杭州市育齡女性亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性分析

蔡宇庭，任付佳

杭州市育齡女性亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性分析

蔡宇庭，任付佳

杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院藥劑科，浙江杭州 310008

了解杭州市育齡女性亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）的基因多態(tài)性，為育齡女性個(gè)體化補(bǔ)充葉酸提供依據(jù)。選擇2022年1～6月于杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院進(jìn)行葉酸基因多態(tài)性檢測(cè)的育齡女性為研究對(duì)象，使用熒光原位雜交法檢測(cè)MTHFR C677T位點(diǎn)的基因多態(tài)性，并比較不同地域人群MTHFR C677T基因型分布差異。杭州市育齡女性的MTHFR C677T基因檢測(cè)結(jié)果顯示，野生型（CC）、雜合突變型（CT）及純合突變型（TT）分別占33.45%、50.12%和16.43%，677T等位基因頻率為41.49%。杭州市育齡女性的MTHFR C677T基因型分布情況與中國(guó)其他城市相比有明顯差異（<0.05）。MTHFR C677T基因型分布存在明顯的地區(qū)差異，育齡女性應(yīng)盡早開(kāi)展葉酸基因檢測(cè)，及時(shí)給予個(gè)體化的葉酸補(bǔ)充，以降低出生缺陷的發(fā)生率。

育齡女性；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性；地域性

葉酸是一種水溶性維生素，為人體細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖所必需，尤其是妊娠期女性對(duì)葉酸的需求更大[1]。妊娠早期如果母親體內(nèi)葉酸水平不足，可引起胎兒神經(jīng)管閉合障礙，導(dǎo)致胎兒神經(jīng)管缺陷[2]。葉酸缺乏主要因葉酸攝入不足或代謝能力障礙所致。亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）是葉酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一，MTHFR C677T位點(diǎn)是最常見(jiàn)的基因多態(tài)性位點(diǎn)，其基因突變可引起代謝酶活性降低，造成葉酸代謝障礙，同型半胱氨酸水平升高，導(dǎo)致出生缺陷的發(fā)生[3]。本研究擬探討杭州市育齡女性葉酸代謝酶MTHFR C677T位點(diǎn)的基因多態(tài)性分布，為臨床醫(yī)生指導(dǎo)育齡女性個(gè)體化補(bǔ)充葉酸提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性分析2022年1～6月于杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院進(jìn)行葉酸基因多態(tài)性檢測(cè)的育齡女性，年齡15～49歲，排除合并惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎疾病、嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病和免疫系統(tǒng)疾病者。本研究經(jīng)杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)[倫理審批號(hào)：（2022）醫(yī)倫審K第（10）號(hào)-06]。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 測(cè)序反應(yīng)通用試劑盒（濟(jì)南廣音醫(yī)療科技有限公司），實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀（TL988，西安天隆科技有限公司）。

1.2.2 基因檢測(cè)步驟 所有患者均采集口腔黏膜上皮細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)方法：在采樣拭子中加入1000μl樣本萃取液，振蕩20s，倒入離心管中靜置10min；高速離心機(jī)以3000轉(zhuǎn)/min離心1min，得到白色細(xì)胞沉淀；吸盡上清液后加入100μl細(xì)胞保存液，振蕩混勻；取1.5μl混懸液樣本加入測(cè)序試劑中，離心15s后上機(jī)檢測(cè)，獲得不同樣本的基因分型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)納入研究的樣本進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)。采用SPSSAU軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[（%）]表示，組間比較采用2檢驗(yàn)。<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)

本研究共檢測(cè)840名女性，年齡17～49歲，平均（29.57±2.87）歲。MTHFR C677T基因共檢測(cè)出3種基因型，分別為野生型（CC）、雜合突變型（CT）及純合突變型（TT）。基因型頻率符合Hardy- Weinberg遺傳平衡，表明研究對(duì)象具有區(qū)域群體代表性，見(jiàn)表1。

2.2 杭州市育齡女性MTHFR C677T基因型頻率分布及與中國(guó)其他地區(qū)比較

研究結(jié)果顯示，杭州市育齡女性CC型、CT型、TT型的基因型頻率分別為33.45%、50.12%和16.43%。677C和677T等位基因在該樣本中的分布頻率分別為58.51%和41.49%。杭州市育齡女性的MTHFR C677T基因型分布情況與臺(tái)州市、中國(guó)南方城市（云南、海南、廣東、江蘇、湖北、四川）、北方城市（山東、天津、河南、山西）相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

葉酸在人體內(nèi)不能自主合成，只能通過(guò)外源性攝入補(bǔ)充。妊娠期女性對(duì)葉酸的需求顯著增加，天然食物中含有的葉酸加熱易分解，生物利用率低[6]，僅靠膳食補(bǔ)充葉酸可能難以滿足胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育，故需要額外補(bǔ)充人工合成葉酸。合成的葉酸吸收進(jìn)入人體后，需經(jīng)過(guò)MTHFR代謝為5-甲基四氫葉酸才能發(fā)揮作用。MTHFR C677T突變則導(dǎo)致MTHFR活性降低，其中雜合型酶活性降至野生型的65%，純合型降至30%[7]，致使5-甲基四氫葉酸含量減少，血漿同型半胱氨酸含量升高，從而影響胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育。

2015年的一項(xiàng)關(guān)于MTHFR C677T位點(diǎn)與神經(jīng)管缺陷研究顯示，亞洲人群母親的基因型與子代神經(jīng)管缺陷風(fēng)險(xiǎn)之間存在顯著相關(guān)性[8]。中國(guó)人群的Meta分析得到相似的結(jié)論，母親為T(mén)T基因型的子代患神經(jīng)管缺陷的風(fēng)險(xiǎn)為母親為CC基因型的子代的1.94倍[9]。另外，MTHFR C677T位點(diǎn)的基因多態(tài)性還可能與子代的先天性心臟病、唇腭裂等疾病有關(guān)[10]。因此，檢測(cè)MTHFR C677T基因型對(duì)預(yù)防新生兒出生缺陷很有必要。

表1 MTHFR C677T基因的Hardy-Weinberg遺傳平衡情況[n（%）]

表2 不同地區(qū)育齡女性MTHFR C677T位點(diǎn)基因型分布比較[n（%）]

中國(guó)人群的MTHFR C677T基因的多態(tài)性在不同地區(qū)存在明顯差異。南方人群純合突變基因型（TT）頻率明顯低于北方，且南北方飲食差異明顯，導(dǎo)致北方人群體內(nèi)葉酸水平較低[11]。這也可能是我國(guó)神經(jīng)管缺陷發(fā)生率北方高于南方的原因之一。本研究納入的樣本數(shù)據(jù)有限，且未對(duì)民族和籍貫進(jìn)行區(qū)分，研究結(jié)果可能存在一定的局限性。因此，需要更多樣本、更多層面的進(jìn)一步研究。

根據(jù)《中國(guó)出生缺陷防治報(bào)告（2012）》[12]，我國(guó)自2009年開(kāi)始在全國(guó)農(nóng)村地區(qū)實(shí)施增補(bǔ)葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷項(xiàng)目，神經(jīng)管缺陷發(fā)生率明顯下降，農(nóng)村下降幅度達(dá)72.7%。研究顯示，服用葉酸0.4mg/d，北方地區(qū)胎兒神經(jīng)管缺陷預(yù)防率可達(dá)85%，南方地區(qū)為41%[13]。雖然0.4mg/d葉酸補(bǔ)充即能明顯降低神經(jīng)管缺陷的發(fā)生，但我國(guó)人口基數(shù)大，每年仍有1.8萬(wàn)例的神經(jīng)管缺陷新增患兒，可能的原因是葉酸攝入量不足、葉酸服用依從性低、葉酸代謝能力障礙等。張函舒等[14]研究顯示，妊娠早期女性不合理補(bǔ)充葉酸的總比例高達(dá)67.9%，主要表現(xiàn)為葉酸補(bǔ)充劑量不足，該現(xiàn)象在MTHFR C677T基因突變的妊娠女性中尤為突出。而Yang等[15]發(fā)現(xiàn)，根據(jù)葉酸代謝酶基因型個(gè)體化增補(bǔ)葉酸可降低不良妊娠結(jié)局和新生兒缺陷的發(fā)生率。另外Li等[16]研究顯示，個(gè)體化補(bǔ)充葉酸可減少妊娠并發(fā)癥的發(fā)生，尤其是妊娠期糖尿病和妊娠期高血壓。因此，個(gè)體化補(bǔ)充葉酸對(duì)預(yù)防出生缺陷、提高出生人口素質(zhì)具有重要意義。

綜上所述，MTHFR C677T的基因型存在明顯的地區(qū)差異，個(gè)體化的補(bǔ)充葉酸有利于降低新生兒出生缺陷的發(fā)生率。育齡女性盡早開(kāi)展葉酸基因檢測(cè)，既可提高育齡女性補(bǔ)充葉酸的依從性，也可用于指導(dǎo)葉酸的個(gè)體化用藥。

[1] 中國(guó)醫(yī)藥教育協(xié)會(huì)臨床合理用藥專業(yè)委員會(huì), 中國(guó)醫(yī)療保健國(guó)際交流促進(jìn)會(huì)高血壓分會(huì), 中國(guó)婦幼保健協(xié)會(huì)圍產(chǎn)營(yíng)養(yǎng)與代謝專業(yè)委員會(huì), 等. 中國(guó)臨床合理補(bǔ)充葉酸多學(xué)科專家共識(shí)[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2021, 40(1): 1–19.

[2] 圍受孕期增補(bǔ)葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷指南工作組. 圍受孕期增補(bǔ)葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷指南(2017)[J]. 中國(guó)生育健康雜志, 2017, 28(5): 401–410.

[3] 馬新利, 張婷婷, 王玥, 等. 河南省9826例育齡女性葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性分布研究[J]. 河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2021, 32(3): 170–173, 210.

[4] 楊英梅, 池宏波, 陳文舉. 臺(tái)州市育齡女性亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性分析[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2021, 31(4): 508–510.

[5] YANG B, LIU Y, LI Y, et al. Geographical distribution of MTHFR C677T, A1298C and MTRR A66G gene polymorphisms in China: Findings from 15357 adults of Han nationality[J]. PLoS One, 2013, 8(3): e57917.

[6] 中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)膳食指南修訂專家委員會(huì)婦幼人群膳食指南. 孕期婦女膳食指南[J]. 中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 19(9): 641–648.

[7] 陳新, 張翠軍. 江蘇地區(qū)漢族育齡女性葉酸代謝酶基因多態(tài)性分析[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2017, 32(7): 1527–1530.

[8] YANG Y, CHEN J, WANG B, et al. Association between MTHFR C677T polymorphism and neural tube defect risks: A comprehensive evaluation in three groups of NTD patients, mothers, and fathers[J]. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol, 2015, 103(6): 488–500.

[9] 張春紅, 霍軍生, 孫靜, 等. 中國(guó)人群母親5, 10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因C677T多態(tài)性與子代神經(jīng)管畸形易感性關(guān)系的Meta分析[J]. 衛(wèi)生研究, 2018, 47(2): 312–317.

[10] 方綺雯, 劉振球, 王俊, 等. 孕母MTHFR基因多態(tài)性與子代出生缺陷關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2017, 18(2): 140–143.

[11] 郝玲, 田熠華, 譚明, 等. 我國(guó)部分地區(qū)35～64歲人群血漿葉酸水平與年齡性別差異比較[J]. 營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2002, 24(4): 352–356.

[12] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 中國(guó)出生缺陷防治報(bào)告(2012)[OL]. (2012-09-12)[2023-01-26]. http://www.gov. cn/gzdt/att/att/site1/20120912/1c6f6506c7f811bacf9301.pdf.

[13] 李竹, BERRY R J, 李松, 等. 中國(guó)婦女妊娠前后單純服用葉酸對(duì)神經(jīng)管畸形的預(yù)防效果[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2000, 80 (7): 493–498.

[14] 張函舒, 宋滄桑, 張陽(yáng), 等. 妊娠早期婦女葉酸補(bǔ)充的合理性分析[J]. 中國(guó)藥物評(píng)價(jià), 2018, 35(5): 376–379.

[15] YANG J, LUO G, CHEN X. Individualized supplement of folic acid based on the gene polymorphisms of MTHER/MTRR reduced the incidence of adverse pregnancy outcomes and newborn defects[J]. Niger J Clin Pract, 2021, 24(8): 1150–1158.

[16] LI X, JIANG J, XU M, et al. Individualized supplementation of folic acid according to polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR), methionine synthase reductase (MTRR) reduced pregnant complications[J]. Gynecol Obstet Invest, 2015, 79(2): 107–112.

Polymorphism analysis of methylene tetrahydrofolate reductase gene in women of childbearing age in Hangzhou

Department of Pharmacy, Hangzhou Women’s Hospital, Hangzhou 310008, Zhejiang, China

To investigate the polymorphism of methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in women of childbearing age in Hangzhou, and to provide evidence for individualized folic acid supplementation in women of childbearing age.Women of childbearing age who underwent folic acid gene polymorphism detection in Hangzhou Women’s Hospital from January to June 2022 were enrolled in this study. Fluorescence in situ hybridization was used to detect the polymorphism of MTHFR C677T gene, and the distribution of MTHFR C677T genotype was compared among different regions.The MTHFR C677T gene detection results of women of childbearing age in Hangzhou showed that wild-type (CC), heterozygous mutant (CT) and homozygous mutant (TT) accounted for 33.45%, 50.12% and 16.43%, respectively. The frequency of T allele was 41.49%. The distribution of MTHFR C677T in women of childbearing age in Hangzhou was significantly different from that in other cities in China (<0.05).There are significant regional differences in the genotype distribution of MTHFR C677T. For women of childbearing age, early detection of folate gene and individualized folate supplementation are helpful to reduce the incidence of birth defects.

Women of childbearing age; Methylene tetrahydrofolate reductase; Genetic polymorphism; Geographically specific

R173

A

10.3969/j.issn.1673-9701.2023.07.007

杭州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（20211231Y069）

任付佳，電子信箱：HF190711@163.com

（2022–09–07）

（2023–01–27）