circ-AFF2表達(dá)水平與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動(dòng)度的相關(guān)性研究

平佃輝

[摘要]?目的?探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid?arthritis，RA）患者外周血及關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2表達(dá)水平與疾病活動(dòng)度的關(guān)系。方法?選取2019年12月至2022年4月浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院治療的90例RA患者納入RA組，記錄其臨床資料與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，根據(jù)RA疾病活動(dòng)度評(píng)分（disease?activity?score-28，DAS28）將納入患者分為低活動(dòng)度組（n=32）、中活動(dòng)度組（n=34）和高活動(dòng)度組（n=24）；收集同期87例關(guān)節(jié)損傷患者納入對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time?fluorescent?quantitative?polymerase?chain?reaction，qRT-PCR）測(cè)定兩組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2表達(dá)水平，并檢測(cè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和膝關(guān)節(jié)超聲指標(biāo)。結(jié)果?RA組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2水平均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。低活動(dòng)度組、中活動(dòng)度組、高活動(dòng)度組患者的外周血與關(guān)節(jié)滑液中circ-AFF2表達(dá)水平及類(lèi)風(fēng)濕因子（rheumatoid?factor，RF）、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte?sedimentation?rate，ESR）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive?protein，CRP）、抗環(huán)瓜氨酸肽（anti-cyclic?cirtrullinated?peptide，CCP）、滑膜厚度依次升高，滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈阻力指數(shù)（resistance?index，RI）依次降低（P<0.05）。RA患者的外周血及關(guān)節(jié)滑液中circ-AFF2表達(dá)水平與RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度均呈正相關(guān)（P<0.05），與滑膜血流分級(jí)、RI呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。RA患者外周血和關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2、RF均為RA的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。結(jié)論?RA患者外周血與關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2表達(dá)水平均升高，且患者的疾病活動(dòng)度越高，circ-AFF2表達(dá)水平越高。

[關(guān)鍵詞]?類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；circ-AFF2；外周血；關(guān)節(jié)滑液；疾病活動(dòng)度

[中圖分類(lèi)號(hào)]?R593.22??????[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.15.005

Correlational?study?of?circ-AFF2?expression?level?with?disease?activity?in?patients?with?rheumatoid?arthritis

PING?Tianhui

Department?of?Orthopedics?and?Traumatology，?Huzhou?Hospital?of?Traditional?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Huzhou?313000，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?expression?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid?of?patients?with?rheumatoid?arthritis?（RA）?and?its?relationship?with?disease?activity.?Methods?90?patients?with?RA?treated?in?Huzhou?Hospital?of?Traditional?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?University?of?Traditional?Chinese?Medicine?were?included?in?RA?group，?and?their?clinical?data?and?laboratory?indicators?were?recorded.?According?to?disease?activity?score-28?（DAS28），?the?patients?were?divided?into?low-activity?group?（n=32），?medium-activity?group?（n=34）?and?high-activity?group?（n=24）;?another?87?patients?with?joint?injury?were?regarded?as?control?group.?The?expression?level?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid?was?determined?by?real-time?fluorescent?quantitative?polymerase?chain?reaction?（qRT-PCR）?method，?relevant?laboratory?indexes?and?ultrasonic?indexes?of?knee?joint?were?detected，?and?the?research?data?were?statistically?analyzed.?Results?The?expression?level?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid?of?patients?in?RA?group?were?significantly?higher?than?that?of?control?group?（P<0.05）.?The?expression?levels?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid，?rheumatoid?factor（RF），?erythrocyte?sedimentation?rate（ESR），?C-reactive?protein（CRP），?anti-cyclic?citrullinated?peptide（CCP）?and?synovial?thickness?increased?in?turn?（P<0.05），?while?the?synovial?blood?flow?grading?and?synovial?arterial?resistance?index?（RI）?decreased?in?turn?（P<0.05）.?The?expression?level?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid?of?patients?with?RA?was?positively?correlated?with?RF，?ESR，?CRP，?CCP，?and?synovial?thickness?（P<0.05），?and?was?negatively?correlated?with?synovial?blood?flow?grade?and?synovial?artery?RI?（P<0.05）.?Peripheral?blood?circ-AFF2，?joint?synovial?fluid?circ-AFF2，?and?RF?were?independent?risk?factors?for?patients?with?RA?（P<0.05）.?Conclusion?The?expression?level?of?circ-AFF2?in?peripheral?blood?and?synovial?fluid?of?patients?with?RA?is?increased，?and?the?higher?the?disease?activity?of?patients，?the?higher?the?expression?level?of?circ-AFF2.

[Key?words]?Rheumatoid?arthritis;?circ-AFF2;?Peripheral?blood;?Synovial?fluid;?Disease?activity

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid?arthritis，RA）是一種多因素自身免疫性疾病，與關(guān)節(jié)的慢性炎癥和關(guān)節(jié)破壞有關(guān)，其發(fā)病由異常調(diào)節(jié)性T細(xì)胞反應(yīng)的誘導(dǎo)和進(jìn)展決定[1-2]。隨著疾病的發(fā)展，RA患者關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)囊受到不同程度的損傷，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失[3]。相關(guān)臨床指標(biāo)有助于醫(yī)生更好地評(píng)估患者的疾病活動(dòng)度，進(jìn)而制訂治療計(jì)劃。環(huán)狀RNA（circular?RNA，circRNA）是來(lái)自后剪接外顯子或內(nèi)含子的一種特殊RNA，在人類(lèi)細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。臨床中與RA相關(guān)的circRNA較多，其中circ-AFF2是由基因AFF2經(jīng)反向剪接機(jī)制形成的共價(jià)閉合連續(xù)環(huán)，可影響轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。研究顯示，circ-AFF2在RA患者外周血中高表達(dá)，與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[5]。然而circ-AFF2與RA患者的疾病活動(dòng)度相關(guān)的研究報(bào)道較少，本研究旨在探討RA患者外周血和關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2表達(dá)水平與疾病活動(dòng)度的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1??資料與方法

1.1??一般資料

選取2019年12月至2022年4月于浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院治療的90例RA患者納入RA組，其中男25例，女65例；年齡20～75歲，平均（50.16±6.81）歲。收集同期87例關(guān)節(jié)損傷患者納入對(duì)照組，其中男29例，女58例；年齡20～73歲，平均（50.07±6.73）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《2018中國(guó)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診療指南》[6]中RA診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～80歲；③入組前未服用過(guò)生物制劑、激素、免疫抑制劑或其他影響免疫功能及病情的藥物；④RA和關(guān)節(jié)損傷患者均存在關(guān)節(jié)積液，且為膝關(guān)節(jié)損傷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并股骨頭壞死、強(qiáng)直性脊柱炎等其他關(guān)節(jié)疾病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、原發(fā)性血小板紫癜等其他免疫性疾病者；②嚴(yán)重糖尿病、高脂血癥、高血壓或心腦血管疾病者；③有嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病、感染性疾病、內(nèi)科疾病或代謝性疾病者。本研究經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州中醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)（倫理審批號(hào)：2020-011-01）。

1.2??方法

1.2.1??外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平檢測(cè)??收集兩組患者入組后（治療前）晨起空腹肘靜脈血5ml，置于干燥離心管中分離血清；膝關(guān)節(jié)腔穿刺采集患者的關(guān)節(jié)滑液。采用Trizol總RNA提取試劑盒（上海圣爾生物科技有限公司，批號(hào)：SB-MR009）分離提取樣品中總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度及濃度，反轉(zhuǎn)錄試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司，批號(hào)：RP1105）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄操作將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用美國(guó)Applied?Biosystems公司的V115896型實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time?fluorescent?quantitative?polymerase?chain?reaction，qRT-PCR）試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。qRT-PCR擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，45次循環(huán)。反應(yīng)以GAPDH為內(nèi)參，反應(yīng)結(jié)束后結(jié)果采用2–??CT法計(jì)算外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2相對(duì)表達(dá)量。

1.2.2??實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)采集??收集并記錄患者的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，主要包括類(lèi)風(fēng)濕因子（rheumatoid?factor，RF）、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte?sedimentation?rate，ESR）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive?protein，CRP）、抗環(huán)瓜氨酸肽（anti-cyclic?cirtrullinated?peptide，CCP）。參考Prevoo計(jì)算方式[7]計(jì)算RA疾病活動(dòng)度評(píng)分（disease?activity?score-28，DAS28），DAS28=0.56×壓痛關(guān)節(jié)數(shù)+0.28×腫脹關(guān)節(jié)數(shù)+0.7×ln（ESR）×1.08+0.16。根據(jù)DAS28-ESR將患者分為低活動(dòng)度組32例（2.6分

1.2.3??超聲檢查??采用GE?Voluson?E8超聲診斷儀，探頭頻率6～13.5MHz?；颊呷⊙雠P位，屈膝30°～45°，將超聲探頭縱向置于髕骨上端，觀察并記錄滑膜厚度和膝關(guān)節(jié)髕上囊積液。囑患者盡量屈膝90°，將超聲探頭橫向置于髕骨上端，觀察并記錄滑膜內(nèi)彩色血流信號(hào)、滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈阻力指數(shù)（resistance?index，RI）。

1.3??觀察指標(biāo)

兩組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平、不同疾病活動(dòng)度的RA患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平、各組患者的性別和年齡及RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度、滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈RI。

1.4??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS?25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，其中計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料檢驗(yàn)后服從正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組間采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK法；RA患者外周血和關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析；RA患者疾病活動(dòng)度的影響因素采用多因素Logistic回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??兩組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平比較

RA組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2??不同疾病活動(dòng)度RA患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平比較

高活動(dòng)度組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平均顯著高于中活動(dòng)度組和低活動(dòng)度組（P<0.05）；中活動(dòng)度組患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平均顯著高于低活動(dòng)度組（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3??不同疾病活動(dòng)度RA患者的臨床資料與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

三組患者的性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。高活動(dòng)度組患者的RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度均顯著高于中活動(dòng)度組和低活動(dòng)度組（P<0.05），滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈RI均顯著低于中活動(dòng)度組和低活動(dòng)度組（P<0.05）；中活動(dòng)度組患者的RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度均顯著高于低活動(dòng)度組（P<0.05），滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈RI均顯著低于低活動(dòng)度組（P<0.05），見(jiàn)表3。

2.4??RA患者外周血和關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，RA患者外周血和關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平與RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度均呈正相關(guān)（P<0.05），與滑膜血流分級(jí)、滑膜動(dòng)脈RI均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見(jiàn)表4。

2.5??RA患者疾病活動(dòng)度影響因素的Logistic回歸分析

以RA患者是否為高活動(dòng)度為因變量，以外周血circ-AFF2、關(guān)節(jié)滑液circ-AFF2、RF、ESR、CRP、CCP、滑膜血流分級(jí)、滑膜厚度、滑膜動(dòng)脈RI為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，外周血circ-AFF2、關(guān)節(jié)滑液circ-AFF2、RF均為RA的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05），見(jiàn)表5。

3??討論

RA的主要臨床表現(xiàn)有關(guān)節(jié)僵硬、局部疼痛、受累關(guān)節(jié)周?chē)M織腫脹等，其發(fā)病較緩慢，是一種外周關(guān)節(jié)的非特異性炎癥綜合征[8-9]。進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，人們對(duì)RA的病理生理機(jī)制及其治療的理解顯著提高，可早期診斷并強(qiáng)化治療，通過(guò)定期測(cè)量疾病活動(dòng)度進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)[10-11]。

目前用于評(píng)估RA疾病活動(dòng)度的方法主要包括DAS28、簡(jiǎn)化疾病活動(dòng)指數(shù)、臨床疾病活動(dòng)指數(shù)、患者活動(dòng)量表（patient?activity?scale，PAS）等，但這些評(píng)估方法均基于醫(yī)生對(duì)疾病的主觀或經(jīng)驗(yàn)判斷[12-13]。因此醫(yī)生在評(píng)估疾病活動(dòng)度時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)顯著差異和異質(zhì)性，可能會(huì)影響治療計(jì)劃的制定、臨床期望及病情緩解。血液與關(guān)節(jié)滑液中相關(guān)生物指標(biāo)的變化及其與RA的關(guān)系研究是目前臨床研究熱點(diǎn)，尤其是關(guān)節(jié)滑液中的指標(biāo)情況更有利于反映局部病灶的變化[14]。本研究檢測(cè)RA患者外周血與關(guān)節(jié)滑液中的circ-AFF2表達(dá)均上調(diào)，與Qu等[15]研究circ-AFF2在RA滑膜組織中的表達(dá)一致。Zhi等[16]通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)circ-AFF2在RA中表達(dá)失調(diào)可誘導(dǎo)RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。據(jù)此分析circ-AFF2表達(dá)上調(diào)對(duì)RA疾病發(fā)生可能起促進(jìn)作用，且與其誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)有關(guān)。此外，本研究結(jié)果中外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平隨疾病活動(dòng)度增加而升高。研究顯示，RA疾病活動(dòng)是慢性炎癥發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程，臨床通過(guò)抑制circ-AFF2表達(dá)可有效控制炎癥發(fā)生，是治療RA的關(guān)鍵[17]。RF、ESR、CRP、CCP、滑膜厚度等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均是與RA密切相關(guān)的標(biāo)志物，本研究中circ-AFF2與各實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均顯著相關(guān)，進(jìn)一步提示circ-AFF2可能參與RA的炎癥病理過(guò)程，在疾病活動(dòng)度進(jìn)程中發(fā)揮促進(jìn)作用[18]。多因素分析結(jié)果顯示，外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2表達(dá)水平是RA疾病高活動(dòng)度的危險(xiǎn)因素。分析可能原因：RA患者的circ-AFF2表達(dá)失調(diào)與體內(nèi)免疫炎癥失衡情況加重密切相關(guān)，而隨著circ-AFF2釋放入血和在關(guān)節(jié)滑液的表達(dá)水平增多，最終造成關(guān)節(jié)炎癥及損傷的進(jìn)一步加重。

綜上，RA患者外周血與關(guān)節(jié)滑液的circ-AFF2均呈高表達(dá)，且其表達(dá)水平隨疾病活動(dòng)度增加而升高，是影響RA疾病活動(dòng)度的重要因子。circ-AFF2有可能作為RA疾病活動(dòng)度新的生物指標(biāo)，其檢測(cè)價(jià)值較高。

[參考文獻(xiàn)][1] RIYADH-MOHSEN?E，?ALI?N?H，?ALDAOSERI?H?A.?Immunologic?parameters?for?disease?activity?in?rheumatoid?arthritis[J].?Arch?Razi?Inst，?2021，?76（4）：?1095–1105.