABO血型不相合的高膽紅素血癥患兒新生兒溶血病確診率的影響因素分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2020，41（6）：663-666，670.

[11] 郭瑩瑩，霍姿含，王震，等.1 350例新生兒溶血三項試驗的血清學檢測分析[J].中國免疫學雜志，2016，32（9）：1357-1359，1363.

[12] 任明，強文，江夢天，等.新生兒溶血病檢查在重度高膽紅素血癥患兒診療中的意義[J].臨床血液學雜志，2019，32（6）：407-410，414.

[13] 劉建朝，王亞紅，賀鋒.新生兒溶血病患兒臨床資料與溶血程度關(guān)系的研究[J].臨床血液學雜志，2021，34（2）：105-108.

（收稿日期：2023-05-28）