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    溫針灸預(yù)處理對(duì)不同時(shí)間間隔缺血再灌注大鼠心肌的保護(hù)作用*

    2015-07-11 02:58:40劉衛(wèi)星虞躍躍
    針灸臨床雜志 2015年3期
    關(guān)鍵詞:關(guān)穴造模間隔

    劉衛(wèi)星,虞躍躍

    (1.唐山市中醫(yī)院,河北 唐山063000;2.河北聯(lián)合大學(xué),河北 唐山063000)

    近年來(lái),冠心病等缺血性心臟病逐年增加[1]。而再灌注治療是其有效治療方法之一,而缺血再灌注損傷是其嚴(yán)重的并發(fā)癥,是影響治療效果的一個(gè)重要因素。目前,針刺抗心肌缺血已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床與基礎(chǔ)研究[2-3],證實(shí)了針灸能通過(guò)多種途徑改善冠心病心肌缺血臨床癥狀和體征。本實(shí)驗(yàn)研究旨在觀察溫針灸大鼠內(nèi)關(guān)穴預(yù)處理后,依據(jù)不同時(shí)間間隔對(duì)大鼠進(jìn)行造模,觀察對(duì)大鼠血清NO、NOS 含量的變化及心肌梗死面積的影響,以觀察溫針灸干預(yù)缺血再灌注時(shí)對(duì)心肌保護(hù)的作用、機(jī)制及不同時(shí)間間隔溫針灸刺激內(nèi)關(guān)對(duì)心肌缺血的影響是否具有明顯的時(shí)間依賴性,為溫針灸治療心肌缺血臨床和理論研究提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    選取清潔級(jí)健康Wistar 大鼠60 只,雌雄各半,體重(200 ±20)g,由河北聯(lián)合大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)為SCXKll-00-0010。隨機(jī)數(shù)字表法分為4 組,即:模型組、實(shí)驗(yàn)A 組、實(shí)驗(yàn)B 組、實(shí)驗(yàn)C組,分組每組6 只。常規(guī)飼料喂養(yǎng)7 天,室溫18℃~22℃,自由攝食、飲水。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 心肌缺血再灌注動(dòng)物模型制備 參照文獻(xiàn)[4]造模方法,大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉后,仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上,四肢接上心電圖電極,記錄心電圖,除毛,氣管切開行氣管插管,連接小動(dòng)物呼吸機(jī),控制呼吸頻率70 ~85 次/min,潮氣量2 ~4.5 ml/100 g。沿胸骨左緣第4 肋間打開胸腔,撕開心包膜暴露心臟,在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐間找到左冠狀動(dòng)脈,用0 號(hào)縫合線在其下穿過(guò),打一活結(jié),缺血30 min后拉開活結(jié)再灌注60 min。缺血的標(biāo)志為:左心室前壁發(fā)紺,心電圖ST 段抬高。再灌注的標(biāo)志為:發(fā)紺區(qū)充血發(fā)紅,抬高的ST 段恢復(fù)正常。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 模型組:行心肌缺血再灌注造模;實(shí)驗(yàn)A 組:先將大鼠仰臥位固定在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,取大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴,內(nèi)關(guān)穴位于大鼠前肢內(nèi)側(cè),離腕關(guān)節(jié)約3 mm的尺橈骨骨縫間,針刺手法采用0. 35 mm ×25 mm針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)華佗牌),應(yīng)用單手進(jìn)針?lè)?,直刺入穴? ~3 mm 后,于針柄處加艾粒灸(每壯含艾絨約0.2 g,蘇州東方艾絨廠),燃燒時(shí)間約為20 min,操作完畢后0.5 h,行心肌缺血再灌注造模;實(shí)驗(yàn)B 組:操作方法同上,操作完畢后1.5 h,行心肌缺血再灌注造模;實(shí)驗(yàn)C 組:操作方法同上,操作完畢后3 h,行心肌缺血再灌注造模。

    1.3 檢測(cè)指標(biāo)

    1.3.1 心肌梗死面積[5]造模成功后,于左心室注入3%伊文思藍(lán)1 ml 后取下心臟,剪下左室,確定未缺血與缺血心肌。置-20℃冰箱中冷卻30 min 后,每隔2 mm,從心尖起將心肌平行切成等厚5 片。置入1%TTC 磷酸緩沖液(PH7.4),37℃水浴10 min。梗死心肌細(xì)胞中因細(xì)胞膜損傷脫氫酶釋放丟失,因而不被染色,正常心肌含有脫氫酶可被染為紅色。梗死面積百分率(%)=左心室組織切片梗死區(qū)面積/左心室組織切片總面積×100%。

    1.3.2 血清NO、NOS 含量的測(cè)定[6]再灌注結(jié)束時(shí)快速打開腹腔,暴露腹腔靜脈,取靜脈血5 ml,靜置后4℃5000 r/min 離心15 min,取血清,采用分光光度法測(cè)定NO、NOS 含量,操作方法按試劑盒(南京建成生物功能研究所,產(chǎn)品批號(hào):20130215,20130222)說(shuō)明書進(jìn)行。

    2 結(jié)果

    2.1 對(duì)心肌梗死面積的影響

    實(shí)驗(yàn)A、B、C 組分別與模型組比較,動(dòng)物心肌梗死均明顯減輕、面積縮小,差異性具有統(tǒng)計(jì)意義(P <0.01 或P <0.05),實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于模型組;實(shí)驗(yàn)A 組分別與實(shí)驗(yàn)組B、C 組比較,心肌梗死均明顯減輕、面積縮小,差異性具有統(tǒng)計(jì)意義(P <0.01 或P <0.05),實(shí)驗(yàn)A 組優(yōu)于實(shí)驗(yàn)組B、C 組;實(shí)驗(yàn)組B 與實(shí)驗(yàn)C 組比較,心肌梗死均明顯減輕、面積縮小,差異性具有統(tǒng)計(jì)意義(P <0.05),實(shí)驗(yàn)B 組優(yōu)于實(shí)驗(yàn)C 組。見表1。

    表1 4 組對(duì)心肌缺血再灌注心肌梗死面積比較(±s)

    表1 4 組對(duì)心肌缺血再灌注心肌梗死面積比較(±s)

    注:與模型組比較,△P <0.01,▲P <0.05;與實(shí)驗(yàn)A 組比較,* P <0.01,○P <0.05;與實(shí)驗(yàn)B 組比較,☆P <0.05。

    組別 n 梗死面積(mm2)梗死率(%)占左心室 占心臟模型組6 448.6 ±61.2 7.6 ±1.2 16.5 ±2.4實(shí)驗(yàn)A 組 6 169.4 ±32.8△ 2.8 ±0.9△ 5.6 ±1.8△實(shí)驗(yàn)B 組 6 245.4 ±56.1△* 4.9 ±2.4△○ 9.8 ±4.8△○實(shí)驗(yàn)C 組 6 279.9 ±85.6▲*☆ 6.9 ±2.1* 13.8 ±4.1*

    2.2 對(duì)血清NO、NOS 含量的影響

    心肌缺血再灌注模型組血清中NO 含量明顯減少、NOS 活力下降;穴位溫針灸預(yù)處理不同時(shí)間間隔行心肌缺血再灌注造模后,實(shí)驗(yàn)A、B 組NO 含量、NOS活力較心肌缺血再灌注模型組明顯增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)C 組與模型組比較NO、NOS 含量變化不明顯。見表2。

    表2 4 組對(duì)心肌缺血再灌注血清NO、NOS 含量比較

    3 討論

    組織缺血再灌注損傷已在多種器官中得到的證明[7]。本研究從中醫(yī)整體觀念出發(fā),注重未病先防,既病防變,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中預(yù)先對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行溫針灸處理20 min 后,隨后觀察其抗損傷作用。

    溫針灸療法,是指在毫針的留針過(guò)程中,同時(shí)在針柄予艾粒加熱,既能起到針刺促使氣血調(diào)和、通經(jīng)活絡(luò)的作用,又能起到艾灸調(diào)和氣血、舒筋通絡(luò)、解瘀止痛的雙重作用。本實(shí)驗(yàn)以雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴為溫針灸預(yù)處理用穴,溫針灸20 min 后起針,起針后再分別間隔0. 5、1.5、3 h 進(jìn)行心肌缺血再灌注造模,結(jié)果顯示各組NO、NOS 活性差異顯著,間隔0.5 h 可使心肌缺血再灌注后NO 活性顯著增強(qiáng),間隔1.5 h 作用減弱,而間隔3 h 作用不明顯。這一結(jié)果表明:內(nèi)關(guān)穴穴位溫針刺預(yù)處理具有明顯的抗心肌缺血再灌注損傷作用,且該作用具有明顯的時(shí)間依賴性,與陳氏等的研究結(jié)果一致[8]。

    本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),溫針灸大鼠內(nèi)關(guān)穴后間隔不同的時(shí)間間隔進(jìn)行心肌造模與模型組比較均能減小心肌梗死面積,但尤以0.5 h 實(shí)驗(yàn)A 組(P <0.01)、1.5 h 實(shí)驗(yàn)B組(P <0.01)明顯,其作用機(jī)制可能與溫針灸可以提高NOS 活性、增加NO 生成、增強(qiáng)過(guò)氧化反應(yīng)、減輕細(xì)胞過(guò)氧化損傷有關(guān),且降低的程度呈時(shí)間依賴性[9]。

    綜上所述,再灌注對(duì)心肌細(xì)胞有損傷作用,并且通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明這種作用具有明顯的時(shí)間依賴性,也就是說(shuō),在什么時(shí)候介入溫針灸方法將對(duì)抵御隨之而來(lái)的疾病的發(fā)生或減弱疾病對(duì)機(jī)體的損傷程度至關(guān)重要[10]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明,溫針灸可以減輕缺血再灌注造成的多種損傷,既可以明顯改善NO、NOS 的活性,減緩組織壞死程度,這與抗自由基損傷有直接關(guān)系。

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