近親婚育子代基因突變伴不育癥1例報(bào)道

冷旭，潘伯臣

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心男科，沈陽(yáng) 110004）

近親結(jié)婚攜帶相同等位基因的致病突變概率極高，子代極易形成等位基因突變的純合子從而致病。PLEKHG2基因致病突變和22q11.2微缺失綜合征（22q11.2 deletion syndrome，22q11.2DS）可以分別在相關(guān)文獻(xiàn)中查閱到，但兩者同時(shí)存在于一個(gè)患者身上，且患者為近親婚育的后代，尚未見報(bào)道。本文對(duì)1例同時(shí)伴有PLEKHG2基因致病突變和22q11.2DS的病例進(jìn)行報(bào)道。

1 臨床資料

1.1 一般情況

患者，男，32歲，身高 163 cm，體質(zhì)量 55 kg，頭圍52 cm，學(xué)歷為小學(xué)畢業(yè)。其妻31歲，二人結(jié)婚10年，婚后1年足月剖宮產(chǎn)生育第一胎，為女嬰，出生后16 d夭折，診斷為特殊性先天性心臟?。ň唧w不詳，未行相關(guān)基因檢測(cè)）。3年后解除避孕至今未孕，2020年8月首次于我院進(jìn)行生育前檢查，溝通中發(fā)現(xiàn)患者略有智力障礙及張力不協(xié)調(diào)，未進(jìn)行系統(tǒng)的智力測(cè)驗(yàn)及神經(jīng)系統(tǒng)檢查?；颊咝呐K彩超檢查顯示心臟結(jié)構(gòu)正常，男科查體器官發(fā)育正常，性能力正常，生殖系統(tǒng)檢查未見精索靜脈曲張，未見生殖系統(tǒng)炎癥等表現(xiàn)，男方精液化驗(yàn)結(jié)果為少弱畸形精子癥，藥物治療后明顯好轉(zhuǎn)，精子數(shù)量正常但活力弱，正常形態(tài)精子百分率徘徊于0～1，最終診斷弱精子癥、畸形精子癥。女方生殖系統(tǒng)初步檢查未見異常。

1.2 家族史

患者父母系近親結(jié)婚且為三代以內(nèi)旁系血親關(guān)系（姨表兄妹），生育2個(gè)女孩（患者的大姐、二姐），1個(gè)男孩（三弟，即患者本人）。大姐、二姐均正常生育，子女智力發(fā)育均正常，學(xué)習(xí)成績(jī)較好?；颊弑救寺杂兄橇φ系K，小學(xué)勉強(qiáng)畢業(yè)。因患者父母雙方及2位姐姐均拒絕行全外顯子基因檢測(cè)，因此未形成該基因的遺傳系譜圖，病史關(guān)系見圖1。

圖1 家族病史關(guān)系圖

1.3 基因檢測(cè)

抽取患者外周血3 mL，EDTA抗凝，行全外顯子基因檢測(cè)。通過Covaris超聲破碎儀將基因組DNA打斷，并篩選350 bp大小的片段；片段兩端通過酶促連接dNTP修補(bǔ)成平末端，即待測(cè)DNA片段；待測(cè)DNA片段兩端加上測(cè)序用接頭序列并純化去除酶、dNTP及雜片段；通過PCR將加好接頭并完成純化的待測(cè)DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增富集；通過純化去除酶、dNTP及雜片段后進(jìn)行定量及片段長(zhǎng)度質(zhì)檢；在測(cè)序儀內(nèi)將待測(cè)片段結(jié)合至Flowcell芯片上并通過橋式PCR進(jìn)行成簇反應(yīng)大量富集；通過Illumina平臺(tái)邊合成邊測(cè)序技術(shù)對(duì)待測(cè)DNA片段序列進(jìn)行測(cè)定；對(duì)測(cè)序下機(jī)數(shù)據(jù)量、測(cè)序深度等參數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)；通過生信分析軟件Vardict對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比對(duì)；針對(duì)檢出變異設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增后進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證。

1.4 基因測(cè)序結(jié)果

基因檢測(cè)報(bào)告結(jié)果顯示，位于19號(hào)染色體的PLEKHG2基因純合突變，位于22號(hào)染色體約2.9 Mb的大片段缺失，為22q11.2DS。見圖2。

圖2 基因檢測(cè)報(bào)告

1.5 治療與結(jié)局

患者夫妻雙方及雙方父母均要求供精人工授精或供精試管嬰兒助孕，生育非男方血親關(guān)系的子代，避免異?；騻鬟f給下一代。

2 討論

PLEKHG2基因編碼Rho家族特異性鳥嘌呤核苷酸交換因子RhoGEF，進(jìn)而激活RhoGTPases。RhoGTPases是GTPase的1個(gè)亞家族，能催化三磷酸鳥苷水解為二磷酸鳥苷，在非活性形式下，RhoGTPases與二磷酸鳥苷結(jié)合。被RhoGEF活化后，RhoGTPases構(gòu)象改變從而誘導(dǎo)二磷酸鳥苷釋放并與三磷酸鳥苷結(jié)合。在激活狀態(tài)下，RhoGTPases可以與不同的下游效應(yīng)物相互作用［1-2］。RhoGTPases最典型的作用之一為促進(jìn)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重新排列，以促進(jìn)細(xì)胞極化和遷移。PLEKHG2發(fā)生突變可能導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白重排受損，從而導(dǎo)致小頭畸形伴智力發(fā)育障礙。腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良和獲得性小頭畸形伴或不伴肌張力障礙是一種常染色體隱性遺傳的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征為嚴(yán)重精神發(fā)育遲緩、肌肉張力減退、出生后小頭畸形、間歇性肌張力障礙和腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良，其他特征可能包括眼球震顫和癲癇發(fā)作［3-5］。通?；颊叩母改妇鶠殡s合子，即各攜帶了1個(gè)等位基因的致病突變，父母為無癥狀攜帶者，子代有25%的患病概率，50%的概率為無癥狀攜帶者，25%的概率既不患病也非攜帶者。本例患者其父母拒絕行基因檢測(cè)，故基因變異來源未知，因其父母為近親表兄妹，極有可能為相同變異基因攜帶者，生育子代出現(xiàn)該基因的純合變異。

22q11.2DS是一組具有臨床異質(zhì)性的多系統(tǒng)疾病，主要臨床表現(xiàn)包括先天性心臟病（室間隔缺損、法洛四聯(lián)癥等）、腭部畸形（腭咽閉合不全、腭裂等）、胃腸道異常、免疫缺陷、顱面畸形（低位耳、瞼裂傾斜或缺損、耳前凹陷等）、發(fā)育落后、學(xué)習(xí)障礙和骨骼系統(tǒng)異常（脊柱側(cè)凸、多指畸形等），不同患者的臨床表現(xiàn)差異較大。根據(jù)具體臨床表現(xiàn)，先天性心臟病、免疫缺陷和低血鈣等一系列表現(xiàn)被稱為DiGeorge綜合征（DiGeorge syndrome，DGS）；先天性心臟病、免疫缺陷和腭部畸形等一系列表現(xiàn)被稱為Velocardiofacial 綜合征（Velocardiofacial syndrome，VCFS），DGS和VCFS是22q11.2DS的常見表現(xiàn)形式［6-8］。22q11.2DS的遺傳方式為常染色體顯性遺傳。患者檢測(cè)到的變異可能為新生突變，也可能為遺傳自雙親之一。先證者的兄弟姐妹患病風(fēng)險(xiǎn)取決于其父母基因的攜帶情況。如果父母一方患病，其每個(gè)子女的遺傳風(fēng)險(xiǎn)為50%，若先證者父母不患病，則先證者的兄弟姐妹患病的風(fēng)險(xiǎn)都較低（約1%）?；颊呙總€(gè)孩子有50%的概率遺傳致病基因突變。本病例患者心臟彩超結(jié)果回報(bào)正常，目前無心臟病史，但是該家族生育先天性心臟病患兒的概率明顯高于正常人，考慮與該位點(diǎn)的缺失有極強(qiáng)的相關(guān)性。

該患者精液檢查結(jié)果表現(xiàn)為少弱畸形精子癥，是否與PLEKHG2基因突變和22q11.2微缺失有關(guān)仍需進(jìn)一步研究證實(shí)，如此大的片段缺失極有可能造成某些未知的生精基因異常。

近親結(jié)婚攜帶相同等位基因的致病突變概率極高，子代極易形成等位基因突變的純合子從而致病。因此，禁止近親結(jié)婚無論是從倫理上還是從遺傳學(xué)上均有重要意義，建議已經(jīng)近親結(jié)婚生育的子代常規(guī)進(jìn)行遺傳學(xué)咨詢，盡早檢測(cè)出致病性突變，有利于臨床相關(guān)疾病的診斷和早期預(yù)防治療。