妊娠期糖尿病患者胎盤組織Nrf2/HO-1通路表達(dá)及其意義

王麗

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是臨床常見的妊娠期特有疾病，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，對母體健康及胎兒生長發(fā)育都會(huì)產(chǎn)生不同程度的損傷[1-2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，GDM 的發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，而核因子E2 相關(guān)因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶-1（HO-1）信號(hào)通路又參與氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)過程[3-4]。Nrf2 是一種核轉(zhuǎn)錄因子，可通過參與調(diào)控HO-1 表達(dá)來發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用，從而改善氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的胰島素抵抗，延緩GDM 的發(fā)生進(jìn)展[5-6]。但目前，臨床尚無關(guān)于Nrf2/HO-1 通路在調(diào)控GDM 發(fā)病機(jī)制中的研究報(bào)道，因此，本研究選取280 例GDM 患者為研究對象，旨在探討Nrf2/HO-1 通路相關(guān)因子在GDM 患者胎盤組織中的表達(dá)及其意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采用前瞻性研究，選取2019 年1 月-2021 年12 月濰坊市人民醫(yī)院收治的280 例GDM 孕婦為GDM 組，另選取同期正常100 例足月妊娠孕婦作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）GDM 組符合文獻(xiàn)[7]《妊娠合并糖尿病診治指南（2014）》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，孕前無糖尿病史，妊娠期首次確診；（2）胎兒生長發(fā)育正常，無畸形。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并多囊卵巢綜合征、甲狀腺等內(nèi)分泌疾??；（2）臨床資料不完整；（3）合并嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷；（4）合并自身免疫性疾病。兩組妊娠孕婦均知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集兩組孕婦年齡、產(chǎn)次、體重指數(shù)（BMI）、空腹血糖、餐后1 h 血糖、餐后2 h血糖、空腹胰島素、分娩時(shí)間、新生兒體質(zhì)量，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、胰島素敏感指數(shù)（HOMA-IS），其中HOMA-IR=（空腹血糖×空腹胰島素）/22.5，HOMA-IS=1/[（空腹血糖×空腹胰島素）/22.5]；若HOMA-IR 值＞2.69，則提示存在胰島素抵抗現(xiàn)象。

1.2.2 胎盤組織標(biāo)本采集與制備 兩組胎兒娩出后立即取胎盤母體面中央?yún)^(qū)域1 cm×1 cm×0.5 cm 大小的密絨毛膜層組織2 塊，生理鹽水沖洗，經(jīng)10%中性甲醛固定，脫水、石蠟包埋、切片、HE 染色后封片用于免疫組化檢測。

1.2.3 免疫組化SP法 采用免疫組化SP 二步法檢測胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平，一抗為兔抗人Nrf2、HO-1 單克隆抗體（購自英國Abcam 公司），在切片上分別滴加1∶50 濃度的Nrf2、HO-1單克隆抗體100 μL，置于4 ℃冰箱內(nèi)孵育過夜，然后滴加100 μL EnvisionTM+/HRP 二抗，置于室溫下孵育0.5 h，用PBS 緩沖液沖洗3 遍，吸去切片多余水分，基聯(lián)苯胺（DAB）顯色5 min，于顯微鏡下觀察數(shù)值。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較兩組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1、HOMA-IS、HOMA-IR 表達(dá)水平；（2）比較不同病理特征孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平；（3）分析胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平與HOMA-IR、HOMA-IS 的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，采用t 檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 GDM 組年齡23～34 歲，平均（28.53±2.26）歲；孕周33～41 周，平均（38.08±3.17）周；初產(chǎn)婦156 例，經(jīng)產(chǎn)婦124 例。對照組年齡21～33 歲，平均（28.03±2.17）歲；孕周35～41 周，平均（38.36±3.25）周；初產(chǎn)婦63例，經(jīng)產(chǎn)婦37 例。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 兩組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1、HOMAIR、HOMA-IS 表達(dá)水平比較 GDM 組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 及HOMA-IR 水平均高于對照組，HOMA-IS 水平低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平比較（）

表1 兩組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平比較（）

2.3 GDM 組不同病理特征孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平比較 不同空腹血糖、餐后1 h 血糖、餐后2 h 血糖、空腹胰島素水平及新生兒體質(zhì)量的GDM 孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同年齡、產(chǎn)次、BMI及分娩時(shí)間的GDM 孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 GDM組不同病理特征孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平比較（）

表2 GDM組不同病理特征孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平比較（）

2.4 GDM 患者胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)與HOMA-IR、HOMA-IS 的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 分析顯示，Nrf2、HO-1 表達(dá)與HOMA-IR 水平均呈正相關(guān)，與HOMA-IS 均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 Pearson分析Nrf2、HO-1表達(dá)與胰島素抵抗的相關(guān)性

3 討論

GDM 是嚴(yán)重的妊娠疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，多數(shù)學(xué)者考慮主要與遺傳因素、妊娠分娩史、胰島素抵抗等多種因素密切相關(guān)[8-10]。目前，GDM 發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢，若不能及時(shí)加以干預(yù)，易對母體健康及胎兒生長發(fā)育產(chǎn)生不同程度的影響[11]。因此，積極探討GDM 的發(fā)病機(jī)制，對改善母嬰結(jié)局具有重要作用。

近年來，隨著臨床對GDM 病理、生理領(lǐng)域研究的不斷深入，部分研究發(fā)現(xiàn)GDM 的發(fā)生發(fā)展過程與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，而Nrf2/HO-1 信號(hào)通路又參與氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)過程[12-13]。Nrf2 是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可通過激活多種細(xì)胞因子的基因啟動(dòng)子，發(fā)揮早期免疫應(yīng)答效應(yīng)。在正常生理?xiàng)l件下，Nrf2依賴Kelch 樣ECH 關(guān)聯(lián)蛋白1（Keap1）的泛素化生成表達(dá)，而在氧化應(yīng)激條件下，活性氧自由基可導(dǎo)致Nrf2 磷酸化并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，通過特異性結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件（ARE），誘導(dǎo)下游HO-1 表達(dá)[14-15]。HO-1 是一種重要的抗氧化酶，其生物活性直接影響抗氧化損傷能力變化，且經(jīng)臨床證實(shí)具有良好的抗炎、抗凋亡、促進(jìn)血管生成等作用[16]。多項(xiàng)臨床研究表明，通過激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路，可改善氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的胰島素抵抗，抑制胰島素介導(dǎo)的糖異生受損，糾正高糖導(dǎo)致的機(jī)體代謝功能紊亂，進(jìn)一步延緩糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生進(jìn)展[17-18]。

本研究結(jié)果顯示，GDM 組孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平均高于對照組（P＜0.05）。不同空腹血糖、餐后1 h 血糖、餐后2 h 血糖、空腹胰島素水平及新生兒體質(zhì)量的GDM 孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示，與正常足月妊娠孕婦相比，GDM孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平升高，且不同病理特征GDM 孕婦胎盤組織中Nrf2、HO-1 呈差異性表達(dá)。考慮原因可能是，長期高血糖狀態(tài)可引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷，從而抑制胎盤血管生成，導(dǎo)致胎盤功能障礙而缺血、缺氧，使細(xì)胞中活性氧水平增加，進(jìn)而激活Nrf2/HO-1 通路，故胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平升高[19-20]。另外，本研究經(jīng)Pearson 分析顯示，Nrf2、HO-1 表達(dá)與HOMAIR 水平均呈正相關(guān)，與HOMA-IS 均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。提示，胎盤組織中Nrf2、HO-1 表達(dá)水平升高可破壞胰島素傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致胰島素抵抗，進(jìn)而誘發(fā)GDM。

綜上所述，GDM 患者胎盤組織中Nrf2、HO-1表達(dá)水平升高，且均與胰島素抵抗相關(guān)，Nrf2/HO-1 通路可能參與GDM 發(fā)病過程。