古鉤藤的化學(xué)成分研究

張 璐，梁 艷，韋建華，唐云麗，梁臣艷

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530200)

古鉤藤[1]為蘿藦科植物古鉤藤（Cryptolepis buchnaiiRoem.et Schult.），為廣西壯族民間的常用藥材，也是廣西特色中草藥，在廣西有著豐富的資源和藥用基礎(chǔ)，有良好的開發(fā)和利用價值?，F(xiàn)代藥理研究[2]表明，古鉤藤具有護肝、調(diào)節(jié)血脂、抗炎鎮(zhèn)痛、降血糖等功效。本次對壯藥古鉤藤地上部分的化學(xué)成分進行了研究，從古鉤藤藥材75%乙醇提取物的不同極性部位分離得到了18個單體化合物，分別鑒定為咖啡酸乙酯（1）、豆甾醇（2）、germanicol docosanoate（3）、β-谷甾醇（4）、羽扇豆醇（5）、正十五烷酸（6）、β-胡蘿卜苷（7）、3-乙酰氧基齊墩果酸（8）、β-乳香酸（9）、熊果酸（10）、4-羥基香豆素（11）(11)、水楊酸（12）、隱綠原酸（13）、綠原酸（14）、新綠原酸（15）、咖啡酸（16）、異綠原酸 A（17）、異綠原酸 C（18）。

1 儀器與材料

AutoSpec Permier P776 質(zhì)譜儀（美國Waters公司），AVANCE Ⅲ500MHz核磁共振儀（德國Brucker公司），LC-20AR半制備液相色譜儀（日本島津公司）；柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；CHP20/P120MCI GEL聚苯乙烯型反相樹脂 （日本三菱化學(xué)公司）；提取分離用乙醇為食用級酒精，其余試劑均為分析純；咖啡酸乙酯對照品（成都麥德生科技有限公司，批號：RP180624，純度≥98%）。

古鉤藤于2019年采自廣西南寧，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯瑤藥教學(xué)實驗實訓(xùn)中心陸海琳高級實驗師鑒定為蘿藦科白葉藤屬植物古鉤藤的地上部分。標(biāo)本存在于廣西高校中藥提取純化與質(zhì)量分析重點實驗室。

2 提取與分離

1）取干燥古鉤藤粗粉8 kg，用10倍量75%乙醇常溫浸漬提取，合并提取溶液，回收溶劑至無醇味，得到總浸膏。依次用石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮，分別得到不同極性部位浸膏。2）取古鉤藤石油醚部位浸膏50 g，采用硅膠（100～200目）柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯（50:1～1:1）梯度洗脫，收集洗脫液。再采用硅膠柱色譜及重結(jié)晶等方法進行分離和純化，分別得到化合物1（206.8 mg）、化合物2（25.5 mg）、化合物3（5 mg）、化合物4（36.8 mg）。3）取古鉤藤乙酸乙酯部位浸膏50 g，采用硅膠（100～200目）柱色譜分離，三氯甲烷-甲醇（100:1～1:1）梯度洗脫，收集洗脫液。再采用硅膠柱色譜及重結(jié)晶等方法進行分離和純化，分別得到化合物5（5.2 mg）、化合物6（10.4 mg）、化合物7（22.8 mg）、化合物8（5.6 mg）、化合物9（8.2 mg）、化合物10（11.6 mg）、化合物11（5.2 mg）、化合物12（15.6 mg）。4）取古鉤藤正丁醇部位浸膏50 g，經(jīng)MCI 柱色譜分離，依次水、不同濃度甲醇梯度洗脫，經(jīng)制備HPLC、重結(jié)晶等方法反復(fù)分離純化，得到化合物13（312.6 mg）、化合物14（17.6 mg）、化合物15（38.5 mg）、化合物16（225.6 mg）、化合物17（12.5 mg）、化合物18（6.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶（氯仿），以咖啡酸乙酯對照品為對照，在薄層色譜經(jīng)3種不同的展開系統(tǒng)展開，呈現(xiàn)單斑，Rf值一致。HPLC色譜圖與對照品保留時間一致，加大峰比較法呈現(xiàn)單峰。故鑒定該化合物為咖啡酸乙酯。

化合物2：無色針狀晶體（氯仿），EI-MSm/z：413[M+H]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3）δ：5.36（1H, d，J=3.6Hz,H-6），5.16（1H, dd,J=15.2, 8.88 Hz, H-22），4.99（1H, dd,J=15.2, 8.88 Hz, H-23），3.54（1H, m, H-3）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：37.3（C-1），31.7（C-2），71.8（C-3），42.3（C-4），140.8（C-5），121.7（C-6），28.9（C-7），31.9（C-8），50.2（C-9），37.0（C-10），21.1（C-11），39.7（C-12），42.3（C-13），56.9（C-14），24.4（C-15），28.3（C-16），56.0（C-17），12.1（C-18），19.4（C-19），40.5（C-20），21.2（C-21），138.3（C-22），129.3（C-23），51.3（C-24），31.9（C-25），21.1（C-26），19.0（C-27），25.4（C-28），12.2（C-29），以上數(shù)據(jù)與文獻[3]報道對照基本一致，故鑒定該化合物為豆甾醇。

化合物3：無色針狀晶體（氯仿），EI-MSm/z：749[M+1]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ：4.86 (1H,s, H-19)，4.49 (1H, dd,J= 10.7, 5.8 Hz, H-3)，2.29 (2H,t,J= 7.6 Hz, H-2’)，1.62（2H, m, H-3’)，1.20-1.35（36H, m, H-4’-H-21’），1.08 (3H, s, H-26), 1.02 （3H, s,H-28），0.936，0.943（each 3H, s, H-29, H-30），0.90 （3H,s, H-25），0.88（3H, t,J= 6.9 Hz, H-22’），0.84（6H,s, H-23, H-24），0.73（3H, s, H-27）；13C-NMR （125 MHz,CDCl3）δ：173.7（C-1'），142.7（C-18），129.8 （C-19），80.6（C-3），55.6（C-5），51.1（C-9），43.3 （C-14），40.8（C-8），38.6（C-1），38.4（C-13），37.9 （C-4），37.7（C-16），37.4（C-22），37.1（C-10），34.9（C-7），34.5（C-2’），34.3（C-17），33.3（C-21），32.4（C-20），31.9（C-20'），31.3（C-29），29.3-29.7（C-4'-C19'），29.2（C-30），27.9（C-23），27.5（C-15），26.2（C-12），25.3（C-28），25.2（C-3'），23.7（C-2），22.7（C-21'），21.1（C-11），18.1（C-6)，16.7（C-26），16.6（C-24），16.1（C-25），14.6（C-27），14.1（q, C-22'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道對照基本一致，確定化合物3為germanicol docosanoate。

化合物4：白色針狀結(jié)晶（甲醇），1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.32（1H, m,H-6），3.60（1H,m,H-3），1.12（3H, s,H-19），0.96（3H, m,H-21），0.91（3H, m,H-29），0.86（3H, s,H-26），0.84（3H,m,H-27），0.70（3H, s,H-18）；13C-NMR(125MHz,CDCl3）δ：37.4（C-1），31.8（C-2），72.0（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.9（C-6），32.1（C-7），32.1（C-8），50.4（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.5（C-13），56.9（C-14），24.4（C-15），28.4（C-16），56.2（C-17），12.1（C-18），20.0（C-19），36.3（C-20），18.9（C-21），34.1（C-22），26.2（C-23），46.0（C-24），29.3（C-25），19.5（C-26），19.2（C-27），23.2（C-28），12.0（C-29）.以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道對照基本一致，確定化合物4為β-谷甾醇。

化合物5：白色針狀結(jié)晶（氯仿），EI-MSm/z：426[M]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：4.68（3H,s,H-29），4.56（3H, s,H-29），1.67（3H, s, H-30），1.02（3H, s, H-26），0.97（3H, s, H-23），0.83（3H,s, H-25），0.79（3H, s, H-28），0.76（3H,s,H-24 ）；13C-NMR(125MHz, CDCl3) δ：38.9（C-1），28.0（C-2），79.0（C-3)，40.0（C-4），55.3（C-5），18.3（C-6），34.3（C-7），40.8（C-8)，50.4（C-9），37.2（C-10），19.3（C-11），25.2（C-12），38.1（C-13），43.0（C-14），27.5（C-15），25.2（C-16），42.8（C-17），48.3（C-18），48.0（C-19），151.0（C-20），29.9（C-21），40.0（C-22），28.0（C-23），15.4（C-24），16.1（C-25），16.1（C-26），14.6（C-27），18.0（C-28），109.3（C-29），20.9（C-30），以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道對照基本一致，確定化合物5為羽扇豆醇。

化合物6：白色蠟狀固體（二氯甲烷），EIMSm/z：412[M-H]+，227[M-CH3]+。1H-NMR（500MHz,CDCl3） δ：0.87（3H, t, 6.85Hz）1.25～δ1.64（22H, m）2.34（2H, t, 7.5Hz）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：13C-NMR 譜（500MHZ, CDCl3） δ：33.86（C-2），31.93（C-3），29.70（C-4），29.68（C-5），29.67（C-6），29.60（C-7），29.44（C-8），29.37（C-9），29.25（C-10），29.07（C-11），24.70（C-12），22.70（C-13），14.13（C-14）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道對照基本一致，確定化合物6為正十五烷酸（pentadecanoic acid）。

化合物7：白色粉末（吡啶）。ESI-MSm/z：577[M]+；1H-NMR（500MHz，C5D5N）δ：5.34 (1H, s,H-6），4.30（1H, m, H-3），0.97（3H, d, H-19），0.91（3H, m, H-21），0.88（3H, m, H-29），0.86（3H, m,H-27），0.84 （3H, m, H-26），0.65（3H, s, H-18）；13C-NMR（125MHz，C5D5N）δ：37.0（C-1），34.3（C-2），78.1（C-3），39.4（C-4），140.9（C-5），122.0（C-6），29.5（C-7），32.1（C-8），50.4（C-9），36.4（C-10），20.0（C-11），28.6（C-12），41.1（C-13），56.3（C-14），24.6（C-15），37.5（C-16），56.3（C-17），12.2（C-18），19.3（C-19），36.4（C-20），19.1（C-21），32.1（C-22），26.4（C-23），46.1（C-24），23.4（C-25），12.0（C-26），28.6（C-27），19.5（C-28），19.0（C-29），102.6（C-1'），75.4（C-2'），78.6（C-3'），71.8（C-4'），78.7（C-5'），62.9（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道數(shù)據(jù)[8]基本一致，故鑒定化合物7為β-胡蘿卜苷。

化合物8：白色粉末結(jié)晶（甲醇），EI-MSm/z：499［M+1]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.28（1H,t,J=4.7 Hz,H-12)，4.51(1H, t,J=10Hz,H-3)，2.83（1H,dd,J=7.6, 3.6 Hz,H-18），2.05（3H, s,H-OMe），1.13（3H,s,H-27），0.95（3H, s,H-25），0.94（3H, s,H-30），0.93（3H,s,H-29），0.87（3H, s,H-24），0.85（3H, s,H-23），0.76（3H,s,H-26）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：39.0（C-1），23.2（C-2）80.9（C-3)，38.0（C-4），55.3（C-5），18.2 （C-6），33.8（C-7），39.0（C-8），47.5（C-9），37.6（C-10），23.6（C-11)，122.7（C-12），154.9（C-13）42.0（C-14），33.0（C-15），23.6（C-16）46.8（C-17），42.0（C-18），45.8（C-19），30.7（C-20），32.4（C-21），27.7（C-22），28.0（C-23），16.7（C-24），15.4（C-25），16.9（C-26），26.2（C-27），183.2（C-28），33.0（C-29），23.5（C-30），171.0（C-COCH3），21.3（C-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道對照基本一致，確定化合物8為3-乙酰氧基齊墩果酸。

化合物9：白色粉末結(jié)晶（甲醇），1H-NMR（500 MHz, MeOD）EI-MSm/z：457[M+H]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.28（1H, t,J=4.7 Hz,H-12），4.51（1H, t,J=10Hz,H-3），2.83（1H, dd,J=7.6, 3.6 Hz,H-18），2.05（3H, s,CH3CO），1.13（3H,s,H-27），0.95（3H, s,H-25），0.94（3H, s,H-30），0.93（3H,s,H-29），0.87（3H, s,H-24），0.85（3H, s,H-23），0.76（3H,s,H-26）；13C-NMR（125MHz, CDCl3） δ：39.0（C-1），27.7（C-2），80.9（C-3），38.0（C-4），55.3（C-5），18.2（C-6），33.8（C-7），39.0（C-8），47.5（C-9），37.6（C-10），23.6（C-11），122.6（C-12），143.6（C-13），42.0（C-14），27.7（C-15），23.4（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道數(shù)據(jù)[10]基本一致，故鑒定化合物9為β-乳香酸。

化合物10：白色粉末結(jié)晶（甲醇），EI-MSm/z：456[M]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3）δ：5.46（1H,t,J= 3.0 Hz，H-12），3.26（1H,dd,J=11.4，4.5 Hz，H-3），1.23（3H，s，H-29），1.22（3H，s，H-27），1.03（3H，s，H-23），1.02（3H，s，H-24），1.01（3H，s，H-30），0.98（3H，s，H-26），0.86（3H，s，H-25)；13C-NMR(125MHz, CDCl3）δ：37.4（C-1），27.1（C-2），76.9（C-3），38.4（C-4），55.0（C-5），17.9（C-6），32.9（C-7），36.8（C-8），40.5（C-9），36.4（C-10），23.5（C-11），124.6（C-12），138.6（C-13），42.0（C-14），27.6（C-15），23.9（C-16），47.3（C-17），52.8（C-18），38.6（C-19），38.6（C-20），30.1（C-21），36.1（C-22），28.0（C-23），16.2（C-24），16.5（C-25），16.8（C-26），23.6（C-27），178.4（C-28），17.3（C-29），22.2（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道對照基本一致，確定化合物10為熊果酸。

化合物11：白色粉末（氯仿），EI-MSm/z：138[M]+。1H-NMR（500MHz,CDCl3）δ：7.95（1H,d,J= 8.0 Hz,H-6），7.54（1H,t,J= 8.0 Hz，H-4)，7.02（1H，d，J= 8.0 Hz，H-3），6.95（1H，t，J= 8.0 Hz，H-5）；13C-NMR（CDCl3,125MHz） δ：175.0（C= O），162.2（C-2），137.1（C-4），131.0（C-6），119.6（C-5），117.9（C-3），111.3（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道對照基本一致，確定化合物11為水楊酸。

化合物12：白色粉末（甲醇），EI-MSm/z：163[M+H]+。1H-NMR（500MHz ,CDCl3）δ：7.90（1H,d,J=12 Hz,H-5），7.63（1H,m,H-7），7.34（2H，m，H-6,H-8），4.85（1H,s,H-3）；13C-NMR（125MHz,CDCl3）δ：166.0（C-2），117.3（C-3），168.4（C-4），117.6（C-4a），124.6（C-5），125.3（C-6)，133.9（C-7），117.6 （C-8），155.2（C-8a）。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道對照基本一致，確定化合物11為4-羥基香豆素。

化合物13：白色無定形粉末（甲醇），ESIMSm/z：354[M]+。1 H-NMR（500 MHz ,DMSO-d6）δ：7.63（1H,d,J= 15.5 Hz,H-7），7.04（1H,d,J= 2.0 Hz,H-2)，6.93（1H,dd,J= 2.0, 8.0 Hz,H-6)，6.75（1H,d,J = 8.0 Hz,H-5），6.34（1H,d,J = 15.5 Hz,H-8)，4.85（1H,m,H-4'），4.36（1H,m,H-3'），4.27（1H,m,H-5'），2.10～ 2.20（2H,m,H-2'），1.95～ 2.07（ 2H,m,H-6'）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：79.5（C-1），38.8（C-2），79.4（C-3)，79.5（C-4），66.0（C-5），48.4（C-6），178.3（C-7），127.8（C-1'），115.2（C-2'），146.7 C-3'），149.5（C-4'），116.4（C-5'），122.6（C-6'），147.1（C-7'），115.3（C-8'），169.0（C-9'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道的隱綠原酸數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 14：白色無定形粉末（甲醇），ESIMSm/z：354[M]+。1 H-NMR（500 MHz, MeOD）δ：7.91（1H,d,J= 16.0 Hz,H-7），7.62（1H,s,H-2），7.36（1H,d,J= 8.0 Hz,H-6)，7.34（1H,d,J= 8.0 Hz,H-5)，7.32（1H,d,J= 16.0 Hz,H-8），4.85（1H,m,H-3'），3.30（1H,m,H-5'），3.29（1H,m,H-4'）。13C-NMR(150 MHz,MeOD) δ：75.4（C-1），36.7（C-2），73.0（C-3），74.5（C-4），68.2（C-5），41.5（C-6），178.3（C-7），127.9（C-1' ），115.1（C-2'），146.8（C-3' ），149.4（C-4'），116.4（C-5'），122.8（C-6'），146.8（C-7'），115.8（C-8'），169.0（C-9'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道的綠原酸數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 15：白色無定形粉末（ 甲醇），ESIMSm/z：355[M+H]+。1 H-NMR（500 MHz, MeOD）δ：7.56（1H,d,J= 15.5 Hz，H7），7.03（1H,d,J=2.0 Hz，H-2），6.95（1H,dd,J= 1.5，8.0 Hz，H-6），6.75（1H,d,J= 8.0 Hz，H-5），6.23（1H,d,J=16.0 Hz，H-8），5.32（1H,m,H-5'），4.15（1H,m,H-3'），3.72（1H,m,H-4'），2.10～2.20（2H,m,H-2'），2.04～2.09（2H,m,H-6'）。13C-NMR（150 MHz,MeOD）δ: 73.4（C-1），48.4（C-2），71.3（C-3），71.9（C-4），71.2（C-5），38.2（C-6），177.0（C-7），127.7（C-1′），115.1（C-2′），146.8（C-3′），149.5（C-4′），116.4（C-5′），122.9（C-6′），147.0（C-7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道的新綠原酸數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 16：白色無定形粉末（甲醇），ESI-MSm/z：180[M]+。1 H-NMR（500 MHz,MeOD）δ：7.52（ 1H,d,J= 15.9 Hz, H-7），7.04（1H,d,J= 1.6 Hz,H-2），6.94（1H,dd，J= 1.6，8.1 Hz,H-6），6.77（1H,d,J= 8.1 Hz,H-5），6.20（1H,d,J= 15.9 Hz,H-8）。13C-NMR (150 MHz,MeODδ：172.0（C-9），149.7（C-4），147.0（C-3），146.5（C-7），128.0（C-1），123.1（C-6），116.7（C-8），116.5（C-2），116.2（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道的咖啡酸數(shù)據(jù)基本一致。

化合物17：白色粉末（ 甲醇），ESI-MSm/z:539[M＋Na]+。1 H-NMR（600 MHz, MeOD）δ: 7.62（1H,d,J= 15.7 Hz, H-7′′），7.59（1H, d,J= 16.2 Hz,H-7′), 7.05（2H, brs, H-2′, 2′′），6.96（2H, m, H-6′,6′′），6.78（1H, brs, H-5′′），6.76（1H, brs,H-5′），6.35（1H, d,J= 15.9 Hz, H-8′′），6.24（1H,d,J= 15.9 Hz, H-8′），5.42（1H, m, H-3），5.37（1H,m, H-5），3.97（1H, d,J=4.6 Hz, H-4），2.02～2.32（4H, m, H-2, 6）；13C-NMR（150 MHz, MEOD）δ: 177.2（COOH），168.8（C-9′′），168.3（C-9′），149.6（C-4′′），149.5（C-4′），147.2（C-7′′），147.0（C-7′），146.7（C-3′′, 3′），127.7（C-1′′），127.9（C-1′），123.0（C-6′′），122.9（C-6′），116.4（C-5′′, 5′），115.5（C-2′′，2′），115.2（C-8′′），115.0 （C-8′），74.6（C-1），72.4（C-5），72.0（C-3），70.8（C-4），37.5（C-6），35.9（C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道為異綠原酸 A數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 18：淡黃色粉末 （甲醇），ESI-MSm/z:517[M＋H]+。1 H-NMR（600 MHz, MeOD）δ: 7.62（1H, d,J= 15.7 Hz, H-7′′），7.54（1H, d,J= 15.8 Hz, H-7′ ), 7.05（1H, brs, H-2′′），6.99（1H,brs, H-2′），6.92（2H, m, H-6′，6′′），6.75（1H, brs, H-5′′），6.75（1H, brs, H-5′），6.33（1H, d,J= 16.0Hz, H-8′′），6.24（1H, d,J= 16.0 Hz, H-8 ′），5.68（1H, brs, H-5），5.16（1H, m,H-4），4.40（1H, m, H-3），2.25（4H, m, H-2, 6）；13C-NMR（150 MHz, MEOD）δ: 176.0（COOH），167.0（C-9′′），167.0 （C-9′），148.4（C-4′′,4′），146.5（C-7′′），146.2（C-7′），145.2（C-3′′, 3′），126.3（C-1′′），126.4（C-1′），121.7（C-6′′, 6′），115.3（C-5′′, 5′），113.8（C-2′′, 2′），113.3（C-8′′, 8′），74.8（C-1），74.3（C-4）, 68.0（C-5），67.6（C-3），38.0（C-6），37.0 （C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道為異綠原酸 C數(shù)據(jù)基本一致。